基因检测及骨髓切片活检与血清TK1 在骨髓增生异常综合征与溶血性贫血鉴别诊断中的研究

2023-10-18 04:09卢金金曹天星
实验与检验医学 2023年3期
关键词:切片骨髓血清

卢金金,曹天星

(河南省中医药大学第二附属医院河南省中医院,河南 郑州 450002)

MDS 是一种血液系统恶性疾病,与造血干细胞恶性克隆有关,多表现为造血障碍或衰竭、血细胞减少等[1-3],临床证实MDS 与白血病相关,约三成MDS 患者易进展至急性髓系白血病[4-5]。MDS 在老年群体中多发,其病因复杂尚未明确,可能与长期接触强电磁场、辐射或有机溶剂有关[6-7],目前临床诊断MDS 的方式主要为骨髓细胞形态学及核型检测[8-9]。MDS 临床征象表现为贫血,但与HA、巨幼细胞贫血(Megaloblastic anemia,MA)、再生障碍性贫血(Aplastic anemia,AA)等形态学相似,HA 是由红细胞存活率下降且灭亡速度超过骨髓代偿而导致的贫血,是一种血液系统良性疾病[10-11],在临床上与低原始细胞MDS 核型表现相似,故难以鉴别,给临床诊断带来困难。为了让患者早诊断、早治疗、预后佳,对MDS 及HA 进行准确鉴定至关重要[12-13]。血清TK1 是细胞质中与细胞增殖相关的一种关键酶,其表达量与细胞增殖特性相关,其浓度上升预示着肿瘤细胞的增多[14-15]。目前,通过血清TK1 诊断MDS 与HA 的文章稀缺,使用ROC 曲线对其诊断价值做出分析的文章尚无,故本研究通过探究基因检测、骨髓活检切片及血清TK1 在MDS 与HA 患者中的诊断价值,为其临床诊断及治疗提供科学依据,现将研究结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 将本院2016 年1 月至2020 年12月收治的63 例MDS 患者与57 例HA 患者作为研究对象,回顾性分析其临床资料。纳入标准:

(1)MDS、HA 的诊断标准均符合2008 年WHO 分类标准;(2)均经病理确诊为MDS 或HA患者;(3)临床资料完整;(4)贫血患者检查前未服用影响造血功能药物或行输血。排除标准:(1)合并认知异常、精神疾病;(2)合并其他恶性肿瘤;(3)合并妊娠、哺乳期妇女;(4)合并感染疾病;(5)合并重要脏器功能异常。

1.2 方法 收集所有患者性别、年龄、血红蛋白、血小板计数等一般临床资料。

骨髓活检切片检查:骨髓活检针(B65-01 型)进行局部麻醉后行骨髓穿刺术,取长度≥0.3 cm骨髓标本,脱水包埋处理后切片3 μm 厚,染色后镜下观察样本中是否存在幼红细胞簇异常分布、幼稚前体细胞异常定位(Nomallocalization of immature precursors,ALIP)、单圆核及多圆核病态巨核细胞情况。

基因检测:取2~3 mL 的骨髓标本,通过乙二胺四乙酸进行抗凝处理,依据2:1 比例加入Tizol提取mRNA 后逆转录cDNA,采用荧光定量PCR检测患者基因突变、融合、数量异常增多情况。MDS组与HA 组涉及的经典基因异常主要为N-RAS 基因、FMS 样的酪氨酸激酶3(Fms-like tyrosine kinase 3,FLT3)、急性粒细胞性白血病1 基因(Acute Myeloid Leukemia 1 Gene,AML1)、逆转录病毒结合位点-1(Cotropicvirusintegrationsite 1,EVI-1)、TEL 基因(ETV6 基因)、混合谱系白血病(Mixed lineage leukemia,MLL)基因、人体抑癌基因p53、干扰素调节因子1(Interferon regulatory factor-1,IRF-1)基因突变、融合或异常表达等。

采集所有患者清晨空腹肘静脉血3 mL,采用3 500 r/min 离心10 min 后分离上层血清,将其放置在-70℃冰箱内保存待测。采用酶免疫点印迹化学发光法检测所有患者血清TK1 水平(检测结果如图1-4),仪器为LAS4000 型化学发光成像分析仪,试剂盒购自上海语纯生物科技有限公司,所有操作过程按照说明书由同一组检验人员严格执行。

图1 TK1 染色阴性

图2 TK1 染色弱阳性

图3 TK1 染色阳性

图4 TK1 染色强阳性

1.3 统计学处理 采用SPSS 22.0 统计软件进行数据分析,计数资料用n(%)表示,进行χ2检验;符合正态分布的计量资料用()表示,行t 检验,采用ROC 曲线分析血清TK1 对区分MDS 与HA 的诊断价值,以P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者一般临床特征资料比较 MDS 组与HA 组患者性别、年龄、血红蛋白差异无统计学意义(P>0.05),MDS 组患者血小板计数显著低于B组,组间差异有统计学意义(P<0.05),见表1。

表1 两组患者一般临床特征资料比较结果

2.2 两组患者基因检测分析比较 MDS 组患者基因异常30 例(47.62%),HA 组患者基因异常0 例(0.00%),差异有统计学意义(χ2=36.190,P=0.000<0.05)。

2.3 两组患者骨髓活检切片特征比较 MDS 患者骨髓活检分析结果显示,出现32 例幼红细胞簇异常分布、44 例ALIP 与34 例单圆核与多圆核病态巨核细胞,HA 组出现29 例幼红细胞簇异常分布与5 例ALIP,未发现单圆核与多圆核病态巨核细胞;两组患者ALIP 与单圆核与多圆核病态巨核细胞的组间差异有统计学意义(P<0.05),见表2。

表2 两组患者骨髓活检切片特征比较结果

2.4 两组患者血清TK1 水平比较 MDS 组血清TK1 水平显著高于HA 组,组间差异有统计学意义(P<0.05),见表3。

表3 两组患者血清TK1 水平比较结果

2.5 血清TK1 对区分MDS 与HA 的诊断价值分析ROC 曲线分析显示,血清TK1 区分MDS 与HA诊断的AUC 为0.936,敏感度为93.7%,特异度为93.0%,数据结果均有统计学意义(P<0.05),见表4、图5。

表4 血清TK1 对区分MDS 与HA 的诊断价值分析结果

图5 血清TK1 对诊断MDS 与HA 的ROC 曲线

3 讨论

MDS 患者存在白血病的征兆,已成为危害患者生命健康的恶性疾病,大量患者在MDS 病发后进展至急性髓系白血病[16-18],且部分患者因误诊、错诊等因素导致错过最佳的对症治疗机会,预后情况较差[19]。MDS 与HA 临床表现缺乏特异性,两类患者均存在贫血、乏力情况,常规使用药物治疗并不能达到理想的治疗效果,且对于部分骨髓中原始细胞低的患者来说,增加了诊断的难度[20-21]。本研究通过分析基因检测、骨髓活检切片与血清TK1 在诊断MDS 与HA 患者中的区别,旨在为两类患者的鉴别提供有效参考和依据,为患者治疗及预后保驾护航。

本研究显示两组患者一般资料中血小板计数的差异有统计学意义(P<0.05),且MDS 患者比HA患者血小板计数显著要低,这是由于MDS 患者的临床表现多为贫血症状,或为外周血三系中的任意系减少、异常,故部分MDS 患者血小板会显著降低,HA 患者的临床表现亦为贫血,或外周血三系减少,但血小板计数的降低并不是它主要特点,故MDS 患者血小板计数低于HA 患者,但单纯血小板这一数据的检测结果,并不能作为诊断患者具体病情的科学指标。本研究中MDS 患者基因异常检出率为47.62%,而HA 患者基因异常检出率为0.00%,表面MDS 患者基因异常情况较HA 多,基因异常在临床中多与恶性细胞繁殖、分化或恶性疾病进展、预后密切相关,故基因检测能够作为鉴别MDS 与HA 的有效辅助手段,能够一定程度上提升MDS 患者的检出概率。在MDS 患者诊断中,骨髓活检切片能够体现病态细胞分布异常情况与原始细胞在骨髓小梁旁呈现的簇状定位[22],本研究结果显示MDS 患者骨髓活检切片中出现ALIP、单圆核与多圆核病态巨核细胞的概率显著高于HA 患者,但两组患者幼红细胞簇异常分布情况差异无统计学意义(P>0.05),由此表明MDS 患者采取该种方式对MDS 粒系、巨核系病态的检出率较高,能够作为临床辅助诊断的有效方式。TK1 是胸苷激酶(Thymidine kinase,TK)的一种,主要在机体增殖细胞中表现,存在于脾脏、骨髓等组织中,通过细胞质进行表达,且与DNA 的作用机制相关。本研究中MDS 患者的血清TK1 表达量显著高于HA 患者,且TK1 对诊断MDS 与HA 的敏感度较高,预示着能够将血清TK1 作为鉴别诊断MDS的有效标志物,究其原因在于,随着肿瘤中DNA的大量合成,肿瘤细胞增殖与分化的速度加快,TK1 表达量突增[23-24]。MDS 是一种造血干细胞恶性多克隆性疾病,该类患者骨髓及其余造血组织细胞异常,故TK1 在该类患者机体内水平较高,能够将其作为细胞异常增殖动力学标志物,为临床治疗提供参考依据。

综上所述,MDS 患者基因检测中基因异常及骨髓活检切片检查中出现ALIP 和单圆核与多圆核病态巨核细胞的概率均高于HA 患者,且MDS患者血清TK1 表达量高于HA 患者,故基因检测、骨髓活检切片及血清TK1 均能作为辅助诊断区分MDS 与HA 的可靠指标,值得临床参考借鉴。但本研究存在一定的不足,例如样本数量有限,在今后的研究中将会进一步扩大样本容量,使研究结果更具有说服力。

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