黄柏五味膏对兔实验性膝关节滑膜炎滑液中 NO的影响

林占军 内蒙古自治区乌兰察布医学高等专科学校(乌兰察布 012000)

骨关节炎(OA)滑膜炎,OA滑膜炎反复发作,长年不愈,急性发作期疼痛肿胀严重,因此对滑膜炎病因、治疗方法及药物的研究越来越受到重视。为了验证滑膜炎经验方(黄柏五味膏)临床治疗效果,本课题将健康兔造模成实验性兔膝骨关节滑膜炎模型,通过外用药膏(黄柏五味膏)的治疗,测定关节液 NO水平来证实其治疗滑膜炎的效果。进一步探讨治疗滑膜炎的作用机理。

1 材料与方法 1.1 实验材料 实验动物:健康日本大耳白兔 40只 ,雌雄各半,体重 2.5±0.5kg,由西安交大医学院实验动物中心提供。质量合格证号:陕医动字 08-018。实验药品及试剂:黄柏五味膏 由黄柏 3份,栀子、乳香各 2份,银花1份,冰片 0.5份共研细末,过 120目筛 ,与凡士林按 2:8比例混合制成软膏(所用药物均购自于陕中附院中药房)。扶他林软膏:北京诺华制药有限公司,国药准字:H19990291,批号X0704。木瓜蛋白酶:由河北博海生物工程有限公司提供,批号000607。 NO试剂盒(硝酸还原酶法):南京建成生物工程研究所 ,批号 20060320。

1.2 实验方法 造模与分组:适应性喂养 7d后,死亡 1只。动物按体重随机分为 4组:空白组 9只、模型组、对照组及治疗组各 10只。后 3组参照日本鬼头康彦[1]兔膝关节腔内注入木瓜蛋白酶造成滑膜炎病变模型方法。

给药及观察:获得稳定的骨关节炎性滑膜炎模型[2]开始,对照组外涂扶他林软膏,治疗组外敷黄柏五味膏。空白组和模型组外涂凡士林,4组均每天 2次。 8周后,动物处死切开关节囊,用 2mL注射器吸取关节液 0.5mL,用等量盐水稀释后,按试剂盒说明书,用硝酸还原酶法测定 NO含量。

2 实验结果 开始造模后第 1天模型组死亡一只,可能由于创伤反应所致。关节液 NO含量测定(硝酸还原酶法)结果见附表。

附表 关节液 NO含量的测定(±s)(mmol/L)

附表 关节液 NO含量的测定(±s)(mmol/L)

注:与模型组比较,△P＜0.01,与空白组比较,▲P＜0.01

组 别 n关节液模型组 9 40.17± 8.89▲治疗组 10 19.76± 5.95△对照组 10 22.73± 7.37△空白组 9 16.72± 5.56△

关节液 NO含量,模型组与空白组比较,有显著性差异(P＜0.01);治疗组及对照组与模型组比较均明显降低,有显著性差异(P＜0.01)。模型组关节液中 NO含量显著升高,应用黄柏五味膏可降低关节液中 NO含量。

3 讨 论 临床研究证明,OA患者血清及关节液中 NO的含量增高,且关节液中的 NO又明显高于血清[3]。O A关节中NO的产生主要来于软骨细胞和滑膜细胞,关节中的炎性因子刺激软骨细胞和滑膜细胞一氧化氮合成酶(iNOS)表达,产生NO[4]。高培国等[5]认为 NO主要产生于滑膜,而后入滑液,经淋巴系统进入血液循环系统。并认为 OA患者中高的 NO浓度是由于滑膜炎变化而引起的。

本实验主要观察对象是 O A继发滑膜炎动物模型,重在滑膜炎形成。Pritzker总结了向实验兔关节内注射蛋白水解酶,特别是木瓜蛋白酶,建立骨关节炎动物模型机制,虽然与人正常膝骨关节炎滑膜炎发生不同,但注射木瓜蛋白酶就会短时间诱发滑膜炎,并伴有软骨破坏,病理变化与骨关节滑膜炎中晚期相似[6]。最终选择了鬼头康彦的向关节腔注射木瓜蛋白酶的造模方法。

黄柏五味膏以黄柏为君药;栀子、乳香、银花为臣药;冰片为使药。功效为清热解毒,活血止痛,利湿消肿。本病正虚标实,风寒湿热内侵为标,瘀血阻络加重的表现。全国规划六版教材《中医骨病学》将本病分为邪实证(包括风寒湿痹和风湿热痹)、正虚证和瘀血证[7]。大量临床观察滑膜炎急性发作期主要以风湿热痹证和瘀血证为多见,“急则治其标”,以清热、活血、消肿、止痛为立方大法,辅以凡士林制外膏,借药力作用,将黄柏五味膏有效成份直接导入病变部位,可以明显改善局部营养,有效消除滑膜炎症。

现代药理研究认为,黄柏增强白细胞吞噬作用,收缩血管,减轻炎症反应。栀子、乳香、银花 ,具有利尿消肿,减少炎性渗出,促进坏死组织愈合。冰片有抗炎作用 ,还具有促进外用药物的渗透作用[8]。

[1]Kitohy,Katsuvamakit,Tanakah,etal.Effect of SL 1010 on experimental osteoarthritis induced by intro articularly,applied papain in rabbits[J].Folia pharmacol japon,1992,100:67.

[2]汪清春.骨关节炎动物模型的建立和选择[J].中医正骨,1998,10(3):40.

[3]Miyasaka N,Hirata Y.Nitric oxide and inflammatory arthritides[J].Life Sei,1997,61:2073.

[4]Evans CⅡ,stefanovic Racic M,Lancaster J.Nitric oxide and its role in orthopaedic disease[J].Clin Orthop,1995,312:275.

[5]高培国,陈百成,汤慧华,等.一氧化氮在骨性关节炎发病机制中的作用[J].中华骨科杂志,1997,19(7):411-414.

[6]王学谦,娄思权,李世民,等.骨关节炎诊断与治疗[M].天津:天津科技翻译出版公司,2005:140.

[7].浩,娄多峰.中医骨病学[M].上海:上海科学技术出版社,1998:38-62.

[8]沈映君.中药药理学[M].北京:人民卫生出版社,2004:231.