HPLC法测定十滴水中五种活性成分的含量

陈广通，李玉琴，黄金华，汪冬庚，王新杨

（南通大学医学院，江苏南通 226001）

十滴水为常用中成药，是《中国药典》2005年版一部收载品种，主要由大黄、樟脑、干姜等7味中药组成，具有健胃，祛暑的功效。主要用于由中暑引起的头昏、恶心、腹痛、肠胃不适[1]。方中大黄性苦、寒，具有泻热通肠、凉血解毒的作用，在方中起主要疗效，蒽醌类衍生物是大黄的主要活性成分[2-7]。目前，对于十滴水中单体的含量测定有少量的文献报道[7-9]，但同时测定多个成分的含量未见文献报道。本研究采用HPLC法同时测定大黄中5种活性成分芦荟大黄素（1）、大黄酸（2）、大黄素（3）、大黄酚（4）和大黄素甲醚（5）的含量，为该制剂的质量控制和临床应用提供参考。

1 仪器与试药

岛津LC-20AD高效液相色谱仪，SPD-20A型紫外检测器（日本Shimadzu公司）；KQ-250VDB型双频数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；AUW120D型电子天平（日本Shimadzu公司）；芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品 （中国药品生物制品检定所，批号分别为110795-200605、110757-200206、110756-200110、110796-200615、110758-200610，含量均≥99.8%）。十滴水（无锡华澳药业有限责任公司，批号：080302；广西广明药业有限公司，批号：090502；广西慧宝源制药有限公司，批号：090602）；乙腈、甲醇和磷酸为色谱纯，水为自制重蒸水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液配制

2.1.1 对照品贮备液的制备 分别精密称取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品 10.51、10.54、4.19、4.63和4.36 mg，分别置50 ml量瓶中，加甲醇溶解并定容，摇匀，得各对照品贮备液。再分别精密吸取各对照品贮备液1、2、10、5、10 ml置同一蒸发皿中，蒸干后，残渣用甲醇溶解，并定容于5 ml量瓶中，混匀，得对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液制备 精密吸取十滴水25 ml，置60℃水浴中蒸干，残渣加10%的盐酸30 ml溶解后，用氯仿60 ml分3次萃取，合并萃取液，回收氯仿，残渣用甲醇溶解并定容至10 ml量瓶中，混匀后即得。

2.2 色谱条件

色谱柱 Shimadzu VP-ODS柱 （4.6 mm×250 mm，5 nm）；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱程序为：1～10 min 52%乙腈；1～25 min 82%乙腈；25～30 min 90%乙腈；30～35 min 90%乙腈。柱温：30℃；流速：1.0 ml/min；检测波长：254 nm。对照品、供试品和阴性对照溶液色谱图见图1。

2.3 线性关系考察

分别精密吸取上述对照品混合溶液 1、4、8、12、20 μl，依次注入液相色谱仪，测定峰面积。以峰面积Y对进样量X（μg）进行线性回归，结果见表1。

表1 回归方程及线性范围Tab.1 Linearity range and regression equation

2.4 精密度试验

取同一对照品溶液，重复进样6次，芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚峰面积的RSD分别为0.83%、1.06%、0.96%、0.86%和0.89%。结果表明本法精密度良好。

2.5 重复性试验

精密吸取十滴水（批号080302）25 ml，共 6份，按上述方法测定芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚含量的RSD分别为1.03%、1.52%、1.73%、0.97%和1.35%。结果表明本法重复性良好。

2.6 稳定性试验

取供试品（批号：080302）溶液，分别在配制后 0、2、8、16、20、24 h进样测定，芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚峰面积的RSD分别为0.89%、1.37%、1.84%、1.14%和1.27%，结果表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

2.7 回收率试验

精密称取已知含量的十滴水（批号：080302）25 ml，共5份，精密加入对照品适量，按供试品溶液制备方法处理，计算各成分的平均加样回收率，结果见表2。

表2 加样回收率试验Tab.2 Results of recovery test

2.8 样品含量测定

取3个厂家的十滴水样品，按“2.1”项下方法，每个厂家平行制备3份供试品溶液，按上述色谱条件测定，由外标法计算其含量，结果见表3。

表3 样品含量测定结果（n=3）Tab.3 Content determination results of samples(n=3)

3 讨论

《中国药典》2005年版对本品中大黄的鉴别是采用薄层色谱法，利用大黄对照药材、大黄素和大黄酚对照品进行定性鉴别，未规定蒽醌类成分含量的测定方法及含量范围。测定该方中大黄蒽醌类成分的含量将更有利于制剂的质量控制，本试验采用乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱，分析时间短，5种成分分离完全。

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