ELISA一步法和二步法检测HBsAg结果的对比分析

熊阳琼，杨雨文，黄丁能

(丰城市中医院，江西丰城331100)

ELISA一步法和二步法检测HBsAg结果的对比分析

熊阳琼，杨雨文，黄丁能

(丰城市中医院，江西丰城331100)

乙型肝炎；ELISA；HBsAg；一步法；二步法

乙型肝炎病毒(HBV)传播途径广，传染性强，发病率高，我国在世界上属于乙型肝炎病毒感染的高度流行区。HBV表面抗原(HBsAg)在HBV感染检测中一直为最重要的标志物，是乙肝的早期诊断指标之一。因此，准确地检测HBsAg对于HBV感染的临床诊断和治疗有着重要的意义。为验证ELISA法检测试剂盒的质量与性能，笔者通过对2154例江西省丰城市中医院体检者血清及质控血清同时用两种方法进行HBsAg检测并对结果进行对比分析，现分析报道如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源2154例健康体检者血液样本选自2012年3月至2012年10月江西省丰城市中医院体检科健康体检者，其中男1071例，女1083例，年龄20～35岁，平均年龄25岁。

1.2 仪器德国MAGLUMI-2000全自动化学发光仪;雷勃MULTISKAN-MK3自动酶标仪；北京普朗DNX-9620A自动洗板机。

1.3 试剂与方法ELISA一步法检测HBsAg试剂采用北京万泰生物药业股份有限公司；二步法HBsAg试剂采用北京万泰生物药业股份有限公司。血清样本均采用一步法和二步法平行检测HBsAg，其操作严格按照试剂说明书进行。检测阳性样本均用上述二种方法复检，其结果不一致样本再用MAGLUMI-2000全自动化学发光仪进行HBsAg的定量检测。质控血清购自北京康彻思坦生物技术有限公司生产的HBsAg(1.0IU/ml)质控血清，并配制成0.5IU/ml、0.25IU/ml、0.125IU/ml待用。

1.4 结果判断ELISA一步法和二步法结果判断均为P/N值≥2.1(S/CO≥1)为阳性[1]。MAGLUMI-2000全自动化学发光仪检测结果大于0.1IU/ml判为阳性。

1.6 统计学方法数据处理均采用SPSS 17.0统计软件进行统计学处理。临床计数资料用χ2检验分析，计量资料用t检验分析。

2 结果

2.1 两种方法同时检测HBsAg结果2154例HB-sAg样本检测结果显示ELISA一步法检测HBsAg阴性1978例，阳性176例，阳性率为8.17%；二步法检测HBsAg阴性1953例，阳性201例，阳性率为9.33%。ELISA一步法检测的1978例HBsAg阴性样本中，有25例二步法检测为阳性，并在化学发光仪上进行HBsAg定量检测，23例检测结果为(0.13～0.84)IU/ml、2例大于250IU/ml，均判定为阳性结果。一步法检出率仅为二步法的87.56%(176/ 201)，而漏检率为1.16%(25/2154)。二者检出率的差异有统计学意义(P＜0.05)，结果见表1。

表1 ELISA一步法及二步法HBsAg检测结果比较

2.2 二种方法对HBsAg质控血清1.0IU/ml、0.5IU/ ml、0.25IU/mLml和0.125IU/ml不同浓度进行检测，一步法S/CO均值分别为1.46、0.85、0.52和0.24；二步法为3.68、2.25、1.77和1.10。一步法最低检测浓度为1IU/ml，二步法为0.1～0.2IU/ml，二者灵敏度差异有统计学意义(P＜0.01)，见表2。

表2 不同浓度质控血清检测结果比较

3 讨论

乙型肝炎病毒存在于乙型病毒性肝炎患者的血液、汁液、唾液、经血、泪液及乳汁等分泌物中。HBV是一种严重危害人类健康的世界性传染病[1]，我国更是乙肝高发区。而我国人群HBsAg携带率高达10%～15%[2,3]，HBsAg携带者总人数达1.2亿左右，慢性乙肝患者多达1000万人，造成严重的社会问题，其防治任务相当艰巨。

ELISA一步法检测HBsAg虽然简化了操作步骤,缩短了反应时间,已被各实验室广泛使用,其应用高亲和力的单克隆HBsAb抗体,其敏感性和特异性也显著提高。ELISA一步法[4]是将样本和酶标记抗体同时加入反应孔中,因此反应孔对血清中乙肝病毒的非特异性吸附是最常见的干扰因素[5,6]。因此实际工作中经常会出现因样本中HBsAg浓度过低或过高致假阴性结果。ELISA二步法[7]是将样本加入37℃反应孔中60 min,洗涤后再加入酶标抗体,乙肝表面抗原虽然被吸附到反应孔,通过洗涤可以清除掉。本次对样本2154例检测HBsAg结果其中一步法检出率为8.17%，二步法为9.33%。一步法1978例阴性样本中二步法检出阳性25例，漏检率为1.16%。其23例经化学发光定量检测为(0.13～0.84)IU/ml，提示样本中HBsAg浓度极低，2例超过250IU/ml，显示其样本中HBsAg浓度过高，导致一步法因灵敏度较低和钩状效应的发生[8]而呈假阴性结果。分析其检测原因[9]，一步法由于血清和酶标抗体同时加入，若HBsAg浓度过高，分别与酶标抗体和固相抗体形成免疫复合物，不形成夹心复合物，因而产生钩状效应而呈假阴性。二步法为向反应微孔先加血清，经长时间温育，高浓度HBsAg与包被在固相乙肝表面抗体呈“饱和”性结合，洗涤后再与酶标抗体结合形成夹心复合物而呈阳性，同时，不同浓度质控血清检测结果显示一步法最低检测浓度为1IU/ml，而二步法为0.125IU/ml，其灵敏度显著提升，从而有效提高HBsAg检出率，与文献[6,9-11]报道基本一致。

实践证明ELISA一步法检测HBsAg确因浓度过高或过低有“带现象”，从而出现假阳性和假阴性而误检。因此，ELISA一步法检测HBsAg时，临床医生与病人反映结果有误时；通常解决方法是采用样品稀释后重新检测；如果结果仍有怀疑，笔者一般采用另一种不同试剂进行检测，采用ELISA二步法检测试剂为首选。由此笔者认为解决抗原抗体过高引起“带现象”而出现误检最简便实用方法是用ELISA二步法复查。以尽量减少误诊提高检测的阳性率，有利于临床诊断和治疗。

综上所述，ELISA一步法虽有许多优点，但存在灵敏度相对较低及钩状效应，造成检验结果一定程度的不可靠，建议使用ELISA二步法，虽二步法操作时间长，但可以明显提高检出率，减少漏检率，为临床提供更加客观准确的HBsAg检测结果。

[1]Hiley LA,Westacott AJ.A further caution to users of one-step hepatitis B ELISA tests[J].Med J Aust,1988,148(9):480-481.[2]袁鹏,李毅,李荫桂,等.HBsAg测定ELISA一步法与两步法的结果比较[J].职业与健康,2012,28(3):317-318.

[3]胡越,蒋瑞馨,邵家幼.两种酶联免疫吸附法检测乙肝表面抗原的结果比较[J].实验与检验医学,2012,30(3):269-270.

[4]赖雄,吴兆勇,余岸松.高含量HBsAg致ELISA一步法假阴性的探讨[J].吉林医学,2007,28(7):879-880.

[5]刘学政,张家均,雷选斌,等.ELISA一步法和二步法检测HBsAg结果的对比分析[J].国际检验医学杂志,2012,33(4):456-457.

[6]马良艳,王秋实,王殿昌,等.ELISA一步法与二步法在HBsAg检测的应用比较[J].中国医学工程,2011,19(10):92-93.

[7]杨剑.ELISA一步法和二步法检测乙肝HBsAg的结果比较[J].实验与检验医学,2011,29(5):569-570.

[8]雷震,谢楠,敖琴芳,等.加酶时间对ELISA定性测定HBsAg的影响[J].现代检验医学杂志,2007,22(5):20-21.

[9]薛俊太,邓翠华,王惟,等.溶血标本在ELISA一步法和二步法中对HBVM测定结果的影响[J].检验医学与临床,2009,6(14):1126-1127.

[10]Par A,Mihaly I,Komives K.A simple ELISA method for the detection of HBsAg:Organon Teknika HBsAg Uniform II screening and confirmation test.Comparative study using the HBsAg Hapanostika method.A multicenter study[J].Orv Hetil,1994,135(39): 2143-2146.

[11]张文利,刘月芳.ELISA一步法与二步法及放免法对HBsAg检测结果分析[J].中国公共卫生,2000,16(8):84.

R446.61,R512.6+2

B

1674-1129(2013)01-0096-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.01.042