CD4+CD25+Foxp3+细胞在哮喘大鼠发病的作用

张学敏

山西煤炭中心医院呼吸内科，山西 太原 030006

CD4+CD25+Foxp3+细胞在哮喘大鼠发病的作用

张学敏

山西煤炭中心医院呼吸内科，山西 太原 030006

目的观察在哮喘大鼠中CD4+CD25+调节性T细胞Foxp3表达的变化，分析支气管哮喘的发病机制，并为临床的治疗提供新方向。方法随机将16只雄性的Wistar大鼠分为正常对照组和哮喘组，每组各8只。哮喘组：用卵白蛋白（OVA）使大鼠致敏，并予以雾化吸入刺激；正常对照组：等量生理盐水处理。最后一次激发后，采用HE染色评价大鼠肺组织病理形态学改变；免疫组化染色分析Foxp3表达量；ELISA法测定肺泡灌洗液（BALF）IL-4及IFN-γ水平。结果哮喘组BALF中细胞因子IL-4明显高于盐水对照组，IFN-γ含量也升高，但IFN-γ/IL-4水平下降，即IFN-γ相对不足；哮喘组肺组织内Foxp3明显增高，说明体内CD4+CD25+调节性T细胞在哮喘发作时出现异常分布的现象。结论CD4、CD25和Foxp3+三者共同调节性T细胞，与支气管哮喘的发病机制密切相关，并打破Th1/Th2原有的平衡机制。

Foxp3；T细胞；支气管哮喘

近几年，研究表明在维持机体免疫稳态及抑制炎症方面，T细胞的调节起重要作用，与哮喘气道炎症的发生相关密切。

1 材料和方法

1.1 材料

山西医科大学实验动物中心提供健康的Wistar大鼠16只，均为雄性。将动物随机分为正常对照组和哮喘模型组，每组各8只。罗氏公司的卵蛋白卵白蛋白，北京天坛生物制药研究所的灭活过的百日咳杆菌疫苗，天津三厂的氢氧化铝粉。

1.2 实验方法

正常对照组：从第1～14 d内，每隔7 d对大鼠予以腹腔注射1 ml生理盐水；14 d后，予以雾化治疗，每天吸入1次生理盐水，30 min/次，共7 d。

哮喘组［1］：从第1～14 d内，每隔7 d对大鼠进行腹腔注射1 ml抗原液；14 d后以，每日雾化吸入1次1%OVA生理盐水液进行激发，30 min/次，连续7 d。

观察给药期间两组大鼠的各种反应，阳性：呼吸急促，躁动不安，腹肌抽搐等；阴性：没有上述反应，行动如常。

标本采集：取下每只大鼠的左肺，分别给予以下操作：甲醛固定，石蜡包埋、切片，对切片分别进行HE染色和Foxp3试剂免疫组化染色，观察其Foxp3表达的情况。

灌洗液的采集：夹闭左主支气管，对每只大鼠的右肺予以3次的冰盐水灌洗，灌洗量分别以3 ml、3 ml、和4 ml，最后收集灌洗液，进行1500转的10 min离心，收集上清液并进行ELISA法检测，测定IFN-γ、IL-4的含量。

1.3 统计学分析

所有研究数据均采用SPSS 13.0统计学软件进行统计分析，差异显著，有统计学意义（P＜0.05）。

2 结果与分析

哮喘模型的大鼠的肺组织发生了病理形态的改变。光镜下观察两组大鼠的染色标本发现，在哮喘组大鼠的肺组织内出现较多的支气管腔粘液。部分支气管呈花瓣状。而正常对照组的大鼠肺组织其形态基本正常。

哮喘大鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）Th1/Th2因子含量，见表1。

肺泡灌洗液（BALF）Th1/Th2因子结果显示：哮喘大鼠肺泡灌洗液中IL-4及IFN-γ均较正常组高（P＜0.001）。但由IFN-γ增高的幅度明显小于IL-4，即IFN-γ/IL-4比值明显下降表现为Th2优势。

哮喘大鼠肺组织Foxp3表达，见表2。

表1 两组大鼠BALF液Th1/Th2因子含量（）pg/ml

表1 两组大鼠BALF液Th1/Th2因子含量（）pg/ml

注：与哮喘组比较*P＜0.001；与正常组比较▲P＜0.001

组别 例数 IFN-γ IL-4正常对照组 8 10.84±2.81* 17.67±3.53▲哮喘组 8 14.53±3.35* 71.05±3.91▲

表2 两组大鼠肺组织Foxp3表达比较（x-±s）

3 讨论

作为气道慢性炎症中的支气管哮喘，有多种细胞发生浸润现象，其发生与多种炎症因子有关。Th2细胞产生大量IL-4，在支气管哮喘发生的各环节中均起重要作用。IFN-γ是活化Th1细胞分泌的最主要的细胞因子，具有使致敏小鼠血浆内的IgE水平和气道高反应性降低，并使BALF中的浸润细胞数量不断减少。同时，IFN-γ对IL-4产生拮抗作用，减弱体内IgE的生成。此外，IFNγ对EOS的聚集有强烈的抑制作用，增强EOS的活化能力，并降低分化的GM-CSF水平。本实验通过测定哮喘BALF中细胞因子IL-4，INF-γ含量变化，表明哮喘组BALF中细胞因子IL-4明显高于盐水对照组，IFN-γ含量也升高，但是IFN-γ与IL-4的比值呈下降趋势，说明IFN-γ是呈相对不足的状态。

CD4+CD25+T三者接触抗原并产生刺激，从全身聚集到气道，导致Th1/Th2失去平衡，最终引发了气道的慢性非特异性炎症。罗征秀等［2］报道对比CD4+CD25+T的调控功能发现，Th1比Th2容易被调控，说明CD4+CD25+T可能是通过对气道的Th1细胞发挥抑制功能，最终促使Th2细胞发生分化过度现象。

综上，在支气管哮喘的发病机制中，CD4+CD25+调节性T细胞具有重要地位，CD4+CD25+调节性T细胞可打破h1/ Th2的平衡状态，使局部的炎症细胞发生浸润，最终致使气道的慢性非特异性炎症的发生；其与肺组织内TGF-β的高表达密切相关，可使气道发生重塑，并与哮喘慢性气道粘膜的改变密不可分。

［1］吕国平，崔德健，郭英江，等．介绍一种建立大鼠哮喘模型的实验方法［J］．中华结核和呼吸杂志，1995，18（6）：377．

［2］罗征秀，刘恩梅，邓兵，等．Foxp3表达与CD4+CD25+调节性T细胞在儿童哮喘发病中的作用［J］．中华儿科杂志，2006，44（4）：267-271．

R562.25

B

1674-9316（2014）16-0002-02

10.3969/J.ISSN.1674-9316.2014.16.002