HPLC法测定老年咳喘胶囊中甘草酸的含量

邱宏聪孟夏临

1.广西壮族自治区中医药研究院，广西南宁530022;2.广西中药质量标准研究重点实验室，广西南宁530022

HPLC法测定老年咳喘胶囊中甘草酸的含量

邱宏聪1，2孟夏临1

1.广西壮族自治区中医药研究院，广西南宁530022;2.广西中药质量标准研究重点实验室，广西南宁530022

目的:建立老年咳喘片中甘草酸的HPLC含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法，色谱柱为Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 mm)，流动相为乙腈－0.05%磷酸溶液(35:65)，流速为1.0 mL·min－1，检测波长为237 nm;进样体积为10 mL。结果:该方法的线性范围为0.098～1.97 mg，r=0.9998(n=5);平均回收率(n=6)为99.36%，RSD为1.81%。结论:该法简便、准确，可用于老年咳喘片的质量控制。

老年咳喘胶囊;甘草酸;高效液相色谱法

老年咳喘胶囊是由黄芪、补骨脂、淫羊藿、甘草等七味药材组成，具有滋阴壮阳，扶正固本之功效，可提高免疫能力，促进病体康复，用于老年慢性支气管炎及各种体虚症。目前已有文献报道通过测定黄芪甲苷［1］指标物质，建立本品的质量控制方法。为更全面的控制本品的质量，保证用药安全、有效，本文采用HPLC法测定老年咳喘胶囊中甘草酸的含量。

1 仪器与试药

日本岛津公司LC－20A高效液相色谱仪;SPD－20A紫外检测器;威玛龙多媒体色谱数据工作站。甘草酸铵对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110731－200614，供含量测定用)，老年咳喘胶囊(购自A公司，共三批)。乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性

色谱柱为Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 mm)，流动相为乙腈－0.05%磷酸溶液(35:65)，流速为1.0 mL·min－1，检测波长为237nm;进样体积为10 mL;柱温为室温;理论板数按甘草酸峰计算应不低于2000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取甘草酸铵对照品，加流动相制成0.2 mg·mL－1的溶液，即得(甘草酸重量=甘草酸铵重量/1.0207)［2］。

2.3 供试品溶液的制备

取本品20片，研细，混匀，取约0.5 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入流动相25 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 线性关系考察

精密量取对照品溶液0.5、1、3、5、10ml，分别置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，按拟定色谱条件分别进样10ml，测定。以甘草酸对照品进样量(mg)为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归，回归方程为:Y=706 453.8X+29 745.3，r=0.999 8，表明进样量在0.098～1.97 mg范围内时，进样量与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验

对同一供试品溶，按拟定色谱条件连续进样测定5次，结果峰面积平均值为325 491，RSD为1.37%，表明仪器精密度较好。

2.6 稳定性试验

对同一供试品溶液分别在0，1，2，4，8，12、24 h按拟定色谱条件进行测定，结果峰面积平均值为330 752，RSD为1.68%，表明供试品溶液至少在24 h内稳定。

2.7 重复性试验

精密称取同一批次样品6份，制成供试品溶液，按拟定色谱条件测定，结果甘草酸含量的平均值为1.06 mg·g－1，RSD为1.89%，表明重复性较好。

2.8 加样回收率测定

精密称取6份已知含量(1.06 mg·g－1)的样品0.25 g，分别精密加入甘草酸铵对照品(11.76 mg·mL－1)25 mL，制成供试品溶液，按拟定色谱条件测定，计算回收率，结果平均回收率(n=6)为99.36%，RSD为1.81%，见表1，表明方法回收率较好。

图1 HPLC色谱图

2.9 阴性对照试验

取缺甘草的阴性样品0.5g，按拟定方法提取，测定。结果阴性样品在甘草酸出峰位置无吸收峰，表明处方中其他成分对测定无影响。见图1。

2.10样品测定

分别取3批样品，按拟定方法提取，测定，计算样品中甘草酸的含量，结果分别为0.38 mg/粒，0.35 mg/粒，0.32 mg/粒。

3 讨论

方中的甘草为中国药典收载品种，成分清楚。其主要成分甘草酸的含量较高，具有抗炎、解毒、保肝和增强免疫等作用［3］，为处方中主要的药效成分。因此，将其确定为含量测定项，可更全面、有效的控制本品的质量。

本试验对样品提取溶剂进行了筛选，曾采用70%乙醇、1%醋酸无水乙醇、40%甲醇及本试验流动相乙腈－0.05%磷酸溶液，结果流动相提取的样品杂质峰较少，峰型较好，因此采用流动相作为提取溶剂。试验还对超声时间进行了考察，结果样品超声30 min，甘草酸基本提取完全。通过含量测定的方法学考察，结果表明，用HPLC法测定老年咳喘胶囊中甘草酸的含量，方法简便、准确，可用于该制剂的质量控制。

［1］覃军，黄凤婷，凌志敏，等.老年咳喘胶囊质量标准研究［J］．中药材，2010，(6):1005－1007.

［2］中国药典(一部)［S］.2010:80－81.

［3］谢松梅，崔慧斐.甘草酸的研究进展［J］.食品与药品，2006，8(03A):1.

Determination of Glycyrrhizic Acid in Laonian Kechuan Capsule by HPLC

QIU Hong－cong1，2，MENG Xia－lin1
1.Guangxi Institute of Traditional Medical and Pharmaceutical Sciences，Nanning 530022，China;2.Guangxi Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Quality Stardands，Nanning 530022，China

Objective:To establish a HPLC method for the determination of glycyrrhizic acid in Laonian Kechuan Capsule.Method:A HPLC method was developed.Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 mm)was adopted and the mobile phase consisted of acetonitrile and 0.05%phosphoric acid solution(35:65)with injection volume of 10 mL.The flow rate was 1.0 mL·min－1 and the UV detection was at 237 nm.Results:The linear ranges were 0.098～1.97 mg(r=0.9998，n=5)，and the average recovery(n=6)was 99.36%with 1.81%of RSD.Conclusion:The method is simple，accurate，and suitable for the quality control of Laonian Kechuan Capsule.

Laonian Kechuan Capsule;glycyrrhizic acid;HPLC

R927.2

A

1007－8517(2012)20－0043－02

邱宏聪，硕士，助理研究员，研究方向:药物质量标准研究。E－mail:qiuhongcong@163.com。

2012.08.27)