慢性丙型肝炎患者IL-28B基因多态性检测及临床应用

王永忠，严 桐，朱 珍，叶春艳，周胜生，芮冬妹，申红玉，柳龙根

(常州市第三人民医院，江苏常州213001)

聚乙二醇干扰素(PEG-IFN-α)联合利巴韦林(RBV)是目前治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的标准模式。最新研究表明，白细胞介素28B(IL-28B)基因多态性与PEG-IFN-α和RBV联合治疗效果具有较高的相关性［1～3］。我们对42例接受PEG-IFN-α和RBV联合治疗的慢性丙型肝炎患者IL-28B基因区rs12980275、rs12979860、rs8099917的多态性进行了检测分析。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2009年1月～2011年3月我院收治的42例慢性丙型肝炎患者，均接受180 μg/周PEG-IFN-α联合RBV治疗，诊断及疗效判断标准参照2000年全国传染病与寄生虫病学会和肝病学分会联合修订的病毒性肝炎防治方案中的标准。其中，男24例、女18例，年龄18～73岁、平均42.5岁;有输血史33例，吸毒史4例;基因型1b型39例，2a型1例，3b型2例。

1.2 方法

1.2.1 引物及探针序列 IL-28B基因多态性检测试剂盒由上海翼和应用生物技术有限公司提供。引物及探针序列见表1。

1.2.2 检测方法 DNA提取采用血液基因组提取试剂盒(Qiagen公司)。PCR扩增体系包括10 mmol/L Tris-HCl(pH 8.3)，50 mmol/L KCl，2.0 mmol/L MgCl2，200 μmol/L dNTP，300 nmol/L 引物，1.5 U 热启动 Taq酶，5 μl DNA 模板，总反应体积50 μl。反应条件:95 ℃ 15 min，95 ℃ 30 s，53 ℃ 30 s，72℃ 60 s，扩增35个循环;72℃延伸10 min。LDR反应体系包括20 mmol/L Tris-HCl(pH 7.6)，10 mmol/L MgCl2，100 mmol/L KCl，10 mmol/L 二硫苏糖醇，1 mmol/L EDTA，1 mmol/L NAD+，12.5 nmol/L探针或引物，3 μl PCR产物，2 U DNA连接酶，总反应体积20 μl。反应条件:95 ℃ 2 min，95 ℃30 s，50℃ 4 min，循环35次。扩增完成后加入EDTA终止反应。取2.5 μl反应产物与等体积上样缓冲液混合，然后94℃变性2 min，迅速在冰上冷却后于ABI Prism 377测序仪上凝胶电泳30 min，采用Genemapper软件进行分析。

表1 引物及探针序列

1.3 统计学方法 采用SPSS16.0统计软件，基因多态性与病毒学应合采用Fisher精确检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 IL-28B基因多态性频率分布 42例患者rs12979860基因型均为CC型;rs12980275基因型，AA 型 39 例 (92.9%)，AG 型 3 例(7.1%);rs8099917基因型，TT型39例(92.9%)，TG 型3例(7.1%)。

2.2 IL-28B基因多态性与病毒学应答 42例患者中，快速应答(RVR，治疗1个月HCV RNA低于检测下限)34例，持续应答(SVR，治疗6个月 HCV RNA低于检测下限)41例，患者均获得早期应答(EVR，治疗3个月HCV RNA下降2个数量级以上)。不同基因多态性与PEG-IFN-α和RBV联合治疗的RVR率有关，与EVR和SVR无关。见表2。

表2 IL-28B基因多态性与病毒学应答［例(%)］

3 讨论

研究发现，慢性丙型肝炎患者IL-28B基因区多态性与PEG-IFN-α联合RBV治疗效果具有较高的相关性。其中相关性最强的是rs12979860，主要表现为CC型、CT型或TT型，具有CC基因型的患者对标准治疗法的SVR率是TT基因型患者的两倍。不同人群携带等位基因C的概率不同，东亚人最高，欧洲人次之，非洲裔美国人最低［1］。Thomas等［2］认为，IL28-B基因多态性和种族分布有关，东亚人主要表现为CC基因型。本研究42例患者中，rs12979860全部表现为CC基因型，未发现其他基因型，表明在本地区rs12979860基因多态性的特征分布为CC型，不同于以往文献报道［1～3］。患者均获得EVR，41例患者获得SVR，说明rs12979860基因CC型患者对PEG-IFN-α联合RBV治疗具有较高的病毒学应答。

Suppiah等［3］发现，多个核苷酸多态性和治疗结果相关，其中联系性最强的是位于IL-28B上游8 kb的一个 SNP-rs8099917，主要表现为 GG、GT或 TT型，且rs8099917基因GG型患者对标准疗法的失败率是GT或TT型患者的2倍。文献还报道了IL-28B rs12980275、rs7248668和rs11881222多态性也和疗效有关。42例患者中没有检测到rs8099917基因型GG，rs8099917基因型主要为TT型，与TG型相比表现出对PEG-IFN-α联合RBV治疗的PVR作用，但从SVR和EVR作用来看并没有统计学差异，仍需扩大样本量进一步分析。

综上所述，IL-28B基因区rs12979860、rs8099917单核苷酸多态性检测对PEG-IFN-α联合RBV治疗效果的预测具有一定的作用，值得临床推广应用。

［1］Ge D，Fellay J，Thompson AJ，et al.Genetic variation in IL28B predicts hepatitis C treatment-induced viral clearance［J］.Nature，2009，461(7262):399-401.

［2］Thomas DL，Thio CL，Martin MP，et al.Genetic variation in IL28B and spontaneous clearance of hepatitis C virus［J］.Nature，2009，461(7265):798-801.

［3］Suppiah V，Moldovan M，Ahlenstiel G，et al.IL28B is associated with response to chronic hepatitis C interferon-alpha and ribavirin therapy［J］.Nat Genet，2009，41(10):1100-1104.