宫颈鳞癌survivin和caspase-3的表达及其相关性

朱红玲，张 华，徐卫鸿

宫颈鳞癌survivin和caspase-3的表达及其相关性

朱红玲1，张 华2，徐卫鸿2

目的 研究survivin蛋白和caspase-3蛋白在宫颈鳞癌组织中的表达及其相关性。方法 收集宫颈鳞癌标本50例，宫颈上皮内瘤样病变(cervical intraepithelial neoplasia ，CIN)20例，正常宫颈标本14例。应用免疫组化法检测survivin蛋白和caspase-3蛋白在上述三种宫颈组织中的表达。结果 survivin 、caspase-3蛋白在正常宫颈组织、CIN、宫颈鳞癌三种不同宫颈组织的表达中有明显差异(P<0.05)。survivin在临床分期晚，病理分级高的宫颈鳞癌中表达增强；但caspase-3的表达越弱(P<0.05) 。survivin、caspase-3蛋白在宫颈鳞癌中的表达呈负相关。结论 (1)survivin的阳性表达可作为宫颈恶变的预测指标；(2)survivin强阳性表达结合caspase-3的弱表达，对预测宫颈鳞癌的不良预后有一定的意义

Survivin 蛋白； caspase-3蛋白；宫颈癌；免疫组化；细胞凋亡

survivin是凋亡抑制蛋白家族(IAPs)新近发现的一个成员， 1997年耶鲁大学的Altieri等[1]发现，在多种恶性肿瘤组织中survivin呈异常高表达，并可通过直接与Caspase家族，特别是Caspase-3和-7结合发挥其抗凋亡的作用。本研究采用免疫组织化学法(S-P法)检测survivin蛋白、 caspase-3蛋白在3种不同宫颈组织中的表达并结合临床病理特征进行分析，旨在探讨survivin在宫颈鳞癌发生发展中的作用，以及与caspase-3表达的相关性及其临床意义。

1 材料与方法

1.1 材料 收集我院妇科2009-01至2012-05手术切除后未经放、化疗的宫颈鳞癌石蜡标本(宫颈鳞癌组)50例(除外Ⅱb期术前行1～2次新辅助化疗)，年龄为28～69岁，平均50.2岁，病理分级:G1级15例，G2级14例，G321例。临床分期Ⅰ期23例，Ⅱa期11例，Ⅱb期16例(患者年龄轻保留卵巢，术前行新辅助化疗1～2次)。肿瘤生长类型：菜花型23例，结节型22例，溃疡型5例。CIN(CIN组)20例(来源于宫颈活检或LEEP手术标本)，年龄29～57岁，平均年龄45.6岁，其中，CIN Ⅰ 6例，CIN Ⅱ 9例，CIN Ⅲ 5例。正常宫颈标本(正常组)14例，年龄31～66岁，平均51.4岁。病理诊断符合《妇产科病理学》的宫颈癌的分级诊断标准。临床分期均按2009年修订的国际妇产科联合会(FIGO)的诊断标准。

1.2 试剂和方法 采用survivin兔抗人多克隆抗体0.1 ml浓缩液(RB-1629)(Neomarker公司产品)，caspase-3兔抗人多克隆抗体0.1 ml浓缩液(RB-1197)(Neomarker公司产品)，SP试剂盒(天津津脉生物技术开发公司)。采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶染色法(SP免疫组化法)对3组标本进行处理。

1.3 结果判定 采用Sinicrope[2]改良法记录各级切片中染色细胞的百分数，染色细胞计数所占比例至少在5个400倍视野，分为5级。0分:染色细胞<5%； 1分:染色细胞5%～25%；2分:染色细胞25%～50%；3分:染色细胞50%～75%；4分:染色细胞>75%。染色强度分为4级。0分:不显色；1分:浅黄色；2分:棕黄色；3分:深棕色。每份切片记分=染色细胞数分数×染色强度分数。所得分数0和1分为阴性结果，2和3分为弱阳性(+)，4分为中度阳性(++)，>5分为强阳性(+++)。

1.4 统计学处理 采用SPSS11. 0统计软件包处理，各项指标间差别检验均应用χ2检验，组间相关性采用spearman相关分析。 以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

表1 survivin蛋白和caspase-3蛋白在宫颈 疾病中的阳性表达 (n;%)

注：与CIN组比较，①P<0.05；与宫颈鳞癌组比较，②P<0.05

2.2 survivin、caspase-3蛋白表达与宫颈鳞癌患者临床病理特征的关系 survivin蛋白在菜花型、结节型、溃疡型等肿瘤生长类型中阳性表达率差异无统计学意义；survivin蛋白在临床分期Ⅰ期、Ⅱa期、Ⅱb期三期中阳性表达率差异有统计学意义(P<0.05)；survivin蛋白在病理分级G3级中阳性表达率高于G1+G2宫颈鳞癌(P<0.05)。见表2。

caspase-3蛋白在菜花型、结节型、溃疡型等肿瘤生长类型中阳性表达率差异无统计学意义；在临床分期Ⅰ期、Ⅱa期、Ⅱb期三期中阳性表达率差异也无统计学意义；但caspase-3蛋白在病理分级G1+G2和G3级中阳性表达率差异有统计学意义(P<0.05)，结果见表2。

表2 survivin蛋白和caspase-3蛋白表达与宫颈鳞癌患者 临床病理特征的关系

注：与Ⅱb期比较，①P<0.05；与Ⅱa期比较，②P<0.05

2.3 survivin蛋白和caspase-3蛋白在宫颈鳞癌组织中表达的相关性 宫颈鳞癌组织中survivin蛋白表达与caspase-3蛋白表达有显著相关性，21例caspase-3蛋白阳性表达标本中有10例survivin蛋白呈阳性，占47.6%；29例caspase-3蛋白阴性表达标本中24例survivin蛋白呈阳性表达，占82.8%。经相关分析，两种蛋白表达之间成负相关(Spearman相关系数r=-0.372，P<0.05)。

3 讨 论

Michael等[3]发现，survivin在正常宫颈上皮组织、CIN中均有胞核染色，在不成熟的鳞状化生及鳞状上皮癌中则可见到胞浆染色，因而认为survivin在正常的宫颈上皮分化中起着重要作用。Kim等[4]运用反转录PCR (RT-PCR)技术，发现survivin的表达阳性率随着宫颈肿瘤的进展，从低度鳞状上皮内瘤样病变(LSIL)、高度鳞状上皮内瘤样病变(HSIL)及SCC中逐渐升高。本研究有同样的结果，survivin的表达与宫颈CIN和鳞状细胞癌有着密切的关系，临床上可以检测宫颈CIN组织的survivin蛋白表达，对预测宫颈CIN转变为宫颈鳞癌提供一定的参考依据。

于娟等[5]发现，在宫颈癌中survivin的表达与宫颈癌的组织学分级、浸润深度、临床分期呈显著相关，与年龄、分化程度及组织类型均无关。朱华等[6]采用原位杂交法同样显示survivin mRNA的阳性率在宫颈癌的组织分化程度中,低分化组的表达高于高、中分化组,ⅡB～Ⅲ期显著高于I～ⅡA期;在淋巴结转移组中高于无淋巴结转移组。卢洪胜等[7]的研究结果也支持Survivin表达在子宫颈癌的FIGO分期、间质浸润深度及淋巴结是否转移中表达的差异有统计学意义。本研究也有类似的发现，笔者推测survivin参与宫颈鳞癌的发生、发展，与其预后不良密切相关，是一个具有潜在价值的肿瘤标志物，survivin蛋白的高表达预示肿瘤有较高的侵袭性。

本研究探讨了survivin与caspase-3在正常宫颈、CIN和宫颈鳞癌中表达及其相关性。survivin随肿瘤的发生发展表达增强，caspase-3随肿瘤的发生发展表达降低，并且survivin与caspase-3在宫颈鳞癌中的表达呈负相关性。这与刘秀兰等[8]的研究结果相似，提示survivin在宫颈恶性肿瘤中表达可能抑制caspase-3的表达，说明在宫颈鳞癌恶性转化过程中抗凋亡蛋白作用增强，抑制了凋亡蛋白的作用，使细胞凋亡，对肿瘤的形成和发展起一定作用。这为肿瘤靶向治疗提供了一个新的思路。那么survivin和caspase-3在CIN各级之间的表达有无差异，以及在巨块型宫颈鳞癌中表达情况，笔者将增加标本量，进一步深入研究，为将来发现宫颈癌早期诊断指标和预后监测指标提供理论依据。

宫颈鳞癌病因复杂，涉及HPV病毒、癌基因、宿主细胞抑癌基因等多个基因、多条通路的多步骤事件。近年来，癌基因治疗成为研究热点之一[9]，如李元宏等[10]一系列研究证实了survivin促进凋亡、抑制肿瘤的功能，为survivin基因用于宫颈鳞癌基因治疗提供了依据。survivin作为一种新的具有肿瘤特异性的凋亡抑制基因，其抑制细胞凋亡的功能在肿瘤发病机制中的作用及作为肿瘤诊断的标记物已经备受瞩目。survivin将可能成为肿瘤基因治疗的理想靶基因，为肿瘤的治疗提供新的途径。

[1] Verdecta M A, Huang H,Dutil E,etal.Structuce of the human anti-apoptotic protein Survivin reveals a dimeric arrangement[J]. Nat Struct Biol,2000,7(7):602-608.

[2] S inicrope F A, Ruan S B, Cleapy K R,etal.bcl-2oncorprotein expression during colorectal tumorigenesis[J]. Cancer Res, 1995,55:237.

[3] Michael F , Elka A , David O ,etal. Immunohistochemical Localization of Survivin in Benign Cervical Mucosa, Cervical Dysplasia, and InvasiveSquamous Cell Carcinoma[J].Am J Clin Pathol, 2002,11 7(5):738-744.

[4] KimM H S，Shirakik K，Park S H. Expression of survivin in invasive squamous cell carcinoma of uterine cervix[J]. Anticancer Res,2002，22(2A): 805- 808.

[5] 于 娟，王德华. Survivin与PTEN在宫颈癌中的表达及相关性研究[J].天津医科大学学报，2011,22(2)：35-36.

[6] 朱 华，施铮铮，杨孝军，等.Survivin、Bcl-2、HPV 16/18在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中的表达及临床意义[J]. 实用妇产科杂志，2010,26(1)：22-24.

[7] 卢洪胜，甘梅富，张 艳，等.宫颈癌前病变及宫颈癌组织Survivin和p16INK4A及p53表达的研究[J].中华肿瘤防治杂志，2009,16(11)：16-18.

[8] 刘秀兰，闫晓红，杨宏新，等. survivin、caspase-3在宫颈非典型鳞状细胞中表达及意义[J].内蒙古医学院学报，2010,32(1)：9-27.

[9] 霍巧玲，李 颖，李玲霞. 宫颈癌治疗研究进展[J].武警医学，2013,24(2)：171-173.

[10] 李元宏，常冰梅. RNA干扰survivin基因对宫颈癌细胞中survivin蛋白表达及caspase-3酶活性的影响[J]. 中国医药导报，2012,9(22)：22-43.

(2013-10-09收稿 2013-12-20修回)

(责任编辑 郭 青)

Expression and correlation of survivin and caspase-3 in cervical squamous cell carcinoma

ZHU Hongling1, ZHANG Hua2, and XU Weihong2.

1.Department of Obstretrics and Gynecology, Shanghai Municipal Corps Hospital of Chinese People’s Armed Police Forces, Shanghai 201103，China; 2.Section of Economic Management, The General Hospital of Chinese People’s Armed Police Forces, Beijing 100039, China

Objective To study the expression of a novel inhibitor gene of apoptosis survivin in cervical carcinoma and its association with the expression of caspase-3 protein. Methods Cervical squamous cell carcinoma specimens of 50 cases, CIN (cervical intraepithelial neoplasia) in 20 cases, and normal cervical specimens of 14 cases were collected. Immunohistochemistry was used to detect the expression of survivin protein and caspase-3 protein in the above three cervical tissues. Results 1.The positive expression rates of survivin and caspase-3 were significantly different in different cervical tissues(P<0.05). 2.The positive expression of survivin was associated with high tumor grade and clinical stage (P<0.05). The positive expression of caspase-3 was only associated with tumor grade (P<0.05).3.The expression of survivin was negatively correlated to the expression of caspase-3 protein in cervix cancer. (P<0.05). Conclusions 1. The positive expression of survivin as a predictor of cervical carcinogenesis. 2. Strong posivive expression of survivin expression combined with weak expression of caspase-3, predicts poor prognosis of cervical squamous cell carcinoma.

survivin protein ;caspase-3 protein ;cervical carcinoma; immunohistochemistry; cell apoptosis

朱红玲，硕士，主治医师，E-mail：zhuhongling517@sina.com

1.201103,武警上海总队医院12病区妇科；2.100039北京，武警总医院医疗科

徐卫鸿，E-mail: xuweihong1226@sina.com

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