高效液相色谱法测定饮料中8种人工合成着色剂的含量

郭璞

摘 要：建立了固相萃取法结合高效液相色谱法测定饮料中8种着色剂含量的方法。结果表明，8种着色剂在0.5～50.0 μg·mL-1浓度范围内线性关系良好，相关系数均大于0.999；精密度实验RSD在0.7%～2.2%；平均加标回收率为91.67%～93.79%，RSD≤3.8%。对20批不同类型饮料中8种人工合成著色剂进行测定，结果显示饮料中色素均未超出规定限值。本方法简便、高效，可用于同时测定饮料中8种人工合成着色剂。

关键词：饮料；高效液相色谱法；人工合成着色剂

Determination of 8 Synthetic Colorants in Beverages by High Performance Liquid Chromatography

Abstract： A method for the determination of eight colorants in beverages by solid-phase extraction coupled with high performance liquid chromatography （HPLC） was established. The results showed that the linearity of the eight colorants was good in the concentration range of 0.5～50.0 μg·mL-1 with the correlation coefficients greater than 0.999; the RSD of the precision experiments were in the range of 0.7%～2.2%; and the average spiked recoveries were in the range of 91.67%～93.79% with the RSD≤3.8%. Eight artificial colorants in 20 batches of different types of beverages were measured， and the results showed that none of the pigments in the beverages exceeded the prescribed limit. This method is simple and efficient， and can be used for the simultaneous determination of 8 synthetic colorants in beverages.

Keywords： beverage; high performance liquid chromatography; synthetic colorant

饮料作为常见饮品，深受市场消费者欢迎，但外观多彩的饮料大多添加了人工合成着色剂。食用过量人工合成着色剂对人体健康有害[1-5]，因此通过有效方法测定饮料中人工合成着色剂，对维护消费者权益以及确保市场饮料安全具有重大意义。本文建立了液相色谱法[6-10]测定饮料中人工合成着色剂的方法，并对检出限、精密度、回收率进行了方法确认，结果显示该方法适用于不同类型饮料中人工合成着色剂的同时测定，为其他类型食品中人工合成着色剂的测定提供了参考。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

LC 300型高效液相色谱仪（带二极管阵列检测器），珀金埃尔默股份有限公司；HZY6202电子天平（十万分之一），华志科学仪器有限公司；PHS-3C pH计，上海仪电科学仪器股份有限公司；Dura Elit 10超纯水系统，和泰仪器有限公司；C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），纳谱分析技术（苏州）有限公司；WX1506萃取柱（150 mg/6 mL），博纳艾杰尔。

甲醇，优级纯，购于国药集团化学试剂有限公司；苋菜红、胭脂红、赤藓红、新红、诱惑红、柠檬黄、日落黄和亮蓝标准溶液，购于坛墨质检标准物质中心。

1.2 样品来源

于市场采集不同类型饮料样品共20批，见表1。

1.3 实验方法

1.3.1 标准溶液制备

精密量取苋菜红、胭脂红、赤藓红、新红、诱惑红、柠檬黄、日落黄和亮蓝标准储备溶液适量，用水稀释配制成浓度为0.5 μg·mL-1、2.0 μg·mL-1、10.0 μg·mL-1、20.0 μg·mL-1和50.0 μg·mL-1的混合标准系列溶液。

1.3.2 样品处理

准确称取5 g样品放入50 mL容量瓶中（固体饮料加适量水溶解）定容至刻度，然后加入萃取柱中（提前经5 mL水、5 mL甲醇活化）。容量瓶经水冲洗3次后分别加入小柱，再分别用3 mL水、3 mL甲醇进行淋洗，随后用洗耳球吹干小柱。用4 mL氨化甲醇（2%）进行洗脱并收集洗脱液，洗脱液氮吹近干，用水定容至5 mL，微孔滤膜过滤，进样分析。

1.3.3 高效液相色谱测试条件

色谱柱：C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱温：25 ℃；进样量：10 μL；流动相：0.02 mol·L-1乙酸铵-甲醇，梯度洗脱条件见表2。检测波长：苋菜红、新红、胭脂红、日落黄、诱惑红和赤藓红为520 nm，柠檬黄为415 nm，亮蓝为610 nm。

2 结果与分析

2.1 系统适应性

取标准溶液和加标样品溶液（20 mg·kg-1），按照1.3.3项下条件进样，8种着色剂的色谱峰能完全分离，见图1。

2.2 线性考察和检测限、定量限

取1.3.1项下配制好的系列浓度标准溶液进样测定，以日落黄、柠檬黄、苋菜红、胭脂红、亮蓝、赤藓红、诱惑红和新红的浓度（μg·mL-1）为横坐标X，峰面积为纵坐标Y。用最小二乘法进行线性回归，得到各元素的标准曲线和相关系数。以仪器10倍信噪比為定量限，以仪器3倍信噪比为检出限。结果见表3，人工合成着色剂在0.5～50.0 μg·mL-1浓度范围内线性关系良好，相关系数大于0.999 0，定量限及检出限均满足分析要求。

2.3 精密度实验

取具有代表性的饮料样品，按照样品制备项下方法制备供试品溶液，按照高效液相色谱测试条件分别重复进样6次，测定8种着色剂含量，并分别计算对应的RSD。结果显示，苋菜红、胭脂红、赤藓红、新红、诱惑红、柠檬黄、日落黄和亮蓝RSD分别为0.7%、1.6%、2.0%、1.2%、1.1%、0.8%、1.0%、1.2%、2.2%，精密度满足实验要求。

2.4 加样回收率实验

取具有代表性的饮料样品18份，精确称量后，加入低、中、高（5 mg·kg-1、20 mg·kg-1、50 mg·kg-1）3种不同浓度混合标准品溶液，按照样品制备项下方法制备供试品溶液，按照高效液相色谱条件测定，计算8种着色剂的回收率，结果见表4。苋菜红、胭脂红、赤藓红、新红、诱惑红、柠檬黄、日落黄和亮蓝的平均回收率分别为93.26%、93.79%、91.67%、91.79%、91.80%、92.31%、92.06%和92.74%，RSD分别为2.3%、1.1%、2.8%、3.8%、2.9%、2.8%、2.4%和3.7%，结果符合分析要求。

2.5 实际样品测定

取样品YL1～YL20，精密称定5 g，进样测定，结果见表5。《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》（GB 2760—2014）规定苋菜红的限值为0.5 g·kg-1，胭脂红的限值为0.6 g·kg-1，新红的限值为0.05 g·kg-1，诱惑红的限值为0.1 g·kg-1，柠檬黄的限值为0.1 g·kg-1，日落黄的限值为0.1 g·kg-1，亮蓝的限值为0.02 g·kg-1。由表中数据可知，样品YL-17、YL-18、YL-20未检测到上述8种着色剂；20批次饮料中均未检测到赤藓红；20批饮料样品中8种着色剂含量均未超出国家标准限值。

3 结论

本文采用固相萃取法处理样品，建立了高效液相色谱法同时测定样品中苋菜红、胭脂红、赤藓红、新红、诱惑红、柠檬黄、日落黄和亮蓝含量的方法。该方法准确度、精密度符合要求，适用于饮料样品中8种着色剂含量的测定。测定20批饮料样品，结果表明饮料中着色剂的添加水平整体在安全范围内。

参考文献

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