HPLC法测定葛根汤颗粒中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量

李具伟，臧恒昌，王彦厚

（1.山东大学药学院，山东济南250012；2.瑞阳制药有限公司，山东淄博256100；3.淄博市食品药品检验所，山东淄博255086）

HPLC法测定葛根汤颗粒中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量

李具伟1，2，臧恒昌1，王彦厚3

（1.山东大学药学院，山东济南250012；2.瑞阳制药有限公司，山东淄博256100；3.淄博市食品药品检验所，山东淄博255086）

目的建立一种葛根汤颗粒中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量的测定方法。方法采用高效液相色谱法，以极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂，以甲醇－0.092%磷酸溶液（含0.04%三乙胺和0.02%二正丁胺）（1.5∶98.5）为流动相，检测波长为210 nm。结果在该色谱条件下，盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱的线性范围分别为：4.08～81.6μg·mL－1（r＝0.999 9）与4.1～82μg·mL－1（r＝0.999 9），平均回收率分别为98.8%、98.5%。结论该方法简单、准确、重现性好，可作为葛根汤颗粒中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量测定方法。

葛根汤颗粒；高效液相色谱法；盐酸麻黄碱；盐酸伪麻黄碱

葛根汤为传统的中药方剂，由葛根、麻黄、白芍、桂枝、甘草、生姜、大枣六味中药组成，具有发汗解表生津舒经的功效。葛根汤颗粒为采用葛根汤的传统配方制备而成的颗粒剂，用于发热恶寒，鼻塞流涕，咳嗽咽痒，咳痰稀白，汗出，头痛身疼，项背强急不舒，苔薄白或薄白润，脉浮或浮紧。现代研究一般侧重于葛根汤中葛根素的含量测定［1～3］，对于麻黄的质量控制研究报道较少。张月华等［4］采用气－液色谱法测定葛根汤中麻黄碱的含量，但对于盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱这两种麻黄中的主要成分分别进行质量控制的研究未见相关报道。为了更好地控制葛根汤颗粒的质量，加强对易制毒药品的管理，本文建立了一种测定葛根汤颗粒中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量的方法，该方法简便、重现性好，可用于葛根汤颗粒的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器 高效液相色谱仪（岛津，Shimadzu LC－20ATVP），检测器（Shimadzu SPD－20AVP），精密电子天平（XS105DU）。

1.2 试药 盐酸麻黄碱对照品（批号：171241－200506，含量：100%，中国药品生物制品检定所）。盐酸伪麻黄碱对照品（批号：171237－200505，含量：100%，中国药品生物制品检定所）。甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

1.3 供试品 葛根汤颗粒（瑞阳制药有限公司，批号：12052811、12041811、12020811、12042011、12011611、12041311、12041511、12052711、12033011、12052711）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：以极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂（4.6 mm×250 mm，5μm，月旭材料科技有限公司）；流动相：以甲醇－0.092%磷酸溶液（含0.04%三乙胺和0.02%二正丁胺）（1.5∶98.5）为流动相；检测波长：210 nm；流速：1.0 mL·min－1，进样量：10μL。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取盐酸麻黄碱对照品、盐酸伪麻黄碱对照品适量，加甲醇分别制成每1 mL各含40μg的混合溶液，即可。色谱图见图1。

2.3 供试品溶液的制备 将本品研细，取细粉约

0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入1.44%磷酸溶液50 mL，称定重量，超声处理（功率600 W，频率50 kHz）20 min，放冷，再称定重量，用1.44%磷酸溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。色谱图见图2。

图1 对照品色谱图

2.4 线性关系的考察 分别精密称取盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱对照品0.020 4 g和0.020 5 g，置50 mL容量瓶中，用1.44%磷酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取0.1、0.5、1.0、1.5、2.0 mL，置10 mL容量瓶中，加1.44%磷酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为测试溶液。分别精密量取各溶液10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积对相应浓度进行线性回归处理，得回归方程为：Y盐酸麻黄碱＝24 913X＋2 264.3（r＝0.999 9），Y盐酸伪麻黄碱＝25 168X＋11 496（r＝0.999 9），结果表明溶液浓度分别在4.08～81.6μg·mL－1与4.1～82μg·mL－1（r＝0.999 9）之间，盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱的峰面积与相应浓度呈良好的线性关系。

图2 供试品色谱图

2.5 重复性试验 取同一批样品（批号：12052811），按2.3项下的方法制备6份平行样品，分别测定，盐酸麻黄碱的平均含量为0.383 5%，RSD为0.10%，盐酸伪麻黄碱的平均含量为0.052 4%，RSD为0.15%。结果表明本方法的重复性良好。

2.6 稳定性试验 取同一批号的供试品溶液，分别于0、1、2、4、6 h测定，结果盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量的RSD分别为0.30%和0.45%，n＝6，表明供试品溶液在6 h内稳定性良好。

2.7 加样回收率试验 取同一批号的样品（批号：12052811，盐酸麻黄碱含量0.383 5%，盐酸伪麻黄碱含量0.052 4%）9份，每份约0.5 g，分成3组，每组3份，精密称定后，第1组每份加入样品含量80%的盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱对照品，第2组每份加入样品含量100%的盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱对照品，第3组每份加入样品含量120%的盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱对照品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，摇匀，测定。盐酸麻黄碱的平均回收率为98.8%，RSD为0.90%，盐酸伪麻黄碱的平均回收率为98.5%，RSD为0.80%，结果见表1。

表1 加样回收率试验

2.8 样品测定与结果 分别按照“2.2”，“2.3”项下操作制备供试品溶液与对照品溶液，分别精密量取10μL注入液相色谱仪，测定峰面积，结果见表2。

表2 葛根汤颗粒样品中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的含量测定

3 讨论

3.1 检测波长的选择 盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱在210 nm处有最大吸收，根据参考文献［4～7］确定检测波长为210 nm，在此波长下的基线平稳，检测灵敏度高。

3.2 流动相的选择 曾试用甲醇－0.092%磷酸溶液，乙腈－0.092%磷酸溶液，主峰拖尾比较严重，根据参考文献［5］加入三乙胺和二正丁胺有效地改善了主峰的拖尾现象，在该流动相条件下，主峰的拖尾因子小于1.5，样品中的其他物质色谱峰与主成分色谱峰分离度良好，保留时间比较合适，理论塔板数较高。

3.3 色谱柱的选择 分别选用C18色谱柱（4.6 mm ×250 mm，5μm，月旭材料科技有限公司），C8色谱柱（4.6 mm×250 mm，5μm，SMA公司），极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂的色谱柱（4.6 mm× 250 mm，5μm，月旭材料科技有限公司），其中C18色谱柱和C8色谱柱主峰与其他杂质峰的分离度小于1.5，最终确定选用极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂的色谱柱。

3.4 本方法操作简单、准确，重现性好，可作为葛根汤颗粒中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量测定方法。

［1］葛尔宁.RP－HPLC法测定葛根汤中葛根素的含量及变化［J］.中国实验方剂学杂志，2005，11（4）：12－13.

［2］吴永芹，冯凯，周慧，等.HPLC法同时测定葛根芩连片中葛根素和黄芩苷的含量［J］.中国药事，2012，26（3）：282－284.

［3］谭姣章.HPLC法对黄芪葛根汤中的异黄酮类有效成分含量测定［J］.医学信息，2011，24（6）：1547－1549.

［4］张月华，黎若熹，贺良华.气－液色谱法测定葛根汤中的麻黄碱含量［J］.中成药研究，1985，3：29－30.

［5］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010版（一部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：1.

［6］马毅，晋玲，王振恒，等.HPLC测定不同产地麻黄中麻黄碱和伪麻黄碱的含量［J］.西部中医药，2012，25（7）：14－16.

［7］李宏，于自勋，岳昌林.复方勒马回颗粒中麻黄碱含量测定［J］.药物分析杂志，2006，26（9）：1340－1342.

表3 3批供试品有关物质检测结果

由上表可以看出，UPLC与HPLC检测结果基本一致，具备同样的检测能力。

5 讨论

中国药典收录的氨苄西林有关物质检测方法为梯度洗脱方法，梯度洗脱时间在60 min以上，耗时较长，而使用UPLC法检测有关物质，14.6 min一针梯度洗脱，检测时间至少缩短了75%，节省了试剂的使用，大大提高了工作效率。同时该方法与药典收录的HPLC检测方法有等效的检测能力，适用于氨苄西林有关物质的分析检测。

参考文献：

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（二部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：831.

［2］陈佳，王钢力，姚令文，等.超高效液相色谱（UPLC）在药物分析领域中的应用［J］.药物分析杂志，2008，28（11）：1976－1981.

［3］Mark E Benvenuti.使用超高效液相色谱ACQUITY UPLC快速分析醛酮类化合物［J］.环境化学，2008，27（4）：549－550.

［4］矫筱蔓，赵晓东，王全一.UPLC测定注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠［J］.药物分析杂志，2011，31（3）：504－508.

［5］姚蕾，施亚琴，胡昌勤.注射用氨苄西林钠舒巴坦钠中有关物质HPLC检测方法的改进［J］.中国抗生素杂志，2009，34（12）：734－738.

Determ ination of ephedrine hydrochloride and pseudoephedrine hydrochloride in Gegentang Granules by HPLC

LIJu-wei1，2，ZANG Heng-chang1，WANG Yan-hou3
（1.School of Pharmaceutical Sciences，Shandong University，Jinan 250012，China；2.Reyoung Pharmaceutical Co.，Ltd.，Zibo 256100，China；3.Zibo Institute for Food and Drug Control，Zibo 255086，China）

ObjectiveTo establish a method for the content determination of ephedrine hydrochloride and pseudoephedrine hydrochloride in Gegentang Granules.MethodsThe HPLC analysis was carried out on polar ether connected phenyl bonded silica gel analytical column withmethanol－0.092%phosphoric acid（containing 0.04%triethylamine and 0.02%di－n－butylamine）（1.5∶98.5）asmobile phase.The detection wavelength was at210 nm.ResultsThe liner ranges of ephedrine hydrochloride and pseudoephedrine hydrochloridewere4.08～81.6μg·mL－1and 4.1～82μg·mL－1.The average recoveries of ephedrine hydrochloride and pseudoephedrine hydrochloride were respectively 98.8%and 98.5%.ConclusionThemethod was simple，accurate and reproducible，and it can be used for the determination of ephedrine hydrochloride and pseudoephedrine hydrochloride in Gegentang Granules.

Gegentang Granules；HPLC；Ephedrine hydrochloride；Pseudoephedrine hydrochloride

R927.2

：A

2095－5375（2014）03－0150－003

李具伟，研究方向：药品质量分析，E－mail：lijuwei＠reyoung.cn

王彦厚，硕士生导师，主任药师，研究方向：药物分析与质量控制，Tel：0533－3591186，E－mail：wyhzb＠163.com