子宫肌瘤患者血清lncRNA MIAT 和lncRNA XIST 的表达及临床意义

李玉萍 马 会 禹 航

子宫肌瘤是育龄妇女最常见的子宫良性肿瘤之一，发病率高，且有20%～40% 的子宫肌瘤患者会发生恶性病变[1-2］，其主要临床症状包括月经过多、异常子宫出血、不孕、反复自然流产和其他盆腔疾病[3］。此外，子宫肌瘤是导致子宫切除的主要事件，严重影响着患者的生活质量[4］。超声是评估子宫肌瘤的一线成像技术，它可提供形态学特征信息，例如病变的囊性区域、回声、边界和血管化[5］。然而，超声容易受到患者肠道气体的干扰影响检查结果。血清标志物对于肿瘤的早期筛查具有效率高、创伤小等优点[6］，因此，深入挖掘新的诊断子宫肌瘤的血清标志物具有重要的意义。长链非编码RNA（long non coding RNA，lncRNA）心肌梗死相关 转 录 本（myocardial infarction associated transcript，MIAT） 、lncRNA X 染色体失活特异转录本（ X inactive specific transcript，XIST）作为近年来在肿瘤中研究较为火热的lncRNA，已有研究报道，lncRNA MIAT 在子宫肌瘤组织中呈高表达状态[7］；lncRNA XIST 在平滑肌瘤组织中的表达水平显著高于匹配的子宫肌层组织[8］。以上研究表明lncRNA MIAT、lncRNA XIST 可能参与子宫肌瘤的发生与发展。目前关于lncRNA MIAT、lncRNA XIST 在子宫肌瘤患者血清中的表达以及将lncRNA MIAT、lncRNA XIST 作为血清标志物来诊断子宫肌瘤的研究较少。因此，本研究主要探究lncRNA MIAT、lncRNA XIST 在子宫肌瘤患者血清中的表达及对子宫肌瘤的诊断价值，旨在为子宫肌瘤的临床诊治提供新的理论参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018 年5 月至2022 年5 月在张家口市妇幼保健院就诊的120 例子宫肌瘤患者作为子宫肌瘤组，年龄21～58 岁，平均（43.5±2.5）岁；身体质量指数（body mass index，BMI）19.21～23.57 kg/m2，平均（21.35±3.28） kg/m2。其中年龄＜40 岁54 例，≥40岁66 例；肌瘤最大径＜5 cm 42 例，≥5 cm 78 例；肌瘤数目分为＜2 个44 例，≥2 个76 例；无乳腺增生43 例，有乳腺增生77 例；未绝经65 例，绝经55 例；流产次数＜2 次50 例，≥2 次70 例；无妇科疾病52 例，有妇科疾病68 例。纳入标准：①经影像学检查确诊为子宫肌瘤，且符合子宫肌瘤的诊断标准；②经检查无其它内分泌性疾病；③经检查无其它脑部疾病；④经检查无其它免疫性疾病；⑤经检查无严重肝肾疾病。排除标准：①近3 个月接受过激素治疗或者其它治疗的患者；②同时患有子宫内膜异位症的患者；③患有严重精神疾病的患者。同时选择同时期在本院进行体检的120 例健康体检者作为对照组，对照组无子宫肌瘤，其他纳入排除标准同子宫肌瘤组，全为女性，年龄20～59 岁，平均（43.0±3.0）岁，BMI 19.73～23.94 kg/m2，平均（21.52±3.71） kg/m2。两组患者年龄、BMI 比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究已经获得本院伦理委员会的批准（伦理审批号：20180412001），所有参与者均知情并签署了知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 血液样本的采集 分别采集子宫肌瘤组患者入院当日以及对照组体检当日的空腹静脉血5 mL，利用高速离心机在4℃条件下以3 000 r/min 的转速离心20 min，收集血清并置于-80℃冰箱保存，用于后续lncRNA MIAT、lncRNA XIST 表达水平的检测。

1.2.2 实时荧光定量聚合酶链式反应（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）检测血清中lncRNA MIAT、lncRNA XIST 表达水平 Trizol 试剂（货号：A3180）购自北京康瑞纳生物科技有限公司；Power SYBR™ Green PCR master mix（货号：4367659）购自朗智（上海）生物科技有限公司。使用Trizol 试剂提取血清中的总RNA。将1 μg RNA 逆转录为cDNA 后，使用Power SYBR™ Green PCR master mix 进行qRTPCR 以分析lncRNA MIAT、lncRNA XIST 表达水平。GAPDH 作为lncRNA MIAT、lncRNA XIST 的内 参 基因。使用2-ΔΔCt方法计算lncRNA MIAT、lncRNA XIST的相对表达量。引物序列见表1。

表1 qRT-PCR引物序列

1.3 统计学方法 采用SPSS 24.0 对所有数据进行统计学分析。符合正态分布的计量资料均以±s表示，采用独立样本t检验比较两组样本间的差异；计数资料以例表示，采用χ2检验；用Pearson 相关性分析血清lncRNA MIAT 与lncRNA XIST 水平的相关性；多因素logistic 回归分析子宫肌瘤患病的危险因素；用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线评价血清lncRNA MIAT、lncRNA XIST 对子宫肌瘤的诊断价值。P＜0.05 表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组研究对象基线资料比较 两组对象年龄、是否绝经比较差异无统计学意义（P＞0.05）；两组对象有无乳腺增生、流产次数、有无妇科疾病比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 两组对象基线资料比较

2.2 两组研究对象血清中lncRNA MIAT、lncRNA XIST 水平比较 与对照组比较，子宫肌瘤组血清中lncRNA MIAT、lncRNA XIST 水平升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 各组血清中lncRNA MIAT、lncRNA XIST水平比较（xˉ± s）

2.3 子宫肌瘤患者血清lncRNA MIAT、lncRNA XIST表达水平与临床病理特征的单因素分析 不同年龄、绝经状态的子宫肌瘤患者血清lncRNA MIAT、lncRNA XIST 表达水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。肌瘤最大径≥5 cm、肌瘤数目≥2 个、有乳腺增生、流产次数≥2 次、有妇科疾病的子宫肌瘤患者血清中lncRNA MIAT、lncRNA XIST 表达水平明显高于肌瘤最大径＜5 cm、肌瘤数目＜2 个、无乳腺增生、流产次数＜2 次、无妇科疾病的子宫肌瘤患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

表4 子宫肌瘤患者血清lncRNA MIAT、lncRNA XIST表达水平与临床病理特征的关系（±s）

表4 子宫肌瘤患者血清lncRNA MIAT、lncRNA XIST表达水平与临床病理特征的关系（±s）

临床病理特征年龄（岁）例数lncRNA MIAT t值0.746 P值0.457 lncRNA XIST t值0.476 P值0.635＜40≥40肌瘤最大径（cm）＜5≥5肌瘤数目（个）＜2≥2乳腺增生无有绝经否是流产次数（次）＜2≥2妇科疾病54 66 42 78 44 76 43 77 65 55 50 70 1.54±0.50 1.61±0.52 1.38±0.44 1.69±0.55 1.41±0.46 1.68±0.54 1.46±0.47 1.65±0.53 1.52±0.49 1.65±0.53 1.47±0.48 1.66±0.53 3.148 2.782 2.765 1.395 2.013 2.231 0.002 0.006 0.007 0.166 0.046 0.028 1.46±0.43 1.50±0.48 1.31±0.41 1.57±0.49 1.32±0.43 1.57±0.48 1.34±0.41 1.56±0.49 1.44±0.45 1.53±0.47 1.35±0.41 1.57±0.50 2.929 2.854 2.495 1.070 2.557 2.472 0.004 0.005 0.014 0.287 0.012 0.015无有52 68 1.46±0.47 1.67±0.54 1.36±0.42 1.57±0.49

2.4 子宫肌瘤患者血清中lncRNA MIAT、lncRNA XIST 表达水平的相关性 Pearson 相关性分析显示，子宫肌瘤患者血清中lncRNA MIAT 与lncRNA XIST 表达水平呈正相关（r=0.458，P＜0.001）。见图1。

图1 子宫肌瘤患者血清中lncRNA MIAT、lncRNA XIST表达水平的相关性

2.5 子宫肌瘤患病影响因素的多因素logistic 回归分析 以单因素分析中有差异有统计学意义的乳腺增生（≥2 次=1，＜2 次=0）、流产次数（有=1，无=0）、妇科疾病（有=1，无=0）、lncRNA MIAT、lncRNA XIST 表达水平（高表达=1，低表达=0）为自变量，是否患病（未患病=0，患病=1）为因变量进行多因素logistic 回归分析。结果显示，lncRNA MIAT 高表达、lncRNA XIST 高表达是子宫肌瘤发生的危险因素（P＜0.05）。见表5。

表5 子宫肌瘤患病影响因素的多因素logistic回归分析

2.6 血清lncRNA MIAT、lncRNA XIST 对子宫肌瘤的诊断价值 以是否患子宫肌瘤为状态变量（是=1，否=0），以血清lncRNA MIAT、lncRNA XIST 水平（连续变量）为检验变量，并利用SPSS 软件分析二者联合的预测概率，构建ROC 曲线，血清lncRNA MIAT 诊断子宫肌瘤的AUC 为0.817（95%CI：0.763～0.871），灵敏度62.5%，特异度为91.7%，截断值为1.45；血清lncRNA XIST 诊断子宫肌瘤的AUC 为0.776（95%CI：0.718～0.835），其灵敏度为71.7%，特异度为86.7%，截断值为1.35；两者联合诊断子宫肌瘤的AUC 为0.846（95%CI：0.794～0.898），其 灵敏度、特异度 分别为61.2%、97.5%，两者联合诊断的AUC 显著大于lncRNA XIST 单独诊断的AUC（Z=1.734，P=0.041），两者联合诊断的AUC 与lncRNA MIAT 单独诊断的AUC比 较 差 异 无 统 计 学 意 义（Z=0.746，P=0.228）。见图2。

图2 血清lncRNA MIAT、lncRNA XIST 诊断子宫肌瘤的ROC曲线

3 讨论

子宫肌瘤是最常见的女性疾病。统计资料显示，40%～80% 的育龄妇女被诊断患有子宫肌瘤[9］。子宫肌瘤是由于子宫肌层、平滑肌细胞层的单克隆转化而产生的，可引起多种并发症，如不孕、流产、出血、疼痛、痛经和月经过多等[10］。除子宫切除术外，大多数治疗通常只能提供暂时的缓解，并非对所有患者都有效。此外，该病对妇女的生产力和旷工率也有明显的影响[11］。因此，挖掘新的血清生物标志物用于诊断子宫肌瘤，对于早期干预该疾病具有重要意义。

lncRNA 是长度＞200 nt 的非编码RNA，其不具有编码蛋白质的能力，但它们在骨肉瘤、子宫肌瘤等肿瘤的发病机制中发挥关键作用[12］。lncRNA MIAT 是一种与心肌梗死易感性相关的lncRNA[13］。据报道，lncRNA MIAT 在卵巢癌组织中高表达，沉默lncRNA MIAT 可抑制卵巢癌细胞增殖、迁移与侵袭[14］；甲状腺癌组织lncRNA MIAT 表达水平上调，lncRNA MIAT 在组织中的表达水平与甲状腺癌患者UICC 分期、淋巴结转移相关[15］；lncRNA MIAT 在肝癌患者血清中高表达，血清lncRNA MIAT 水平可作为诊断肝癌的生物学标志物，其在评估肝癌的恶性进展、手术疗效以及预测肿瘤复发方面具有潜在临床应用价值[16］；lncRNA MIAT 高表达与胃癌患者的肿瘤分期、淋巴结转移显著相关[17］。以上研究表明lncRNA MIAT 在卵巢癌、甲状腺癌、肝癌、胃癌等肿瘤中具有促进肿瘤进展的作用。已发现lncRNA XIST 在多种肿瘤中异常表达，如胰腺癌组织中的lncRNA XIST 表达量增高与肿瘤分化程度具有负相关性[18］；宫颈癌组织中lncRNA XIST 的表达明显上调，且与淋巴结转移、组织大小及临床分期之间存在相关性[19］；沉默lncRNA XIST 可抑制结直肠癌细胞增殖和转移[20］。以上研究表明lncRNA XIST 在胰腺癌、宫颈癌、结直肠癌等肿瘤中发挥着癌基因的作用。而关于lncRNA MIAT、lncRNA XIST 在子宫肌瘤患者血清中的表达鲜有报道。本研究利用qRT-PCR 检测了子宫肌瘤患者血清中lncRNA MIAT、lncRNA XIST 水平，结果显示，与对照组比较，子宫肌瘤组血清中lncRNA MIAT、lncRNA XIST 水平升高。提示lncRNA MIAT、lncRNA XIST 可能参与了子宫肌瘤的进展。相关研究显示，绝经状态、肌瘤最大径、肌瘤数目、乳腺增生等因素与子宫肌瘤的高发病率有关[21-22］。本研究分析了子宫肌瘤患者血清lncRNA MIAT、lncRNA XIST 表达水平与临床病理特征的关系，结果显示，肌瘤最大径≥5 cm、肌瘤数目≥2 个、有乳腺增生、流产次数≥2 次、有妇科疾病的子宫肌瘤患者血清中lncRNA MIAT、lncRNA XIST 表达水平明显高于肌瘤最大径＜5 cm、肌瘤数目＜2 个、无乳腺增生、流产次数＜2 次、无妇科疾病的子宫肌瘤患者，提示子宫肌瘤患者血清中lncRNA MIAT、lncRNA XIST 表达水平升高与子宫肌瘤的发生发展有关。Pearson 相关性分析显示，子宫肌瘤患者血清中lncRNA MIAT、lncRNA XIST 表达水平呈正相关，多因素logistic 回归分析结果显示，lncRNA MIAT 高表达、lncRNA XIST 高表达是子宫肌瘤发生的危险因素，临床上可根据上述指标的变化，对患者的病情做出有效的判断。

为了进一步探究lncRNA MIAT、lncRNA XIST 是否对子宫肌瘤有诊断价值，本研究进行了ROC 曲线分析结果显示，血清lncRNA MIAT、lncRNA XIST 诊断子宫肌瘤的AUC 分别为0.817、0.776，截断值分别为1.45、1.35，两者联合诊断子宫肌瘤的AUC 为0.846，且特异性更高，有助于临床医生对患者是否患子宫肌瘤做出快速诊断。当患者血清lncRNA MIAT 表达水平高于1.45 且lncRNA XIST 表达水平高于1.35 时，结合其它临床指标，可对疾病做出快速的判断，及时干预，阻碍子宫肌瘤的进展，以改善预后。

综上所述，子宫肌瘤患者血清中lncRNA MIAT、lncRNA XIST 表达水平升高，二者与子宫肌瘤发生发展显著相关，二者联合对子宫肌瘤具有较高的辅助诊断价值。然而，样本量不足是本研究的不足之一，可能会导致实验结果存在一定的误差。因此，后期将会进一步收集大量样本来完善和补充本研究结果。此外，lncRNA MIAT、lncRNA XIST 作为子宫肌瘤可能的诊断标志物，切除子宫肌瘤后lncRNA MIAT、lncRNA XIST 是否有变化，以及lncRNA MIAT、lncRNA XIST 的半衰期是多少，其升高是否有新的子宫肌瘤产生，这将也是本研究后续研究的重要方向之一。