新型N-取代-2-(2-氯苯基)-2-{6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)-基}乙酰胺的合成及其抗血小板聚集活性

刘 颖， 支 爽， 穆 帅， 成 碟， 刘登科

(1. 天津药物研究院 天津市新药设计与发现重点实验室，天津 300193； 2. 天津工业大学环境与化学工程学院，天津 300160； 3. 天津大学 化工学院，天津 300072)

噻氯匹定(Ⅰ)自1978年上市以来得到了广泛临床应用[1]。1998年，法国赛诺菲公司开发的氯吡格雷(Ⅱ)首次在美国上市，因毒副作用较小而在很大程度上取代了Ⅰ[2]。2009年，第一三共和Eli-Lilly共同开发出的普拉格雷(Ⅲ)在英国首次上市，临床前和临床试验研究中发现其抗血栓活性比Ⅱ作用更强，用药个体差异小，起效也更为快速[3]，但存在患者出血倾向严重等缺点。因Ⅰ～Ⅲ均为不同的毒副作用，为此，国内外研究人员设计合成了大量的新化合物[4～10]，以期找到更加优良的候选药物。

本文在比较分析现有治疗药物及文献报道新化合物结构特点的基础上，以Ⅱ为先导化合物，利用生物电子等排原理，把Ⅱ结构中的酯基(-CO2Me)换成酰胺(-COR)基团，设计并合成了一系列新型的N-取代-2-(2-氯苯基)-2-{6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)-基}乙酰胺(4a～4o， Scheme 1),为寻找到更好的先导化合物打下基础。4的结构经1H NMR和MS表征，并测定了其体内抗血小板聚集活性。

124a～4o

Scheme1

1 实验部分

1．1 仪器与试剂

Bruker 400型核磁共振仪(DMSO-d6为溶剂，TMS为内标)；VG ZAB-HS型质谱仪；Lab Alliance S1500型高效液相色谱仪。

1[11]和2[8]参考文献方法合成；薄层层析硅胶板GF-254，青岛海洋化工厂；其余所用试剂均为分析纯或化学纯。

1．2 4的合成(以4a为例)

在反应瓶中加入2 3.1 g(10 mmol)的三氯甲烷(15 mL)溶液和N，N-二甲基-4-氨基吡啶(DMAP)1.5 g，搅拌下于室温反应约30 min。依次加入甲氧胺(3a)0.47 g(10 mmol)， 1-乙基-3-[3-(二甲氨基)丙基]碳二亚胺(EDC)2.5 g；于25 ℃反应6 h(TLC跟踪)。用水(3×15 mL)洗涤，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压除溶得浅黄色油状液体，经硅胶柱层析[洗脱剂：A=V(三氯甲烷) ∶V(甲醇)=10 ∶1]分离得4a。用类似的方法合成4b～4o。

1．3 生物活性测试[12]

选用健康雄性Wistar大鼠(体重200 g～250 g)随机分组。实验分两批进行，每批均设正常和Ⅱ对照组，灌胃给药，剂量30 mg·kg-1。给药容积均为10 mL·(kg·bw)-1，正常对照组给予等量0.5%CMC-Na，给药后2 h腹腔注射40 mg·kg-1戊巴比妥钠(1 mL·kg-1)麻醉，腹主动脉采血，用3.8%枸橼酸钠抗凝，分别制备富血小板血浆(PRP)和贫血小板血浆(PPP)，在PAM-3型双通道血小板聚集仪测定ADP(终浓度：1.08 μM)诱导的血小板最大聚集百分率。

2 结果与讨论

2．1 实验结果与表征数据

2和4的实验结果见表1，光谱数据见表2； 4的抗血小板聚集活性见表3。

表1 2和4的实验结果Table 1 Experimental results of 2 and 4

a展开剂：V(三氯甲烷) ∶V(甲醇)=10 ∶1;bHPLC;c展开剂:无水乙醇

表2 2和4的1H NMR和EI-MS数据Table 2 1H NMR and EI-MS data of 2 and 4

续表2

Comp1H NMR δ(J/Hz)*EI-MS m/z(%)4h8.13(s, 1H, NH), 7.67(d, J=6.4, 1H, ArH), 7.45(d, J=6.4, 1H, ArH), 7.33(m, J=10.8, 2H, ArH), 7.24(d, J=4.4, 1H, TH), 6.73(d, J=4.4, 1H, TH), 4.68(s, 1H, CH), 4.64(s, 1H, CH), 3.68(s, 1H, OH), 3.48(m, J=52.8, 2H, PH), 3.06(s, 2H, CH2), 2.77(d, J=12.4, 4H, PH), 0.99(s, 3H, CH3)364.1(M+, 1), 262.1(99), 209.1(16), 125.0(36), 45.0(5)4i7.98(s, 1H, NH), 7.69(d, J=6.4, 1H, ArH), 7.46(d, J=6.4, 1H, ArH), 7.36(m, J=10.8, 2H, ArH), 7.25(d, J=4.4, 1H, TH), 6.75(d, J=4.4, 1H, TH), 4.71(s, 1H, CH), 3.72(s, 1H, OH), 3.51(t, 2H, CH2), 3.46(m, J=52.8, 2H, PH), 3.08(t, 2H, CH2), 2.75(d, J=12.4, 4H, PH)350.0(M+, 3), 341.1(9), 222.0(5), 70.0(49), 42.0(15)4j8.06(d, J=7.6, 1H, NH), 7.73(d, J=7.6, 1H, ArH), 7.43(d, J=7.6, 1H, ArH), 7.33(m, J=29.6, 2H, ArH), 7.24(d, J=4.8, 1H, TH), 6.74(d, J=4.4, 1H, TH), 4.55(s, 1H, CH), 3.88(q, J=20.0, 1H, CH),3.50(s, 2H, PH), 2.76(m, J=11.2, 4H, PH), 1.06(q, J=18.8, 6H, CH3)347.1{[M-1]-, 4}, 264.1(38), 138.1(83), 110.0(16), 43.0(11), 27.0(4)4k8.22(t, J=11.2, 1H, NH), 7.71(m, J=9.2, 1H, ArH), 7.44(m, J=9.2,1H, ArH), 7.33(m, J=29.6, 2H, ArH), 7.24(d, J=5.2, 1H, TH), 6.74(d, J=5.2, 1H, TH), 4.57(s, 1H, CH), 3.48(q, J=38.0, 2H, CH2), 3.08(q, J=19.6, 2H, PH), 2.78(d, J=5.2, 2H, PH), 2.72(m, J=14.0, 2H, PH), 1.37(m, J=21.6, 2H, CH2), 1.23(m, J=22.4, 2H, CH2), 0.84(t, J=14.8, 3H, CH3)361.2{[M-1]-, 4}, 262.2(97), 110.0(16), 41.0(8), 29.0(12)4l8.25(t, J=11.2, 1H, NH), 7.71(m, J=9.2, 1H, ArH), 7.44(m, J=8.8, 1H, ArH), 7.32(m, J=31.6, 2H, ArH), 7.24(d, J=5.2, 1H, TH), 6.74(d, J=4.8, 1H, TH), 4.56(s, 1H, CH), 3.48(q, J=38.0, 2H, PH), 3.11(m, J=27.2, 2H, CH2), 2.78(d, J=5.2, 2H, PH), 2.72(m, J=22.8, 2H, PH), 1.01(t, J=14.4, 3H, CH3)333.1{[M-1]-, 3}, 262.1(95), 110.0(19), 45.0(8), 29.0(10)4m8.18(d, J=4.4, 1H, NH), 7.70(d, J=7.2, 1H, ArH), 7.44(d, J=7.6,1H, ArH), 7.33(m, J=24.0, 2H, ArH), 7.24(d, J=4.8, 1H, TH), 6.74(d, J=5.2, 1H, TH), 4.57(s, 1H, CH), 3.48(q, J=42.8, 2H, PH), 2.78(s, 2H, PH), 2.71(d, J=5.2, 2H, PH), 2.62(d, J=4.4, 3H, CH3)321.0{[M+1]+, 9}, 262.1(68), 110.0(41), 58.0(64), 39.0(21)4n7.84(m, J=9.2, 1H, ArH), 7.54(m, J=15.6, 2H, ArH), 7.22(m, J=9.2, 1H, ArH), 7.24(d, J=5.2, 1H, TH), 6.73(d, J=5.2, 1H, TH),4.96(s, 1H, CH), 4.13(t, J=13.2, 2H, PH), 3.96(s, 2H, OH), 3.72(t, J=9.2, 4H, CH2CN), 2.68(m, J=14, 2H, CH2O), 2.48(m, J=8.4, 4H, PH), 2.32(m, J=13.6, 2H, CH2O)394.1(M+, 1), 356.1(13), 307.2(8), 128.1(85), 100.2(57), 45.3(36)4o7.72(m, J=9.2, 1H, ArH), 7.43(m, J=9.2, 1H, ArH), 7.32(m, J=32.0, 2H, ArH), 7.24(d, J=4.8, 1H, TH), 6.74(d, J=4.8, 1H, TH), 4.57(s, 1H, CH), 3.54(d, J=7.2, 2H, PH), 2.74(m, J=26.0, 4H, PH),1.67(m, J=26.8, 4H, AH), 1.20(m, J=87.2, 8H, AH)388.1(M+, 3), 375.0(4), 179.0(20), 70.0(49), 36.0(42)

*T=thiophene, P=piperidine

表3 4的抗血小板聚集活性Table 3 Anti-platelet aggregation activities of 4

从表3可见，4a～4o均有一定的抗血小板聚集作用，其中4a， 4l和4m显现出比其他化合物更强的活性，对血小板聚集的抑制百分率分别为60.3%， 63.0%和65.1%。

2．2 合成

1,3-二环己基碳二亚胺(DCC)是一种缩合剂，与少量催化剂DMAP联合用于羧酸与醇缩合成酯，与胺缩合生成酰胺是最常用的合成方法[13]。合成本文目标酰胺类衍生物前期实验中即应用了此法，但在纯化过程中遇到了困难。DCC反应后的副产物DCU(二环己基脲)很难完全分离去除。研究发现，DCU在三氯甲烷中的溶解度较小，因此尝试用氯仿溶解目标产物后过滤，但是滤液仍需多次柱分离才能得到较好纯度的产物。随后采用了水溶性的脱水剂EDC·HCl，通过水洗的方法即可方便除去副产物，极大地方便了后处理过程，得到的产物纯度也较好。

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