HPLC法测定盐酸普萘洛尔片的含量

广西桂林食品药品检验所（541002）赵纯玉 王玲 易燕群

盐酸普萘洛尔片常用于心血管病的治疗。盐酸普萘洛尔片收载于《中国药典》2010年版二部，含量测定采用紫外分光光度法。笔者在工作中发现，紫外分光光度法专属性不强，已有一些研究报道采用高效液相色谱法测定普萘洛尔片的含量，其峰型不是很满意，与药典方法比较结果偏低。本研究测定盐酸普萘洛尔片含量的HPLC-外标法，克服了上述不足，方法简便快速，准确可靠。

1 仪器与试药

岛津LC-2010AHT液相色谱；TU-1901紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）；AB265-S电子分析天平；SartoriusPb-10pH计；盐酸普萘洛尔对照品（中国药品生物制品检定所，批号为100783-200401），盐酸普萘洛尔片（山西云鹏制药有限公司，批号为B071002，B080104）；甲醇、庚烷磺酸钠（色谱纯），磷酸二氢钾（分析纯），纯化水（自备）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：SHIMADZU Shimpack VP-ODS C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-含0.1%庚烷磺酸钠的0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（57∶43）；流速：1.0mL·min-1；检测波长：290nm；进样量：10μl；柱温：30℃。

2.2 溶液配制 取盐酸普萘洛尔片20片，精密称定，研细，精密称取适量 （约相当于盐酸普萘洛尔10mg），置50ml量瓶中，加水2ml，振摇5mim使溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。精密称取盐酸普萘洛尔对照品约10mg，置50ml量瓶中，加水2ml，振摇5mim使溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.3 测定法 精密量取供试品溶液与对照品溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。

2.4 方法学考察

2.4.1 专属性考察：精密量取对照品溶液、供试品溶液及空白溶剂各10μl，分别注入高效液相色谱仪。供试品溶液色谱中结果，在与对照品溶液色谱相应保留时间处有相应色谱峰，空白溶剂在此保留时间处无相应色谱峰，表明其对检测无干扰。见附图。

2.4.2 线性关系考察：取盐酸普萘洛尔对照品制成浓度为50、100、200、300、400、500μg/ml的系列溶液，精密量取10μl分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图。以盐酸普萘洛尔浓度X（μg）对峰面积（Y）进行回归，得回归方程Y=20455X+493511，r=0.9999 （n=6）。结果表明，盐酸普萘洛尔浓度在50.17～501.7μg/mL 范围内与峰面积线性关系良好。

2.4.3 精密度试验：取同一供试品溶液，重复进样5次，记录色谱图，以盐酸普萘洛尔的主峰面积计算，RSD＝1.09%（n＝5），表明仪器精密度良好。

2.4.4 稳定性试验：取同一供试品溶液（批号：B080104），分别在室温放置0、12、24、48、72h时进样测定峰面积，结果盐酸普萘洛尔平均含量为102.16%，RSD＝1.95%（n＝5），表明供试品溶液在48h内稳定。

2.4.5 重复性试验：取同一批样品（批号：B071002），按“2.2”项下依法制备供试品溶液5份，分别按“2.3”项下测定，结果盐酸普萘洛尔平均含量为104.24%，RSD＝0.9%（n＝5），表明该方法重复性较好。

2.4.6 耐用性考察：取同一供试品溶液，在不同流动相比例、不同柱温、不同色谱柱及不同仪器等不同条件下进行测定，结果平均标示量为101.72%，RSD＝1.27%，表明耐用性良好。见附表1。

2.4.7 加样回收试验：取已知含量的样品（批号为B071002），研细，精密称取适量，置250ml容量瓶中，加水2ml，振摇5mim使溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每1ml约相当于盐酸普萘洛尔0.1mg的溶液。精密量取稀释后溶液5ml、10ml、20ml各3份，分别置于25ml容量瓶中，每瓶加入对照品适量，用甲醇稀释至刻度，摇匀，经0.45μm滤膜滤过，按照“2.3”项下测定含量，计算回收率。见附表2。

附表1 耐用性试验结果

附表2 加样回收试验结果（n＝9）

附表3 本法与中国药典方法结果比较

2.5 本法与中国药典方法比较 取同一厂家两个批号的盐酸普萘洛尔片，分别按本文方法及《中国药典》2010年版二部收载的盐酸普萘洛尔片含量测定方法（紫外-可见分光光度法）进行比较。见附表3。

3 讨论

3.1 本研究中的HPLC法对盐酸普萘洛尔的定量结果与药典方法结果基本一致，但较药典方法更具专属性，而且方法简便易行，结果准确可靠。

3.2 对盐酸普萘洛尔的定量分析，文献报道，方法有紫外分光光度法[1][2][3]、二阶导数分光光度法[4]、高效液相色谱法[5]、量热滴定法[6]、荷移光谱法[7]、流动注射化学发光法[8]。高效液相色谱法是目前应用较多的方法，笔者经实验比较发现，本研究中的HPLC法出峰快，峰型好，稳定性及耐用性强。

3.3 溶剂的选择：盐酸普萘洛尔在水或乙醇中溶解。但当溶剂选择纯水、纯乙醇、纯甲醇或水醇混合液比例不当时，HPLC色谱峰会出现双峰。通过试验确证，《中国药典》2010年版二部该品种含测项下规定，先用2ml水使溶解，再用甲醇稀释，有利于盐酸普萘洛尔的稳定。

3.4 流动相及配比的选择：运用不同比例的流动相：①乙腈-水；②乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液；③甲醇-水；④甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液[9]；⑤甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液；⑥甲醇-含0.1%庚烷磺酸钠的0.05mol/L磷酸二氢钾溶液用磷酸调pH为3.0；⑦乙腈-甲醇-0.01mol/L磷酸二氢钾溶液-三乙胺用磷酸调pH为3.3～3.4。进行峰型，保留时间，理论塔板数，拖尾因子等因素的比较，结果表明，甲醇-含0.1%庚烷磺酸钠的0.05mol/l磷酸二氢钾溶液用磷酸调pH为3.0（57∶43）为佳，分离度好，分析时间不长，主峰出峰时间约为10min。但当流动相的比例在43∶57时，主峰分岔出现双峰，可能是S-（-）-盐酸普萘洛尔与R-（+）-盐酸普萘洛尔对映体[1]分离 。操作时应控制好流动相的比例。

3.5 检测波长的选择：取盐酸普萘洛尔对照品溶液，用UV-1901型紫外分光光度计在200～500nm波长范围进行扫描，结果在290nm 波长处有最大吸收，选择此波长作为测定波长。

3.6 柱温的选择：用同一供试液分别在柱温25℃、30℃、35℃进行色谱分析，结果30℃时其分离度、理论塔板数较好。因甲醇易挥发，故不宜采用太高柱温。