高效液相色谱法测定抗霉栓中酮康唑的含量

苗爱东，杨 静，徐轶飞

抗霉栓为医疗机构非标准制剂，由酮康唑和半合成脂肪酸甘油酯等辅料制成，具有抗真菌作用，临床主要用于治疗霉菌引起的阴道疾病［1］。现行标准采用三氯甲烷萃取后在242.5 nm波长处测定其含量，方法的准确性和重复性不好，无法有效控制该制剂的质量。为了能够更好的控制该制剂的质量，参考相关文献［2-7］，建立了高效液相色谱法(HPLC)测定抗霉栓中酮康唑含量的方法，现报告如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪(美国安捷伦科技有限公司，包括四元泵、脱气机、DAD检测器、自动进样器和ChemStation化学工作站);METTLER TOLEDO AG 285电子天平(d=0.01 mg，上海梅特勒－托利多仪器有限公司);酮康唑对照品(中国药品生物制品检定所，批号:100294-200602，纯度99.9%);抗霉栓(某医疗机构提供，批号:20100415、20100621、20100807);甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为重蒸水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Agilent Zorbax SB-C18(4.6 mm ×150 mm，5 μm);流动相:甲醇-水(74∶26);流速:1.0 ml/min;检测波长:239 nm;柱温:40℃。在此条件下，酮康唑与其他色谱峰分离良好，保留时间约为12 min，理论塔板数按酮康唑峰计算不低于3000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品储备液:精密称取经80℃减压干燥至恒重的酮康唑对照品80 mg，置于50 ml量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，得1.6 mg/ml的对照品溶液储备液。

2.2.2 供试品溶液:取本品10粒，精密称定。置烧杯中，微温(43℃)使其溶化，搅拌，至冷凝，精密称取本品0.54 g，置于50 ml量瓶中，加无水乙醇适量，置80℃水浴中使其溶解，放冷至室温，以无水乙醇稀释至刻度，摇匀，放置于冰水浴中2 h，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液:根据处方及生产工艺制备缺酮康唑的阴性样品，按供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。

2.3 专属性试验 取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液，按上述色谱条件测定，记录色谱图。结果显示，阴性对照对酮康唑的测定无干扰。见图1。

图1 高效液相色谱法测定3种溶液专属性试验色谱图

2.4 线性关系考察 分别精密吸取酮康唑对照品储备液 1.0、2.0、4.0、5.0、6.0、7.5 ml，无水乙醇定容至10 ml量瓶中，按“2.1”项下色谱条件进样10 μl，记录色谱峰面积值。酮康唑进样量m(μg)为横坐标，酮康唑色谱峰面积值为纵坐标，绘制工作曲线，得回归方程为:A=1504.6 m －59.44(r=0.9998，n=6)。结果表明，酮康唑在 1.80 ～13.50 μg范围内与色谱峰面积值呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验 取对照品溶液按“2.1”项下色谱条件，10 μl重复进样6次测定。结果表明酮康唑峰面积相对标准差(RSD)为0.53%(n=6)，提示仪器的精密度良好。

2.6 稳定性试验 取供试品溶液(批号:20100415)，按“2.1”项下色谱条件，在 0、2、4、8、12 h分别 10 μl进样测定。结果酮康唑的峰面积RSD为1.79%(n=6)，提示供试品溶液在12 h内稳定。

2.7 重复性试验 取同一样品(批号:20100415)6份，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，分别10 μl进样测定。结果酮康唑的平均含量为标示量的95.06%，RSD为1.27%(n=6)，表明方法的重现性良好。

2.8 加样回收率试验 精密量取已知含量(标示量的95.06%)的同一样品9份，精密加入适量酮康唑对照品储备液，按“2.2”项下制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，分别 10 μl进样测定，计算回收率，结果见表1。

2.9 样品测定 取3批抗霉栓样品，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，10 μl进样测定酮康唑的含量，结果见表2。

3 讨论

采用甲醇－醋酸盐溶液为流动相体系测定复方制剂中酮康唑含量的报道较多［8-13］。在本实验过程中，发现采用甲醇－水(74∶26)为流动相时，酮康唑色谱峰型对称性良好，可以满足含量测定的要求，且其他色谱峰无干扰。

有文献报道，酮康唑色谱峰在239 nm下的面积最大，故确定其为检测波长［5-7］。本实验具有简单、快速的优点，方法的准确度和重复性好，用于抗霉栓中酮康唑的含量测定，可提高该制剂的质量控制标准，为更好地进行质量评价提供参考和帮助。

表1 抗霉栓样品加样回收率试验结果(n=9)

表2 抗霉栓样品酮康唑含量测定结果(n=3)

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