西洛他唑对急性脑梗死患者血小板活化功能的作用

林志坚， 陈旭辉， 吴 军， 张海鸥

西洛他唑是一种磷酸二酯酶(phosphodiesterase，PDE)抑制剂，通过抑制血小板及血管平滑肌内PDE活性，抑制内皮细胞血小板源性生长因子的产生，从而增加血小板及血管平滑肌内环腺苷酸(cyclic Adenosine monophosphate，cAMP)浓度，发挥抗血小板聚集及血管扩张作用。血小板活化在脑动脉粥样硬化、脑血栓形成及脑缺血后炎症损伤等过程起重要的作用。本研究运用流式细胞术检测西洛他唑对急性脑梗死患者血小板活化功能的影响。

1 资料与方法

1.1 临床资料

2012年11月～2013年11月在北京大学深圳医院神经内科住院的急性脑梗死患者52例，男29例，女23例;年龄52～81岁，平均63.8±9.7岁。入组标准:(1)符合全国第四届脑血管病学术会议修订的诊断标准，并经颅脑计算机断层扫描(computer tomography，CT)和(或)核磁共振成像(magnetic resonance imaging，MRI)证实;(2)发病72 h以内;(3)患者同意参加本研究并签署知情同意书。排除标准:(1)近2 w有感染病史;(2)近1 y内患心肌梗死或行重大外科手术;(3)合并恶性肿瘤、血液病、自身免疫性疾病、肝肾功能衰竭;(4)入院前2 w内应用过抗血小板制剂或抗凝药。

1.2 给药方法

所有急性脑梗死患者均口服西洛他唑胶囊(浙江为康制药公司)每次100 mg，每日2次。

1.3 CD62P和 PAC-1的检测

受试者分别在服药前、服药后3 d、1 w、2 w采集肘静脉血5 ml，弃去混有组织液的前2 ml，剩余的3 ml加入枸橼酸钠抗凝管(美国BD公司)，轻轻混匀，即刻送检。在对照管中加入藻红蛋白标记的鼠抗人IgG(IgG-PE)，异硫氰酸荧光素标记的鼠抗人IgM(IgM-FITC)及藻红蛋白偶联物标记的鼠抗人vWF(Willebrand因子)的受体(CD42b-TC)各20 μl;在试验管中加入 3种抗体(PAC-1-FITC、CD62P-PE、CD42b-TC)各 20 μl，在对照管和试验管中各加入血标本5 μl。混匀孵育20 min，各加入1 ml冷的固定液，混匀避光放置20 min。采用流式细胞仪(Beckman-Coulter公司生产)检测，24 h内上机，以CD42b-TC和侧散射光散点图设血小板门，测定血小板膜PAC-1、CD62P表达阳性百分率。

1.4 统计学处理

2 结果

急性脑梗死患者在用药后1 w、2 w外周血CD62P、PAC-1与用药前比较均有明显的下降(P＜0.05)，用药后 3 d CD62P、PAC-1 与用药前比较，差异无统计学意义(P＞0.05)，用药后1 w CD62P、PAC-1和用药后2 w比较，差异无统计学意义(P＞0.05)(见表1)。

表1 急性脑梗死患者服用西洛他唑前后外周血CD62P、PAC-1 的变化(，%)

表1 急性脑梗死患者服用西洛他唑前后外周血CD62P、PAC-1 的变化(，%)

与用药前比较 ▲P＜0.05，△P＞0.05;与用药后3 d比较▼P＜0.05;与用药后1 w 比较▽P ＞0.05

时间 例数CD62P PAC-1用药前用药后3 d用药后1 w用药后2 w 52 52 52 52 34.83 ±7.89 31.90 ±6.33△26.24 ±9.07▲▼24.61 ±8.41▲▼▽13.57 ±4.77 11.28 ±4.26△9.45 ±6.13▲▼8.03 ±5.60▲▼▽

3 讨论

急性脑梗死发生时，从血管壁受到损害到血栓形成的过程中，血小板发生一系列极其复杂的反应。血小板活化时，P-选择素(CD62P)和PAC-1表达于血小板膜表面，成为血小板活化的2个重要的标志物［1］。我们之前的研究发现急性脑梗死组外周血CD62P、PAC-1水平明显高于对照组，而且与美国国立卫生研究院卒中量表(National Institutes of Health Stroke Scale，NIHSS)评分呈正相关［2］。

西洛他唑通过抑制血小板及血管平滑肌内PDE活性，从而增加血小板及平滑肌内cAMP浓度、发挥抗血小板作用及血管扩张作用。西洛他唑抑制ADP、肾上腺素、胶原及花生四烯酸诱导的血小板初期、二期聚集和释放反应，且呈剂量相关性［3］。本研究发现，急性脑梗死患者在口服西洛他唑后1 w、2 w外周血CD62P、PAC-1与用药前比较均有明显的下降。P-选择素(CD62P)主要存在于血小板胞浆的颗粒和内皮细胞Weibel-Palade小体内，在凝血酶、补体、氧自由基或胶原等刺激物的作用下，血小板的颗粒膜与质膜迅速融合，P-选择素即表达在血小板质膜表面［4］，成为血小板活化的一个特征性指标，主要介导活化的内皮细胞或血小板与白细胞的粘附，在炎症损伤中起重要作用。GPⅡb/Ⅲa是血小板上含量最多的膜蛋白，当血小板活化后，隐蔽状态的GPⅡb/Ⅲa全部表达到血小板膜表面，同时，GPⅡb/Ⅲa的结构和空间构象及周围微环境的改变，使纤维蛋白原受体结合部位暴露，获得受体活性，并与之结合，引起血小板聚集。GPⅡb/Ⅲa与纤维蛋白原的结合是各种血小板激动剂所引起的血小板聚集的最后通路［5］，PAC-1是 GPⅡb/Ⅲa复合物纤维蛋白原受体，血小板表面PAC-1表达的增加是血小板活化的另一个重要的标志。西洛他唑对血小板活化的抑制作用，可能通过抑制CD62P、PAC-1在血小板质膜的表达来实现。

目前，阿司匹林是公认的缺血性脑卒中二级预防的首选药物，阿司匹林通过不可逆的乙酰化环氧化酶-1(cyclooxygenase-1，COX-1)，使 AA不能合成前列腺素，TXA2合成受阻，从而抑制血小板的聚集。阿司匹林对血小板途径较单一，对急性缺血性脑卒中血小板的活化抑制较弱。有研究发现［6］，单独口服阿司匹林并不能抑制动脉粥样硬化血栓形成中的血小板活化或聚集，这是因为血小板活化可能由其他途径增强，如炎症反应、自由基形成、氧化修饰低密度脂蛋白等。西洛他唑在体内抗栓过程中可以通过较多的途径起作用，它不仅具有抗血小板聚集、保护内皮细胞、促进血管增生等药理学作用，还可预防动脉粥样硬化形成以及血管闭塞［7］。有研究表明［8］，阿司匹林联合西洛他唑可明显减少阿司匹林抵抗的发生;另有研究发现［9］，西洛他唑可减缓颅内动脉粥样硬化的进展。缺血性卒中后西洛他唑代替阿司匹林的随机、双盲、试验研究(Cilostazol versus Aspirin for Secondary Ischemic Stroke Prevention，CASISP)表明［10］，西洛他唑组缺血性和出血性卒中的发生率均较低，脑出血并发症显著低于阿司匹林组，提示西洛他唑安全性、有效性优于阿司匹林，适合用于中国缺血性脑卒中患者的二级预防。

本研究还发现，急性脑梗死患者在口服西洛他唑后3 d CD62P、PAC-1与用药前比较尚无明显下降，服药后1 w、2 w外周血CD62P、PAC-1下降显著，而用药后2 w与用药后1 w CD62P、PAC-1差异无统计学意义。提示使用西洛他唑1 w，其对血小板活性的抑制作用可达到一个稳定的水平。

综上所述，西洛他唑对血小板活化具有良好的抑制作用，用药1 w可达到较为稳定的效果，可用于非心源性缺血性脑卒中的预防与治疗。

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