重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1,Re-5+Re-4)免疫鸡和鸭后抗体消长规律

陈永忠,李俊平,李启红,杨承槐,汪 洋,夏业才

(1.青海省西宁市畜牧兽医站,青海西宁810003;2.中国兽医药品监察所,北京海淀100081)

禽流感(AI)是由A型流感病毒引起的一种禽类传染病。根据致病性的不同将禽流感分为高致病性禽流感(HPAI)和低致病性禽流感(IPAI),HPAI被世界动物卫生组织(OIE)列为A类传染病,我国将其列为一类动物疫病[1]。近几年来,禽流感在世界各地反复出现,2004年亚洲发生了高致病性禽流感,2006年底和2007年初东南亚又出现疫情,并发现了人感染禽流感。我国养禽业也一直受到禽流感的威胁。因此,它不仅给畜牧业造成了巨大的损失,而且给人们的公共卫生安全带来了严重的威胁。

疫苗免疫仍是预防禽流感的有效手段之一,被一些国家和地区采用[2-4]。有关禽流感疫苗的免疫效果及抗体消长规律国内学者做了一些研究工作[5-8],但作为我国现阶段使用的主要疫苗,重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1,Re-5株+Re-4株。以下简称禽流感二价苗)免疫鸡、鸭的抗体动态变化尚未见报道。本试验取该疫苗3批,按H5N1的免疫方法和程序免疫商品鸡、鸭,定期采血测定血清HI抗体效价,研究禽流感二价苗免疫鸡、鸭后HI抗体消长规律及其差异,以期为该疫苗的推广使用提供科学的试验依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物 1周龄海蓝褐鸡,购自北京平谷种鸡场;1周龄北京麻鸭,购自北京平谷种鸭场。

1.2 疫苗 重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1,Re-5株+Re-4株)三批,批号分别为200807、200808 、200809,哈药集团生物疫苗有限公司生产。

1.3 血凝抑制(HI)试验用抗原 禽流感病毒H5亚型HI试验抗原(H5,Re-4),批号:200702,哈尔滨维科生物技术开发公司生产;禽流感病毒H5亚型HI试验抗原(H5Re-5),批号:200801,哈尔滨维科生物技术开发公司生产。

1.4 标准阳性血清 哈尔滨维科生物技术开发公司生产。

1.5 仪器 一次性V型血凝板,微量移液器,微量振荡器,离心机。

1.6 主要试剂 0.1 mol/L PBS(pH 7.2),阿氏液,1%鸡红细胞悬液(现用现配)。

1.7 分组和接种 将新购进的1周龄海蓝褐鸡和北京麻鸭分别随机分成4组,每组10只。待鸡和鸭禽流感母源抗体消失后,将禽流感二价苗免疫接种,每批次一组对应颈部皮下注射0.5 mL/只,鸭首免3周后加强免疫1次,剂量 0.5 mL/只。

1.8 采血 鸡鸭免疫后每2周翅静脉采血(1 mL/只)并分离血清。

1.9 HI抗体效价测定 按照“重组禽流感病毒H5亚型双价灭活疫苗(H5N1,Re-5株+Re-4株)制造及检验试行规程”中血凝抑制试验(HI)操作技术进行。

2 结果

2.1 疫苗免疫鸡后的HI抗体消长情况 禽流感二价苗可有效刺激产生HI抗体,而且不同批次的疫苗所致的HI抗体效价的消长规律基本一致。免疫后2周,HI抗体效价达到4.1 log2～4.7 log2,第4周各组 HI抗体效价均达到最高值 8.8 log2～10.1 log2。各组HI抗体效价从第6周开始下降,第8周以后下降相对较缓慢。第16周内能够维持较高的抗体水平,第20周以后抗体水平衰减到4 log2以下。不同批次的疫苗免疫组各个采样点的抗体效价t检验差异不显著(P＞0.05)。

2.2 疫苗免疫鸭后HI抗体消长情况 不同批次的禽流感二价苗均能有效地刺激鸭产生HI抗体,而且HI抗体效价的消长规律一致。免疫后第2周HI抗体效价达到 2.7 log2～4.0 log2,第 4周达到4.0 log2～5.6 log2,加强免疫(首次免疫后第3周)后,各免疫组鸭HI抗体效价迅速升高,在加强免疫后第3周(首次免疫后第6周)达到最高值9.9 log2～11.0 log2。HI抗体效价在第8周以后开始下降。首次免疫后第16周抗体水平5.2 log2～5.9 log2之间,首次免疫后第20周以后抗体水平均在4log2以下。不同批次的疫苗免疫组各个采样点的抗体效价t检验差异不显著(P＞0.05)。

3 分析和讨论

3.1 鸡免疫禽流感二价苗后4周HI抗体效价均达到最高值8.8 log2～10.1 log2。各组HI抗体效价从第6周开始缓慢下降,第20周以后抗体水平衰减到4 log2以下,此时不足以抵御外界病毒侵袭[6],所以对于受威胁地区的鸡,建议每4个月应免疫1次。这与陈坤永等[7]种鸽免疫禽流感疫苗后抗体维持在保护水平的持续时间相同。

3.2 鸭首次免疫后第2周 HI抗体效价达到2.7 log2～4.0 log2,第 4周达到 4.0 log2～5.6 log2,低于同期免疫鸡的抗体效价。加强免疫后,免疫组鸭HI抗体效价迅速升高,首次免疫后第6周(加强免疫后3周)达到最高值9.9 log2～11.0 log2。HI抗体效价在首次免疫后第8周开始下降,第20周后抗体水平均降至4 log2以下,此时不足以抵御外界病毒侵袭[6]。所以,鸭加强免疫后才能达到较高的抗体水平,而且可靠保护期为4个月。

3.3 同时期内相应免疫组的HI抗体效价Re-4株均稍高于Re-5株,这可能与疫苗在制备过程中的抗原量配比有关。由于禽流感二价苗对鸡和鸭的免疫程序不同,鸡免疫该疫苗4周后抗体水平达到高峰(8.8 log2～10.5 log2)。而鸭首免该疫苗4周后抗体水平在4.0 log2～5.6 log2,加强免疫后3周抗体水平达到高峰(8.9 log2～9.4 log2),首次免疫第8周后鸭的免疫抗体水平比鸡的下降得稍快,说明鸡的免疫效果好于鸭,这与何长生等[8]对重组禽流感灭活疫苗(H5N1亚型,Re-1)免疫鸡鸭后所作的调查结果相一致。

3.4 许多人认为禽流感病毒不易引起水禽发病,有一些水禽养殖场对禽流感的防治不太重视,只免疫1次甚至不免疫。刘超男等[9]的研究表明,禽流感病毒不仅对鸡具有高致病性,而且对鸭也具有高致病性。因此,水禽养殖场不能忽视对禽流感的防控,加强疫苗免疫注射。本试验表明,鸭1次免疫禽流感二价苗后,抗体水平难以达到有效保护范围内,只有加强免疫后,抗体才能保持在较高水平。

3.5 由于受国家有关涉及 HPAI研究要求的限制,本次研究未进一步做攻毒保护试验,有关重组禽流感病毒H5亚型双价灭活疫苗(H5N1,Re-5株+Re-4株)对鸡和鸭HPAI的攻毒保护情况没有继续进行。关于这种疫苗对鸡和鸭的攻毒保护情况还有待进一步试验研究。

[1]世界动物卫生组织.哺乳动物、禽、蜜蜂 A和B类病诊断试验和疫苗标准手册[M].农业部畜牧兽医局,译.北京:中国农业科学技术出版社,2002:197-206.

[2]Ellis T M,Leung C Y,Chow M K,et al.Vaccination of chickens against H5N1 avian influenza in the face of an outbreak interrupts virus transmission[J].Avian Pathol,2004,33(4):405-412.

[3]Garcia A,Johnson H,Kumar Srivastava D,et al.Efficacy of inactivated H5N2 influenza vaccines against lethal A/chicken/Queretaro/19/95 infection[J].Avian Disease,1998,42,248-256.

[4]Halvorson D A.Strengths and weaknesses of vaccines as a control tool[M]//Proceedings of the Fourth International Symposium on Avian Influenza.Athens Georgia,Swayne D E,Slemons R D,et al.US:Animal Health Association,1998:223-227.

[5]靳月生,姚学军,见满振,等.蛋鸡重组高致病性禽流感H5N1(Re-1+Re-4)二价灭活疫苗免疫效果的评价[J].中国畜牧兽医,2008,35(7):92-93.

[6]NY/T769-2004.高致病性禽流感免疫技术规范[S].

[7]陈坤永,翁良树,张祥解,等.种鸽免疫禽流感疫苗HI抗体水平消长规律的研究[J].养禽与禽病防治,2004(7):12-13.

[8]何长生,朱良强,郑举,等.对重组禽流感灭活疫苗(H5N1亚型,Re-1)在家禽免疫效果方面的调研[J].中国兽药杂志,2008,42(7):30-32.

[9]刘超男,刘明,张云,等.H5N1亚型禽流感病毒的亚致病性研究[J].中国农业科学,2006(2):412-417.