分析合肥市某地区4 663 例体检女性HPV 感染情况

罗 倩 陈 琳 丁 锦

据统计，我国每年新发宫颈癌病例占全世界的20%[1］。研究显示，宫颈癌是女性恶性肿瘤中常见类型，在中国每年新增子宫颈癌病例约14 万，死亡病例约3.7 万[2-4］。人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）本质是一群无包膜的双链DNA 病毒，主要通过性生活传播[5］，就目前已知基因型别有200 多种[6］。在某个致病因素下，HPV 的DNA 可以整合到宿主细胞的DNA 上，从而影响细胞的基因调控，遂即可能导致宫颈发生病变甚至癌变[7-8］，且按照致癌潜能，可将HPV 主要分为高危型和低危型[9］。在不同条件下，HPV 基因型别的感染率有差异，与不同的影响因素密切相关，如环境因素、社会因素及个人因素等[10］。本研究主要通过对2022 年合肥市某地区不同年龄段的常规体检女性HPV 感染结果进行综合分析，为该地区女性HPV疫苗接种的选择提供相关建议，同时也为我国产HPV疫苗继续研发提供理论参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2022 年1～12 月中国科学技术大学附属第一医院南区健康管理中心常规体检要求筛查宫颈HPV 的女性4 663 例。年龄24～72 岁，平均（43±11）岁。排除标准：月经期、该时间段因已知阳性再次复查仍为阳性的体检人员。纳入标准：要求初次在本中心体检人员且已有性生活史、无宫颈疫苗接种史、无盆腔化疗放疗史、无妇科手术史、近1 周无阴道用药史、近3 d 无同房、无流产史、无妇科疾病史、无妊娠哺乳期、近3 个月无激素用药史、无自身免疫性疾病史。按照年龄分为5 组（24 岁～、31 岁～、41 岁～、51岁～和61～72 岁组），本研究已通过中国科学技术大学附属第一医院伦理委员会审批（伦理号：2023-RE-142）。

1.2 方法

1.2.1 标本采集与保存 由妇科医师进行样本采集，用无菌扩阴器（扬州美林医疗器械有限公司）暴露宫颈，用棉拭子擦拭过多的分泌物，宫颈刷在宫颈口转动3～5 周采集足量的宫颈脱落细胞，然后迅速放进样本管（安徽同科生物科技有限公司）中，密闭送检。样本应立即检测，如果样本不能立即检测，在2～8℃条件下保存不应超过1 d，或在（-20±5）℃条件下保存不应超过28 d。-70℃可长期保存（24 个月），尽量避免反复冻融样本（冻融次数不超过10 次）。采用泡沫箱加冰袋密封进行运输（运输时间不超过5 d）。

1.2.2 检验原理 基于实时荧光定量聚合酶链（polymerase chain reaction， PCR）技术，通过实时荧光PCR仪，在4 种PCR 反应混合液中分别采用4 种荧光通道检测HPV 基因。该检测体系含有尿嘧啶糖基化酶和脱氧尿嘧啶防污染措施，用来排除假阳性结果。以人β-珠蛋白（HBB）作为内参对样本的采集、脱氧核糖核酸（DNA）的提取及PCR 抑制因素进行监控。

1.2.3 实验步骤 首先，通过检验科医师先取出试剂盒中各组分，室温解冻，待其温度达室温后混匀备用，根据待测样本数、阴性对照数量和阳性对照数量，按比例（每反应PCR 反应液43.5 μL+酶混合液1.5 μL）取相应量的PCR 反应液和酶混合液，分别充分振荡混匀制备成HPV16/58/35/HBB-PCR 反应混合液、HPV18/33/51/66-PCR 反应混合液、HPV45/59/39/56-PCR 反应混合液和HPV31/52/68/53-PCR 反应混合液，在离心机中低速离心30 s，每反应分别按照PCR 反应液43.5 μL+酶混合液1.5 μL 分装至荧光PCR 反应管中，2～8℃保存备用。其次，将悬浮于细胞保存液中的样本振荡混匀后，取1 mL 细胞保存液于1.5 mL 离心管中，12 000 r/min 离心5 min，弃上清（如有明显溶血，可用生理盐水漂洗数次，直至无明显溶血）。加入100 μL DNA 提取液，充分混匀，100℃孵育10 min。12 000 r/min 离心2 min，2～8℃保存备用。取阳性对照和阴性对照各20 μL 至1.5 mL 离心管，分别加入100 μL DNA 提取液，充分混匀，100℃孵育10 min，12 000 r/min离心2 min，2～8℃保存备用。再次，取处理过的待检样本、阳性对照、阴性对照各5 μL，分别加到4 种PCR反应混合液的PCR 反应管中，盖上管盖（如有气泡，可用手指弹击，去除气泡），在离心机中低速离心30 s 至管壁无明显液珠。最后，将PCR 反应管放入PCR 扩增仪样品槽，按对应顺序设置待检样本、阳性对照、阴性对照。TK6000 选择FAM 通道、JOE 通道、ROX 通道、CY5 通道。设置Reaction Volume 为50。扩增条件为50℃ 2 min，95℃ 10 min；95℃ 15 s，60℃ 1 min（收集荧光），循环45 次；38℃ 5 s 终止，反应结束后记录和保存结果。

1.3 统计学方法 采用SPSS 26.0 统计软件进行数据分析。正态分布计量资料用±s表示；计数资料以频数和/或率表示，组间比较采用χ²检验，同时对数据进行Cochran-Armitage 线性趋势χ²检验。以P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV 感染率 4 663 例筛查宫颈HPV 的女性中，实际HPV 阳性人数为393 例，HPV 阳性人数感染率为8.43%（393/4 663）。各年龄段之间，HPV 阳性人数感染率差异有统计学意义（χ²=13.070，P=0.011），HPV 的3 种感染模式感染率差异有统计学意义（χ²=27.731，P＜0.001）。Cochran-Armitage 趋势检验结果显示，Z=-2.726，P=0.006。见表1、2。

表1 各年龄组HPV感染率分布情况

表2 各年龄组HPV的3种感染模式[例（%)]

2.2 HPV 多重感染 多重感染总人数为69 例，在多重感染中，二重感染率13.23%（52/393）及检出率1.12%（52/4 663）最高。多重感染率在61～72 岁组最高3.16%（6/190）。各年龄段之间，多重感染率差异无统计学意义（χ²=3.474，P=0.482）。见表3、4。

表3 HPV多重感染检出情况

表4 各年龄组多重感染率分布情况

2.3 HPV 亚型感染排位 HPV 感染情况检出率排名前3 的为52 型（1.91%，89/4 663）、53 型（1.24%，58/4 663）及16 型（0.94%，44/4 663），即是所谓的优势亚型。在各个年龄组，排名前3 的一重感染型别和多重感染型别皆有差别，均以52 型为主，而24 岁～组则增加了58 和59 型，61～72 岁组增加了53、56 型；即使同一个年龄组，排名前3 的一重感染型别和多重感染型别也略有差别，包括少见的51 型和66 型。见表5。

表5 各年龄组HPV优势亚型分布情况

3 讨论

众所周知，HPV 基因型别分布受多种因素影响，因此进行不同地区的HPV 感染率以及感染常见亚型的分析，对HPV 的流行病学及疫苗接种有重要意义，由于缺乏抗HPV 病毒的特异性药物，HPV 感染更多需要接种疫苗来预防[11］。

本研究中，HPV 感染率首先是61～72 岁组中最高，其次是51 岁～组，再次24 岁～组，可看出数据的分布存在首尾2 个高峰，与袁建晖等[12］研究结果基本符合。分析61～72 岁组及51 岁～组感染率高的主要原因是HPV感染有隐匿性特点，与其绝经后激素水平、阴道内环境、机体免疫力、潜伏病毒再激活或病毒持续感染等相关，应重视此类人群的筛查，做好预防工作[13］。分析24 岁～组感染率较高的主要原因是性生活较多，增加感染的概率。本研究最小年龄为24 岁，虽缺乏小于24 岁的研究数据，但对低年龄段的女性保护也要引起重视。此外，各个年龄段中，HPV 感染率是有差异的，感染的模式也存在差异，可见年龄是一重要影响因素，Cochran-Armitage 检验发现，随着年龄的增加，HPV 感染有上升趋势，考虑与高年龄段可能缺少疫苗的保护有关，因此，应尽可能降低高年龄段的感染率。

本研究HPV 多重感染中主要为二重感染，其次为三重感染，最少的为四重感染。由此能看出随着感染型别增加，感染人数逐渐减少，四重感染有3 人，其年龄分别为35 岁、44 岁和58 岁，多重HPV 感染率在61～72 岁组中最高，但是多重感染在各个年龄之间差异无统计学意义，与茅书为等[14］研究结果基本符合，因此对于HPV 多重感染要积极治疗。

本研究HPV 感染率第一位的亚型为52、53 和16。与Zhang 等[15］研究结果基本符合。在多重感染中，HPV 16 以混合感染方式出现，伴有HPV 53 和HPV 51。由此看出，HPV 52 是合肥地区重点防治的亚型，可针对性选用含有52 型的预防性HPV 疫苗，且主要以单一感染为主。李见等[16］调查徐州地区重点防治亚型为HPV 16，罗志粦等[17］调查莆田地区重点防治亚型为HPV 52，马丽娜等[18］调查黑龙江地区重点防治亚型也为HPV 16。优势亚型的差异考虑原因主要为多种因素，其中最主要的是因素是地域环境差异[19］。赵雪莲等[20］研究表明，年龄、民族、受教育程度、职业、经济条件等重要因素影响着宫颈癌筛查和HPV 认知水平。本地仍需加大宣传的力度以及途径，尽管人们目前对HPV 疫苗认知率欠缺，但愿意接种HPV 疫苗人数所占比例相对较高[21-22］。

综上所述，选择性应用预防性HPV 疫苗是必要的，也能为我国女性HPV 疫苗继续研发提供新思路。本文不足之处，后期可随访宫颈疫苗接种情况，来进一步评价疫苗接种情况对不同年龄段感染率，多重感染分布以及优势亚型的影响。