整合素α5β1、P-选择素与宫颈鳞癌生物学行为的关系*

王 闯，王明娟，乔志燕，齐洁敏△

(1.承德医学院，河北承德 067000;2.承德医学院附属医院)

宫颈癌是目前危害妇女健康的常见恶性肿瘤，发病率和死亡率均较高。与大多数的恶性肿瘤一样，其发生发展的机制与治疗方法的突破是当前研究的热点、重点。浸润与转移是恶性肿瘤重要的生物学特征，而黏附分子在肿瘤细胞的浸润、转移中发挥了重要作用。整合素α5β1和P-选择素作为黏附分子，二者的异常表达与肿瘤细胞的浸润、转移有关。目前，在宫颈鳞癌发生发展过程中，整合素α5β1与P-选择素的相关性研究尚未见报道。本研究采用免疫组化SP法检测了宫颈鳞癌组织整合素α5β1、P-选择素的表达情况，并分析了二者与宫颈鳞癌生物学行为的关系及二者间的相关性。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2011年1月至2013年12月承德市多家医院手术切除宫颈鳞癌标本60例，患者年龄33-67岁，中位年龄52.3岁，所有病例在术前均未接受化疗、放疗，临床及病理资料完整。宫颈正常组织40例，为子宫平滑肌瘤等良性病变行全子宫切除的宫颈正常组织，年龄35-70岁，中位年龄55岁。

1.2 主要实验试剂 兔抗人整合素α5β1多克隆抗体、兔抗人P-选择素多克隆抗体，北京博奥森生物技术有限公司，免疫组化SP检测试剂盒、DAB显色试剂盒，北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 免疫组化染色 所取标本10%福尔马林固定，常规石蜡包埋，连续切片，片厚4μm。采用SP免疫组化染色法。一抗工作浓度1:150，以PBS代替一抗作为阴性对照，以已知染色阳性切片做阳性对照。

1.4 结果判定 整合素α5β1阳性表达主要定位于细胞浆或细胞膜，呈黄色颗粒;P-选择素阳性表达定位于细胞浆，呈棕黄色颗粒。整合素α5β1和P-选择素阳性表达水平以阳性细胞数评分及染色强度评分综合判定。⑴阳性细胞数评分:随机选4个视野(×200倍)，每个视野计数为100个肿瘤细胞，计数400个肿瘤细胞中染色阳性细胞数并计分:阳性细胞数＜10%为0分，阳性细胞数＜25%为1分，阳性细胞数＜50%为2分，阳性细胞数≥50%为3分。⑵阳性染色强度评分:与背景一致为阴性(0分);呈淡黄色，略深于背景色为弱阳性染色(1分);呈中等黄色，明显深于背景色为阳性染色(2分);呈棕黄色或棕褐色，胞浆内也可见着色的为强阳性染色(3分)。以阳性细胞数评分+阳性染色强度评分判定结果:0分为阴性(-)，1-2分为低表达(+)，3-4分为中度表达(++)，5-6分为高表达(+++)。

1.5 统计分析 采用SPSS 17.0统计软件进行分析，行卡方检验，相关性分析采用Spearman等级相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 整合素α5β1和P-选择素的表达情况 宫颈鳞癌组织整合素α5β1、P-选择素的阳性率分别为65.0%、71.7%，均明显高于宫颈正常组织(P＜0.05)。见表1:

表1 整合素α5β1、P-选择素在宫颈鳞癌组织和宫颈正常组织中的表达

2.2 整合素α5β1和P-选择素表达与宫颈鳞癌生物学行为的关系 宫颈鳞癌组织整合素α5β1、P-选择素的表达与年龄无关(P＞0.05)，与宫颈鳞癌的分化程度、pTNM分期、淋巴结转移、浸润深度有关(P＜0.05)。见表2:

表2 整合素α5β1、P-选择素表达与宫颈鳞癌生物学行为的关系

2.3 宫颈鳞癌组织整合素α5β1与P-选择素表达的相关性 整合素α5β1、P-选择素在宫颈鳞癌中的表达呈正相关关系(r=0.370，P＜0.05)。见表3:

表3 整合素α5β1、P-选择素在宫颈鳞癌组织中表达的相关性

3 讨论

整合素家族是一组跨膜蛋白，可参与细胞的信号传导，调控基因表达、细胞周期和细胞凋亡[1-2]。整合素在肿瘤中既介导肿瘤细胞和细胞外基质的黏附，促进肿瘤细胞的侵袭和转移;又介导信息从细胞外向细胞内传递，异常信息传递将促进肿瘤细胞的失控性生长和肿瘤细胞的分化与远处转移[3]。整合素家族中的整合素α5β1在肿瘤的侵袭、转移中具有重要作用。目前已有研究发现，整合素α5β1在肝癌、肺癌、胃癌、肠癌等肿瘤细胞中都有表达，蛋白的水平或极性分布随肿瘤的发生发展变化，这与肿瘤的细胞起源、恶性程度及整合素α5β1作用的多样性有关[4-5]。

P-选择素是细胞黏附分子选择素家族的重要成员，通过与其配体结合介导肿瘤细胞与血小板和血管内皮细胞之间的特异性黏附[6]。与内皮细胞、血小板等黏附是恶性肿瘤细胞转移、扩散不可缺少的环节，因此P-选择素是肿瘤细胞侵袭、转移的关键因素，在肿瘤细胞血行转移中起重要作用。

本研究发现整合素α5β1、P-选择素在宫颈鳞癌组织中的阳性表达率明显高于宫颈正常组织，与宫颈鳞癌的分化程度、pTNM分期、浸润深度、淋巴结转移有关，且宫颈鳞癌二者呈正相关关系，由此表明整合素α5β1、P-选择素在宫颈鳞癌的发生发展和浸润、转移中起重要作用，且二者可能在宫颈鳞癌的发生中具有协同作用。

综上所述，整合素α5β1、P-选择素与宫颈鳞癌的生长、浸润与转移密切相关，深入研究整合素α5β1、P-选择素与宫颈鳞癌生物学行为的关系，将有助于预测宫颈鳞癌的浸润、转移，以及指导治疗、评估预后。

[1] Desgrosellier JS,Barnes LA, Shield DJ, et al. An integrin alpha5beta1-e-Src oncogenic unit promotes an chorgeindependence and tumor progression[J]. Nat Med, 2009, 15(10):1163-1169.

[2] Xiong JP, Mahalingham B, Alonso JL, et al. Crystal structure of the complete integrin alphaVbeta3 ectodomain plus and alpha/beta transmembrane fragment[J]. J Cell Biol, 2009, 186(4):589-600.

[3] Gerger A, Hofmann G, Langsenlehner U, et al. Integrin alpha5 gene polymorphisms and colorectal cancer risk[J]. Int J Coloreetal Dis, 2009, 24(2): 159-163.

[4] 李桃，齐洁敏.整合素α5β1、CD151在胃癌中的表达及意义[J].中国老年学杂志，2013，33(11):2527-2529.

[5] 赵丽娟，万义增，肖马，等.整合素α5β1和E-选择素蛋白在结直肠腺癌中的表达及意义[J].肿瘤防治研究，2011，38(7):799-802.

[6] 于笑涵，杨方.P-选择素及其配体与肿瘤转移[J].中国煤炭工业医学杂志，2011,14(9):1414-1416.