HBV血清标志物与HBV-LP及HBV-DNA联合检测的临床意义初探

雷 平

（湖南师范大学第一附属医院，湖南省人民医院，湖南 长沙410006）

中国是乙型肝炎病毒( HBV)感染的高流行区。在一般人群中，HbsAg 的阳性检出率高达9.09%。而HBsAg 阳性率在接种与未接种乙型肝炎疫苗人群之间分别达4. 51%和9. 51%[1]。 因此, HBV 的早期检测及诊断对于乙肝的筛查及肝癌的预防具有重要意义。 目前为止，HBV 血清标志物检测已经有几十年的历史，它在乙肝的筛查、诊断以及治疗过程中占有极其重要的地位。 然而，随着免疫学检验技术的飞速发展，HBV-LP 的检测也开始应用于临床乙肝病毒的感染诊断及治疗监测。近年来, HBVDNA 的定性和定量检测也在临床上得到了广泛的应用。本研究对1210 例检测HBV 感染的血清标本的检测结果进行了回顾性分析。

1 材料与方法

1.1 样本来源

样本来自于2008年7月～ 2012年4月期间1210 例在我院门诊和住院的检测的患者血清。 其诊断均符合乙型病毒性肝炎的诊断标准及处理原则6(卫生部GB15990-1995)的诊断标准。

1.2 试剂与方法

乙肝血清标志物检测试剂盒购自英科新创(厦门)科技有限公司，HBsAg、HbeAg 采用ELISA 双抗体夹心法检测， 结果判定以S/CO≥1. 0 为阳性；HBsAb 采用ELISA 双抗原夹心法检测， 以S/CO≥1. 0 为阳性；HBeAb 以及HBcAb 采用ELISA 竞争法检测， 以S/CO<1. 0 为阳性；HBV-LP 蛋白检测试剂盒购自北京贝尔生物工程有限公司，采用双抗体夹心法检测， 以S/CO≥1. 0 为阳性； HBV-DNA荧光定量检测试剂盒购自大连宝生物工程有限公司，病毒载量≥1. 0×103拷贝/毫升判为阳性。

表1 HBV 血清模式与HBV-LP 及HBV-DNA 联合检测

1.3 仪器

美国bio-tek 公司ELX- 800 型酶标仪； 美国bio-rad 公司实时荧光定量基因扩增仪HBV-LP IQ5 型。

2 结果

2.1 HBV 的不同血清感染模式与HBV-LP 以及HBV-DNA 联合检测的结果

在HBV 的各种不同感染模式中，HBV-LP 与HBV-DNA 阳性的患者例数及其构成比例如表1所示。

Ⅰ组，HBsAg、HBeAg、HBcAb 阳性模式组(即是俗称的"大三阳")的HBV-LP 阳性率与其它各血清模式组之间分别比较，前者高于后者(乙肝两对半模式χ2 检验, P<0. 05)。 " 大三阳" 模式组的HBV-DNA 阳性率高于其余各血清模式组 (P<0.05)。

2.2 三种感染模式中，HBV-DNA 阳性标本的实时荧光定量PCR 结果

HBV-DNA 载量在3 种血清感染模式中的分布见表2。

Ⅰ（大三阳）组与Ⅱ（小三阳）组的HBV-DNA载量相比，两者具有显著性差异，前者高于后者(χ2检验,P<0. 05)；Ⅰ（大三阳）组与Ⅲ（HBsAg、HBcAb阳性）组比较, 前者的HBV-DNA 载量亦高于后者(P< 0. 05)；Ⅱ（小三阳）组与Ⅲ（HBsAg、HBcAb 阳性） 组相比，HBV-DNA 水平无显著性差异(P>0.05)。

表2 3 种血清模式HBV-DNA 阳性标本的定量检测结果

3 讨论

乙型肝炎病毒(HBV)是一种嗜肝DNA 病毒，其染色体结构部分双链并形成了一个约3.2Kb 的环状结构。HBV 的某些部位可发生变异，如前C 区和基本核心启动子(BCP) ，这些部位的变异导致HBeAg 不表达或低表达，产生HBeAg 阴性的变异株[2]。

HBV-DNA 是临床上用来评估抗病毒疗效的重要指标之一，是证明外周血中HBV-DNA 复制的金标准，基于PCR 的高灵敏性，可以用来判断乙肝患者和乙肝病毒携带者有无传染性[2,3]。 但是，血清HBV-DNA 检测尚未标准化，对于其检测限的认识仍存在一定的争议。 而在实际临床治疗过程中，肝内cccDNA 的降低远远低于血清HBV-DNA 水平，血清低水平HBV-DNA 时， 肝内仍可维持一定水平。 因此，血清HBV-DNA 检测为阴性时并不意味着HBV 已经完全清除干净[4]。

HBeAg 是临床上使用的另一个重要标志物，它用来判定HBV 传染性的强弱、 复制程度以及慢性乙型肝炎患者的预后等[5]。但是由于某些因素，如持续免疫压力、 长期治疗、 前C 和C 启动子变异等， 致使HBeAg 阴性的慢型乙型肝炎患者明显增多， 此时患者的体内仍可能存在极低水平的HBV病毒复制[6]。因此，HbeAg 的转阴并不能完全排除病毒的感染与复制的可能，进而在临床上造成难以确定停药时机等情况。

HBV 可以分泌3 种外膜蛋白，HBV-LP 是其中之一，它可以与中蛋白和小蛋白以合适的比例组装成Dane 颗粒。 而HBV-LP 是这3 种膜蛋白中与Dane关系最密切的成分，即与HBV 的复制密切相关[3,7]。

本研究发现，在"大三阳"模式组中，HBV-DNA阳性率占95.3%(244/256)，显著高于其他各模式组(P<0.05)， 这提示HBV-DNA 与HBeAg 高度相关。另外，" 大三阳" 模式组中,HBV-LP 的阳性率占88.3%(226/256)，显著高于其余各模式组(P<0.05)，表明HBV-LP 与HBeAg 亦具有较高的相关性，与已有的文献报道结果基本一致[8]。

另外，在HBsAb、HBcAb 阳性模式组检测出1例HBV-DNA 阳性(1/64)，其可能原因是经过治疗后在患者体内已经开始产生HBsAg/HBsAb 血清转换，但是还未完全清除HBV 病毒引起[9]。 HBeAb、HBcAb 阳性模式组检测出1 例HBV-DNA 阳性(1/41)， 其可能原因是由于S 基因的突变导致了HBsAg 检测呈现阴性结果， 而体内的HBV 却依然呈低复制水平[10]。

综合上述结果分析，HBV 的血清学标志、HBV-LP 以及HBV-DNA 载量的联合检测有助于指导医生选择最佳治疗方案、监测病情变化并有助于临床疗效观察。

[1] 梁晓峰,陈园生,王晓军,等. 中国3 岁以上人群乙型肝炎血清流行病学研究[J]. 中华流行病学杂志, 2005(09).655-658

[2] Dandri M, Locarnini S. New insight in the pathobiology of hepatitis B virus infection[J]. Gut, 2012, 61 Suppl 1: i6-i17.

[3] Wang NY, Zhang D, Zhao W, Li BA, Lin CQ. Hepatitis B virus large surface protein in serum as a candidate biomarker for evaluating hepatitis B virus infection[J]. Clin Biochem, 2011, 44(14-15): 1199-1204.

[4] 温怀凯,余坚,李小永,等. 乙型肝炎病毒外膜大蛋白与HBV DNA 的关系研究[J]. 浙江大学学报(医学版). 2010,(04).386-389

[5] 陈惠文,刘壬通,罗宜招,等. 乙型肝炎病毒外膜大蛋白检测的临床应用[J]. 中国医药指南, 2010(22).78-79.

[6] 张静,高纯,史进方,等. 乙型肝炎病毒外膜大蛋白和病毒标志物联合检测的意义 [J]. 检验医学与临床, 2012(06).646-648.

[7] 范公忍,李娟,王帅,等. 乙型肝炎病毒外膜大蛋白检测对判断病毒复制的临床意义[J]. 检验医学. 2012(2).145-147.

[8] 张静,高纯,史进方,等. 乙型肝炎病毒外膜大蛋白和病毒标志物联合检测的意义[J]. 检验医学与临床, 2012(6).646-648.

[9] 谷茂林,王兴亮,吴婷婷.不同HBV 标志物模式的乙型肝炎患者HBV 表面大蛋白的检测及与HBV DNA 水平的相关性[J]. 临床肝胆病杂志, 2011(08).810-812.

[10] 蒋伯帅,刘雪平,蒲荣,等. 乙型肝炎病毒外膜大蛋白和HBVDNA 血清学诊断价值[J]. 中国微生态学杂志,. 2010(2).154-157.