墨旱莲复方提取物的活性及洗发乳的研制*

岳欣怡，李筱玲，李玉静，赵沛沛，杨开飞，李思雨，徐欢欢

(商洛学院生物医药与食品工程学院，陕西 商洛 726000)

随着社会压力不断增大和生活节奏的加快，环境的不断恶化，以及不良的饮食习惯，中国的脱发患者越来越多，据不完全统计，脱发患者约占成年人群体的20%～30%[1]。中医认为头发的生长有赖于肾气的充盛，中药在洗发护发领域发挥的重要作用，越来越受到重视[2]。由墨旱莲和女贞子配伍的二至丸是补益肝肾的代表方，具有 “发白返黑，健腰膝”之功效。 已有证据显示，二至丸治疗脂溢性脱发及青年男性脱发收效良好[3-4]。墨旱莲具有活血、促进毛发生长、乌发、止血、抗菌、抗炎等作用[5]；女贞子具有降血脂、活血、抑菌等作用，能增强酪氨酸酶的活性和黑色素的合成，促进皮囊生长、保护损伤细胞等的作用[6]。本文在二至丸基础上增加侧柏叶，以增加抑菌、抗氧化、祛屑、防脱及生发等功能[7]，以墨旱莲、女贞子、侧柏叶复方提取物为主原料，配以月桂醇聚醚硫酸酯钠及椰油酰胺丙基甜菜碱等表面活性剂，研制了一款温和、无刺激的绿色天然防脱护发洗发乳。

1 实 验

1.1 主要材料、试剂与仪器

墨旱莲(批号20200519)，江苏传承中药有限公司；女贞子(批号：B20191101-01)，湖北楚风中药饮片有限公司；侧柏叶(批号20201102)，遵义市银花药业有限公司；芦丁(批号：100080-201811)，没食子酸(批号：110831-201906)，人参皂苷 Re(批号：110754-202028)中国食品药品检定研究院；无水乙醇(分析纯)，常州市启迪化工有限公司；月桂醇聚醚硫酸酯钠(SLES)，月桂基硫酸铵(K12 A)，椰油脂肪酸单乙醇酰胺(CMEA)，椰油酰胺丙基甜菜碱(CAB)，瓜尔胶(C-14S)，苯甲酸钠，聚季铵盐-47，邻苯二甲酸烷基酰胺(TAB-2)，无水柠檬酸，江苏省海安石油化工厂。

KH5200E超声清洗仪，昆山禾创超声仪器有限公司；HH-66恒温水浴锅，江苏金坛市环宇科学仪器厂，RE52-99旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；DNJ-4，粘度计，上海力辰仪器科技有限公司；S-114万分之一电子天平，丹佛仪器(北京)有限公司；UV-1500紫外分光光度计，上海美析仪器有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 墨旱莲复方提取物有效成分含量测定

取墨旱莲、女贞子、侧柏叶各70 g，粉碎，过4号筛后混匀，用8倍量的90%乙醇回流提取2次，每次2 h；残渣再用8倍量的水提取2 h，将3次提取液混合，减压浓缩后，冷冻干燥，置密封干燥器内保存备用，即得墨旱莲复方提取物干浸膏。每克干浸膏相当于混合原药5.1 g。

(1)墨旱莲复方提取物总多酚含量测定

①对照品溶液的制备

精密称取没食子酸对照品18.8 mg，置于50 mL棕色容量瓶内，加水溶解并定容至刻度，摇匀后精密量取5 mL，置25 mL容量瓶，加水稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

②标准曲线的绘制

精密吸取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL分置于5个25 mL容量瓶内，福林酚试剂法显色，于759 nm处测定吸光度[8]。以吸光度为y轴，浓度为x轴，绘制标准曲线。得线性回归方程：y=0.817 7x+0.059 9，R2=0.984 2。

③总多酚含量测定

精密称取复方提取物干浸膏0.10 g，置100 mL容量瓶，加水使溶解后定容，摇匀，即得供试品溶液。精密量取供试品溶液1.0 mL于25.0 mL容量瓶中，福林酚试剂法显色，在759 nm波长处测定吸光度。

(2)墨旱莲复方提取物总黄酮含量测定

①对照品溶液的制备

精密称取芦丁对照品10.0 mg，用60%乙醇溶解并定容至25 mL，精密量取上述溶液10 mL置于25 mL容量瓶中，加60%乙醇定容至刻度，摇匀，即得[9]。

②标准曲线的绘制

取7个25 mL的容量瓶分别精密加入对照品试液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，NaNO2-Al(NO3)3显色法显色。于510 nm波长处测定吸光度，以相应试剂为空白对照[10]。y轴为吸光度，x轴为浓度，建立标准曲线。得线性回归方程：y=0.6414x+0.008 3，R2=0.990 4。

③总黄酮含量测定

精密称取墨旱莲复方提取物浸膏约0.10 g，置50 mL容量瓶中，加入60%乙醇40 mL，超声(250 W，53 KHZ)溶解10 mim，冷却后用60%乙醇定容至刻度，摇匀，即得供试品溶液。精密量取供试品溶液1.0 mL于25.0 mL容量瓶中，NaNO2-Al(NO3)3法显色，在510 nm波长处测定吸光度。

(3)墨旱莲复方提取物总皂苷含量测定

①对照品溶液的制备

精密称定取人参皂苷Re对照品6.0 mg，置5.0 mL容量瓶中，以甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，精密移取2.0 mL至10.0 mL容量瓶中，用甲醇定容，即得到人参皂苷Re对照品溶液。

②标准曲线的绘制

精密吸取人参皂苷Re对照品溶液0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL、0.7 mL、0.8 mL分别置于试管中，香草醛-高氯酸法显色，在555 nm处测定各溶液吸光度[10]，以测定的吸光度为y轴，对照品质量为x轴，建立标准曲线。得线性回归方程：y=1.078x+0.0366，R2=0.9844。

③总皂苷含量测定

精密称取样品浸膏约0.10 g ，置于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，即得供试品溶液。精密量取供试品溶液1.0 mL于25.0 mL容量瓶中，显色，在510 nm波长处测定吸光度。

1.2.2 墨旱莲复方体外抗氧化试验

抗氧化能力试验均以VC作为阳性对照。

(1)清除1，1-二苯-2-苦肼自由基(DPPH)实验

取6支试管分别精密加入浓度为0.02 g/mL、0.04 g/mL、0.05 g/mL、0.06 g/mL、0.08 g/mL、0.10 g/mL的墨旱莲复方干浸膏乙醇(60%)溶液，再加浓度为0.09 9 mmoL/L的DPPH乙醇溶液2.5 mL，摇匀，在暗处室温放置30 min后，于514 nm处测定吸光度[11]，结果记为Ai。

药物空白对照：待测液加2.5 mL 无水乙醇溶液，同样条件测定吸光度值，记为Aj。DPPH对照品在同样条件下测定吸光度，结果记为A0。

(2)清除ABTS自由基实验

精密称取0.0384 g ABTS粉末于 10.0 mL的容量瓶中，加水溶解定容，配制成ABTS储备液(7 mmoL/mL)，备用。另取5个试管分别加入浓度为0.1 mg/mL、0.3 mg/mL、0.5 mg/mL、0.7 mg/mL、0.9 mg/mL 的墨旱莲复方提取物(60%)乙醇溶液1 mL，再依次加入9.0 mL的ABTS 工作液后，立即摇均，反应2～10 min，于734 nm波长处测定吸光度[12]，结果记为Ai。

药物空白对照：待测样品加入 9.0 mL的无水乙醇，同样条件下测定吸光度值，记为Aj。取1 mL 60%乙醇加9 mL的ABTS溶液，反应后测定吸光度，结果记为A0。

(3)清除羟基自由基(-OH)实验

取5个试管分别加入浓度为0.1 mg/mL、0.3 mg/mL、0.5 mg/mL、0.7 mg/mL、0.9 mg/mL的墨旱莲复方提取物(60%)乙醇溶液0.2 mL，再依次加入1 mL 0.15 mmoL/L的硫酸亚铁(FeSO4)溶液、1 mL 6 mmol/L H2O2、0.4 mL 2 mmol/L的水杨酸和0.4 mL蒸馏水，在37 ℃的温度下，冷却水浴1 h，以纯水调零，紫外分光光度计510 nm下测定其吸光度[13]，结果记为Ai。以纯水代替H2O2测得对应待测物吸光度值，记为Aj。60%乙醇溶液测液测得参比溶液吸光度A0。

1.2.3 墨旱莲复方洗发乳的制备

(1)主表面活性剂的筛选

配方中所选用的主要表面活性剂应具有高泡性、适宜粘度、良好的稳定性、柔顺性及保湿性、低毒甚至无毒等特点。SLES是一种性能优良的阴离子表面活性剂，具有优良的去污、乳化和发泡性能，有良好的增稠特性和发泡能力；K12 A作为一种常见的阴离子表面活性剂，具有较好的选择性和起泡性能[14]。因此在预实验基础上选择SLES和K12A按一定配比添加，将其总添加量定在30%。以泡沫高度为指标考察两种表面活性剂最佳配比，配比设计为SLES量0%～30%，K12A量30%～0%。

(2)辅助表面活性剂的添加及配方

墨旱莲中药洗发乳中除了要添加主要表面活性剂外还需添加辅助表面活性剂，以降低刺激性，增加稳定性、粘稠度、泡沫及其他配伍性能。查阅文献[15]，现在使用最多的辅助表面活性剂主要有：CDEA、AOS、CAB 、CMEA、APG等。本实验选用CMEA和CAB作为主要辅表面活性剂。实验考察了添加6%～10%的CAB量对洗发乳粘度的影响，以确定CAB的用量。

(3)稳定剂、调理剂、增稠剂的选择

TAB-2具较好的分散稳定性能，常作为悬浮稳定剂，防止产品分层，其对产品的泡沫力和粘度没有影响，并可改善头发梳理性能[16]。本实验选择TAB-2作为稳定剂。洗发乳中加入瓜尔胶(TC-14-S)、聚季铵盐-47可调理洗发乳粘度和保湿性能，并使原料性能更稳定，瓜尔胶(TC-14-S)常与聚季铵盐-47复配改善梳理性[17]。因此本实验以瓜尔胶(TC-14-S)常与聚季铵盐-47复配为调理剂。预实验中发现设NaCl加入量对洗发乳的粘度影响较大，因此增稠剂选择NaCl，并以粘度为指标考察0.5%～2%NaCl的影响。

(4)墨旱莲复方提取物用量的确定

通过改变墨旱莲复方提取液的添加量，以洗发乳的外观、气味、pH值、稳定性(耐寒耐热)、泡沫高度、粘稠度为指标，考察0%、1%、3%、5%、7%、8%墨旱莲复方提取液对洗发乳性能的影响，以确定中药提取液的添加量。

(5)墨旱莲复方洗发乳的制备

1931年，学成后的赵忠尧，回到中国，回到清华，担任物理系教授。他开设并创办了中国第一个核物理课程、第一个核物理实验室，成为中国原子能研究的开拓者。

将AESA、K12A、甘油与适量蒸馏水加于烧杯①中，水浴加热到70 ℃，并搅拌直至溶解、混匀；用适量水溶解聚季铵盐-47后，加入CAB、CMEA、C-14S、TAB-2，于70 ℃的水浴锅中搅拌烧杯②中；将烧杯①中的液体加入烧杯②中，充分搅拌均匀，待温度降至40 ℃时，加入防腐剂、中药提取液(墨旱莲、女贞子、侧柏叶提取液)、茉莉香精，充分混匀，加入NaCl饱和溶液增稠，用柠檬酸调节pH，加入去离子水至100 g。

1.2.4 墨旱莲复方洗发乳质量评价

依据《洗发液、洗发膏》GB/T 29679-2013质检标准进行耐寒、耐热，起泡性，pH，有效物的测评。并与以国际名牌产品各项性能进行对比评价[17]。

2 结果与讨论

2.1 墨旱莲复方提取物有效成分含量测定结果

分别采用福林酚试剂法、NaNo2-Al(NO3)3显色法、香草醛-高氯酸法测定墨旱莲复方提取物中总多酚、总黄酮类、总皂苷类成分含量。结果墨旱莲复方提取物中总多酚含量为29.68%，总黄酮含量69.344%，总皂苷含量为17.468%。

2.2 墨旱莲复方体外抗氧化试验结果

2.2.1 清除1，1-二苯-2-苦肼自由基(DPPH)实验结果

由图4可知墨旱莲复方提取物浓度在0.02～0.1 g/mL时，对DPPH自由基的清除率随浓度增大而增大，从0.06 g/mL后清除率开始高于Vc，药液浓度到0.06 g/mL后清除率达到最大值并趋于平缓。

图1 复方提取物浓度对DPPH清除率的影响

2.2.2 清除ABTS自由基实验结果

由图5可知墨旱莲复方提取物浓度在0.1～0.9 mg/mL时，对ABTS自由基的清除率随浓度增大而增大且持续上升，在该浓度区间时，墨旱莲复方提取物的清除率比Vc小。

图2 复方提取物浓度对ABTS清除率的影响

2.2.3 清除羟基自由基(-OH)实验结果

由图7可知墨旱莲复方提取物浓度在0.1～0.9 mg/mL时，对-OH自由基的清除率随浓度增大而增大，在浓度0.3 mg/mL到拐点后，缓慢增加，在该浓度区间时，复合物的清除率比Vc小，还未见明显平缓趋势。

图3 复方提取物浓度对羟基自由基清除率的影响

2.3 墨旱莲复方洗发乳的制备结果

2.3.1 主表面活性剂的筛选

主表面活性剂SLES量0%～30%，K12A量30%～0%，制备的空白洗发乳，评价结果见表1。由表1可知：SLES与K12A开始逐渐增大，当主表面活性剂用量SLES 20%、K12A 10%时泡沫高度达到了最大值，泡沫细腻，洗发乳的的泡沫性能最好。

表1 主表面活性剂筛选结果

2.3.2 辅助表面活性剂筛选结果

辅表面活性剂CMEA为1.5%，其他表面活性剂用量固定，CAB量加入为6%～10%，制备的空白洗发乳，评价结果见表2。由表2可知，随着CAB用量的增加，洗发乳粘度增大，用量增大到8%后，粘度增大不明显，为节约成本，CAB加入量定为8%。

表2 辅助表面活性剂CAB筛选结果

2.3.3 稳定剂、调理剂、增稠剂选择结果

依据文献资料邻苯二甲酸酰胺(TAB-2)用量确定为1%；调理剂瓜尔胶用量为0.2%、聚季铵盐-47用量为0.7%。增稠剂NaCl用量筛选结果见表3。由表3可知，随着NaCl用量加大，粘度也越大，但增大到2%时，粘度有所下降，原因可能是氯化钠浓度过大使束胶体系破坏，体系黏度下降。故NaCl加入加入量选择1.8%。

表3 增稠剂NaCl用量筛选结果

2.3.4 墨旱莲复方提取物用量确定结果

改变墨旱莲复方提取液的添加量，洗发乳的外观、气味、pH值、稳定性(耐寒耐热)、泡沫高度、粘稠度等指标也相应发生改变，墨旱莲复方提取物用量实验结果见表4。由表4可知，随着中药提取液用量的增加洗发乳的颜色越来越深，pH基本保持不变，泡沫高度变化不大，洗发乳稳定性及粘度逐渐下降，当墨旱莲复方提取液添加量超过7%时，出现分层、变稀的现象。综合考虑各个因素，以墨旱莲复方提取液添加量为7%最为适宜。

表4 中药提取液对洗发乳配伍性能的影响

2.3.5 墨旱莲复方洗发乳的制备

通过上面几个影响因素的筛选，得到适宜粘度的墨旱莲复方洗发乳配方，各组分百分比如下：AESA 20%、K12 A 10%、甘油4%、聚季铵盐-47 0.7%、CAB 8%、CMEA 1.5%、C-14S 0.2%、TAB-2 1%、墨旱莲复方提取液7%、NaCl 1.8%、苯甲酸钠0.1%、茉莉香精0.2%滴、柠檬酸适量、纯水至100 g。参照1.2.4(5)项下方法制备墨旱莲复方洗发乳，并对其进行理化进行测定，并与市售洗发乳进行比较，结果见表5。

表5 墨旱莲复方洗发乳性能测试结果

3 结 论

(1)采用紫外分光光度法，分别测定了墨旱莲复方提取物中总多酚、总多糖、总皂苷含量，方法学考察线性关系较好。福林酚试剂法测定提复方取物中总多酚含量为29.68%，NaNO2-Al(NO3)3显色法测定复方中总黄酮含量为69.344%，香草醛-高氯酸法测定复方提取物中总皂苷含量为17.468%

(2)通过体外抗氧化实验考察墨旱莲复方的抗氧化作用。结果表明，墨旱莲复方提取物在对ABTS自由基、DPPH自由基、羟自由基的清除能力在一定范围随着复方提取物浓度的增大而增强。

(3)通过主辅表面活性剂、辅助表面活性剂、增稠剂等影响因素的筛选，得到适宜粘度的墨旱莲复方洗发乳配方：AESA 20%、K12A 10%、甘油4%、聚季铵盐-47 0.7%、CAB 8%、CMEA 1.5%、C-14S 0.2%、TAB-2 1%、墨旱莲复方提取液7%、NaCl 1.8%、苯甲酸钠0.1%、茉莉香精0.2%滴、柠檬酸适量。

(4)本文研制了一种以月桂醇聚醚硫酸酯钠(SLES)配伍月桂基硫酸铵(K12A)为主表面活性剂的无硅油氨基酸型洗发乳。墨旱莲、女贞子、侧柏叶具有防脱发、抑菌等功能，在加入量不超过7%时与其他组分能很好的相容，经过理化指标测定，表明该氨基酸型墨旱莲复方洗发乳泡沫丰富、粘度适中、稳定性较好。