八味益肾丸的质量控制研究

苏国林 李 君

（颈复康药业集团有限公司，承德067000）

八味益肾丸的质量控制研究

苏国林 李 君*

（颈复康药业集团有限公司，承德067000）

目的 建立八味益肾丸的质量控制方法。方法 采用TLC法对蚕蛾和当归进行定性鉴别；采用HPLC法对淫羊藿苷进行定量分析。结果 薄层色谱斑点清晰，阴性对照无干扰；淫羊藿苷进样量在0.0126～0.0756mg／ml范围内线性关系良好（r＝0.9998），平均加样回收率为95.8%，RSD为0.31%。结论 所建立的方法能准确可靠地进行定性、定量检测，重复性好，可作为本产品的质量控制方法。

八味益肾丸；淫羊藿苷；TLC；HPLC；质量控制

八味益肾丸是根据中医药学文献的有关记载，结合当代有关理论和临床研究的最新成果及我们几十年的临床经验，充分发挥中医药在治疗肾阳不足诸症的优势，研制出的一种疗效可靠、使用安全，服用方便的中药复方新药，由蚕蛾和淫羊藿等药味组成，临床主要用于治疗肾阳不足，阳痿、滑精以及气怯神疲，畏寒肢冷，腰膝酸软等症。年老、久病而见上述诸症者亦可用之。为有效地控制该制剂的质量，本实验对其质量标准进行了研究，采用薄层色谱法对蚕蛾和当归进行了鉴别，采用高效液相色谱法同时对淫羊藿苷进行含量测定［1］。

1 仪器与试药

岛津LC-10A型高效液相色谱仪（岛津LC-10AT泵；SPD-M10A二级管阵列检测器；CLASS-LC10色谱工作站）；色谱柱：Kromasil C18柱（250mm×4.6mm，5μm），AL104万分之一分析天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司）；AE240十万分之一分析天平 （瑞士METTLER公司）；KQ-700DE数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；硅胶G（山东青岛海洋化工研究所）。

对照药品和药材均购自中国药品生物制品检定所，淫羊藿苷对照品（批号：110737-200313）；当归对照药材（120927-200512）；蚕蛾对照药材（121457-200501）；八味益肾丸样品 （颈复康药业集团有限公司制）；乙腈为色谱纯 （美国Tedia公司）；水为双蒸水；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1薄层鉴别

2.1.1当归取本品2g，研碎，加乙醚10ml，浸渍1小时，滤过，滤液挥干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。照处方配比，除去当归，按八味益肾丸工艺制备当归阴性样品。取当归阴性样品，照供试品溶液制备方法同法制成阴性样品溶液。另取当归对照药材0.5g，加乙醚10ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中华人民共和国药典，2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯 （9∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯 （365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相对应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点。阴性样品色谱则无此斑点。

2.1.2蚕蛾取本品2g，研碎，加无水乙醇10ml，超声处理10min，滤过，取滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液。照处方配比，除去蚕蛾，按八味益肾丸工艺制备当归阴性样品。取蚕蛾阴性样品，照供试品溶液制备方法同法制成阴性样品溶液。另取蚕蛾对照药材0.2g，加无水乙醇10ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中华人民共和国药典，2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）-乙酸乙酯-甲酸（18∶3∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛的10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性样品色谱则无此斑点。

2.2含量测定

2.2.1对照品溶液的制备取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含0.03mg的溶液，即得。

2.2.2供试品溶液的制备取本品适量，研细，取细粉约0.2g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入20ml稀乙醇，密塞，称定重量，超声处理（功率500W，频率40k Hz）20分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液10ml，蒸干，残渣加水5ml使溶解，通过聚酰胺柱，用水40ml洗脱，弃去水洗脱液，再用乙醇50ml洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加流动相使溶解，定量转移至10ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得。

2.2.3阴性供试品溶液的制备取按处方除去淫羊藿药材的阴性样品，按上述供试品溶液制备方法制备阴性样品溶液，按照上述色谱条件，吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各10μl，注入液相色谱仪，绘制色谱图。见图1。

图1 八味益肾丸对照品

2.2.4色谱条件与系统适用性色谱柱为Kromasil C18柱（250mm×4.6mm，5μm），乙腈-水（30∶70）为流动相，流速1ml／min，柱温30℃，检测波长270nm，进样量10μl。见图1。

2.2.5线性关系考察精密量取对照品母液 （淫羊藿苷浓度0.126mg／ml）1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密吸取上述溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积积分值（Y，mAu*s）为纵坐标，对照品的进样量 （X，mg／ml）为横坐标进行线性回归，得淫羊藿苷回归方程为Y＝29635721.09X-14297.8（r＝0.9998），线性范围为0.0126～0.0756mg／ml。

2.2.6精密度实验取上述取同一淫羊藿苷对照品溶液，精密吸取10μl，按2.2.4色谱条件连续重复进样6次，测定峰面积。结果淫羊藿苷RSD为0.6%，表明仪器精密度良好。

2.2.7试品溶液稳定性考察取供试品溶液，按2.2.4色谱条件，分别于0、2、4、6、8、24h进样，测定峰面积。结果淫羊藿苷峰面积的RSD分别为0.21%，表明供试品溶液在24h内稳定性良好。

2.2.8重复性试验取同一批八味益肾丸 （批号：297023），研细，分别称取9份，分为三组，每组分别为0.16g、0.20g、0.24g，精密称定，按供试品溶液的制备方法制成供试品溶液，测定淫羊藿苷峰面积并计算含量，平均含量为1.93mg／g，RSD为0.33%所建方法重复性良好。

2.2.9加样回收率实验取同一批号已知含量供试品（批号：297023，淫羊藿苷含量为1.93mg／g），研细，分别称取9份，每份0.1g，精密加入不同量的对照品，按供试品溶液的制备方法制成供试品溶液，按上述色谱条件进行HPLC分析，测定淫羊藿苷的峰面积，计算加样回收率，结果淫羊藿苷的平均回收率为95.8%（n＝9），RSD＝0.31%，见表1。

表1 淫羊藿苷含量测定加样回收率实验考察结果 （%）

2.2.10样品测定结果取5批样品，按上述2.2.1和2.2.2项方法分别制备对照品溶液和供试品溶液，依法进样测定，计算，结果见表2。

表2 样品含量测定结果 （n＝5）

3 讨论

淫羊藿为本方中的君药，淫羊藿性味辛甘温，入肝肾二经，亦能补肾壮阳，为治阳萎不举之要药。且淫羊藿苷中含有的黄酮类成分具有促进免疫功能等多方面的药理作用［2］，故选择黄酮类成分淫羊藿苷作为含量测定指标。

本文对淫羊藿苷对照品溶液进行紫外扫描，淫羊藿苷在270nm处有最大吸收峰，该波长与2010年版中国药典基本一致，故选择270nm作为测定波长。本文还对流动相甲醇-水的组成比例进行了考察。

在含量测定中，分别对供试品溶液制备中的提取溶媒、提取方式和提取时间进行了考察。提取溶媒考察中，分别采用甲醇和稀乙醇提取，结果表明采用稀乙醇提取效果好。提取方式考察中分别采用了超声和回流提取，结果以超声法提取效果较好。在超声时间的考察中，分别考察了提取10～30min对淫羊藿苷含量的影响，结果选取20min即可。

［1］王艳辉，陈亚，绍禹，等．蚕蛾的应用研究进展［J］．中国蚕业，2008，（4）：14-15．

［2］李德勋．壮骨关节丸中淫羊藿、骨碎补的薄层色谱鉴别［J］．中成药，2003，25（8）：682-683．

Quality Control of Bawei Yishen Pills

Su Guolin Li Jun
(Chengde Jingfukang Pharmaceutical Group Co.Ltd,Chengde 067000,China)

Object1ve To establish effective methods for the determination of Bawei Yishen Pills．Methods TLC was performed to identify Silkworm moth and angelica Bawei Yishen Pills．HPLC was used to determine the contents of icariin．Results The spots on TLC plates were clear without interference．The calibration curves were linear within the range of 0.0126～0.0756 mg／ml for icariin，the average recovery rate was 95.8%，RSD＝0.31%．Conclusions：The method issimple，reliable，accurateand reproducible．It is suitable for the quality control of Bawei Yishen Pills．

Bawei Yishen Pills；Icariin；TLC；HPLC；Quality Control

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.22.119

：1672-2779（2013）-22-0155-03

吴义红

2013-09-23）

* 通讯作者