鼻咽癌组织中MAD2表达及临床意义

(华中科技大学同济医学院附属孝感医院，湖北孝感 432100)

细胞周期“质控机制”的最后关卡—纺锤体检查点(SAC)的功能缺陷可引起细胞染色体不稳定即形成非整倍体及多倍体，进而引起细胞恶变，是当今肿瘤发生与治疗的研究热点。研究发现，有丝分裂阻滞缺陷蛋白2(MAD2)作为检查点的重要成员之一，其表达异常与人类多种肿瘤的发生、发展密切相关，而其与鼻咽癌的相关性研究鲜见报道。2005年1月～2011年12月，我们采用免疫组化EliVision二步法检测了鼻咽癌组织中的MAD2表达情况，旨在探讨其在鼻咽癌发生、发展中的作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2005年1月～2011年12月我院手术切除的初治鼻咽癌组织标本60份(鼻咽癌组)，患者男39例，女21例;中位年龄48岁，其中＜48岁31例。所有标本均经病理诊断(低分化鳞癌)，且术前均末接受放化疗及其他抗癌治疗。按国际抗癌联盟(UICC)1997年标准分期，T1期10例、T2期19例、T3期21例、T4期10例;临床分期Ⅰ期3例，Ⅱ期14例，Ⅲ期27例，Ⅳ期16例。CT或MRI检查显示27例有颅底破坏，根据临床症状判定18例有颅神经损伤。另选同期门诊体检者慢性鼻咽炎组织标本25份(鼻咽炎组)，两组一般资料无统计学差异，具有可比性。

1.2 MAD2阳性表达检测 所有组织标本均用10%中性甲醛固定，石蜡包埋，4 μm厚切片。免疫组化染色按ElivisionTMsuper试剂盒操作说明书进行，鼠抗人MAD2单克隆抗体(购自Santa Cruz公司)的工作浓度为1∶50，以已知阳性切片做阳性对照，用PBS代替一抗做阴性对照。结果判断标准:与阴性对照相比，细胞质或细胞核出现淡黄色至棕黄色产物判断为MAD2阳性。每张切片随机观察10个高倍镜视野(×400)，每个视野计数100个细胞，计数阳性细胞。阳性细胞＞10%为阳性，≤10%为阴性。

1.3 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件。数据比较采用χ2检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 MAD2阳性表达 鼻咽癌组及鼻咽炎组MAD2 阳性表达率分别为 51.7%(31/60)、80.0%(20/25)，两组比较 P ＜0.05。

2.2 MAD2表达与鼻咽癌临床病理参数的关系见表1。

表1 MAD2表达与鼻咽癌临床病理参数的关系

3 讨论

在细胞有丝分裂的过程中，有一个由多种蛋白组成的纺锤体检查点(又称有丝分裂检查点)，能准确地识别纺锤体微管与染色体动粒的连接，从而保证染色体的正常分离，染色体不稳定即形成非整倍体及多倍体，是癌前细胞及癌细胞本质特征之一［1］。MAD2蛋白是纺锤体检查点的重要成员之一，可通过磷酸化和去磷酸化来调节纺锤体微管和染色体动粒的连接作用，MAD2的异常表达可能导致纺锤体检查点的功能减弱或消失，无法监控肿瘤细胞内异常的微管与动粒结合，使染色体出现异常分离，造成细胞非整倍体异常而导致肿瘤的发生发展［2］。

本研究发现，MAD2在鼻咽癌组中的表达明显低于鼻咽炎组，提示MAD2的表达缺失可能与鼻咽癌癌变的发生有关。这与一些学者在食管鳞癌、卵巢癌等中的研究结果相似［3，4］。而另外一些学者发现，在肝癌、肺癌等中MAD2的阳性表达显著高于正常组织［5，6］。此外 Sotillo 等［7］发现，使鼠体内MAD2高表达后伴有较高的非整倍体率，而通过RNA干扰MAD2表达后亦出现一定非整倍体率，MAD2高表达的鼠体内更易患不同类型肿瘤并伴较高非整倍体率。这些说明，一定量的MAD2是维持正常细胞有丝分裂所必须的，MAD2的上调或下调都可诱发染色体失衡而导致肿瘤发生，MAD2在人类肿瘤中的表达失衡(上调或下调)可能与肿瘤的遗传学背景不同有关，但具体机制尚需进一步研究。本研究还发现，MAD2阳性表达与鼻咽癌临床分期相关，提示MAD2低表达在鼻咽癌的发展过程中起促进作用。其机制可能为MAD2低表达提高了抑癌基因如p53、Rb等的缺失率，使纺锤体分离时产生的非整倍体细胞经G0期进入G1期，抑癌基因的缺失导致细胞分裂无法阻止在G1期，使非整倍体细胞逃避了凋亡并进一步发展［8］。

总之，鼻咽癌组织中MAD2呈低表达，与鼻咽癌的发生、发展有关;MAD2可为鼻咽癌的早期诊断、病情及预后判断提供依据。

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［7］Sotillo R，Hernando E，Díaz-Rodríguez E，et al.Mad2 Overexpression promotes aneuploidy and tumorigenesis in mice［J］.Cancer Cell，2007，11(1):9-23.

［8］Schvartzman JM，Duijf PH，Sotillo R，et al.Mad2 is a critical mediator of the chromosome instability observed upon Rb and p53 pathway inhibition［J］.Cancer Cell，2011，9(6):701-714.