黄芪白花蛇舌草汤对阿霉素肾病大鼠的治疗作用

王 琴，侯晓强，崔向军，何克剑，常彩云

(三峡大学第一临床医学院宜昌市中心人民医院，湖北宜昌443003)

中药黄芪味甘，性微温，归脾、肺经，有补气健脾，升阳举陷，益卫固表，利尿消肿，托毒生肌之功效，并且具有双向免疫调节作用［1-3］。黄芪及其制剂已被广泛应用于肾脏病的治疗中。白花蛇舌草具有较强的免疫调节和抗感染作用［4-5］，临床多用于防治肿瘤，用于治疗肾病综合征(NS)鲜见报道。目前多数认为NS的发病机制与免疫紊乱有关［6］，因此，本研究将黄芪、白花蛇舌草组方，观察其对NS大鼠的治疗作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物 清洁级雄性SD大鼠40只，体质量160～180 g，由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供，许可证号:SCXK(鄂)2004-0007。分笼饲养，控制室温在15～20℃，自由摄食、饮水。

1.2 实验药物 黄芪、白花蛇舌草药材购于宜昌市中心人民医院中药房，汤剂由三峡大学医学院中药药理实验室制备:黄芪、白花蛇舌草药材1∶1经水煎煮2次，每次2 h，水煎液合并后过滤，减压浓缩，40℃真空干燥，得黄芪白花蛇舌草提取物，临用前折合成生药给药量，用蒸馏水配成混悬液。注射用多柔比星(ADR，俗名阿霉素，浙江海正药业股份有限公司生产，国药准字:H33021980，批号:100201，每支 10 mg)，临用前用生理盐水配制。

1.3 方法

1.3.1 ADR肾病模型建立 40只健康雄性SD大鼠饲养7 d后，随机抽取10只作为正常对照组，余下30只大鼠一次性尾静脉注射阿霉素［7］6.0 mg/kg，对照组同法注射等量生理盐水。2周后测24 h尿蛋白定量＞100 mg为造模成功。

1.3.2 分组给药 造模成功后将成活的27只大鼠随机分为3组:模型组9只，黄芪白花蛇舌草汤低剂量组(以下简称中药低剂量组)9只，黄芪白花蛇舌草汤高剂量组(以下简称中药高剂量组)9只。各组均从造模成功后(即造模2周后)进入给药阶段，每天灌胃1次，连续4周，中药低剂量组给予黄芪白花蛇舌草汤3.6 g/(kg·d)，中药高剂量组给予黄芪白花蛇舌草汤7.2 g/(kg·d)，模型组与正常组每天给予相应剂量生理盐水。

1.3.3 观察指标 观察各组大鼠活动、饮食情况，毛色，体质量等。分别于造模前、造模后第7，14天、给药后第14，28天，将每只大鼠置于清洁代谢笼中，收集24 h尿液(甲苯防腐)，检测24 h尿蛋白定量(24 h Upro)。给药第28天，腹主动脉取血，用全自动生化分析仪测定血清总蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、尿素氮(BUN)等各项血液生化指标。另摘取肾脏，部分肾组织用2.5%戊二醛固定，以备切片电镜观察;其余肾组织用10%福尔马林液固定，石蜡包埋切片，苏木素-伊红(HE)染色，进行病理组织学检查。血尿生化指标由宜昌市中心人民医院检验科测定，病理切片由三峡大学医学院病理教研室制备。

1.3.4 统计学方法 采用SPSS 13.0软件进行数据分析。各组实验数据以均数±标准差(±s)表示，组间均数比较采用t检验。

2 结果

2.1 黄芪白花蛇舌草汤对ADR大鼠一般状态的影响 整个实验过程中，正常对照组大鼠活动自如，饮食、饮水正常，毛色有光泽，体质量逐渐增加;从造模第3天起，各造模组大鼠进食、饮水量明显减少，开始出现不同程度腹泻，毛发凌乱、失去光泽，体质量下降;至造模第2周末，造模组大鼠体质量下降明显，进食饮水量减少，其中3只大鼠后足爪明显水肿;3只大鼠因严重腹泻、腹水、阿霉素心脏毒性而死亡。用药后除模型组外，其余各组大鼠较前进食饮水量增加，活动较为灵活，皮毛稍有凌乱。

2.2 黄芪白花蛇舌草汤对ADR大鼠24 h尿蛋白定量的影响 造模后第7天，除正常组外，各组大鼠24 h尿蛋白定量开始升高，至第14天出现大量尿蛋白，24 h尿蛋白定量＞100 mg表明造模成功。与模型组比较，治疗组在药物干预2周后，24 h尿蛋白定量下降(P＜0.05)，治疗4周后，24 h尿蛋白定量显著下降(P＜0.05)，见表1。

2.3 黄芪白花蛇舌草汤对ADR大鼠血液生化指标的影响 与正常组比较，模型组TP、ALB水平显著下降，TC与TG水平升高，提示造模后，ADR大鼠体内蛋白流失严重，脂质代谢紊乱。与模型组相比，治疗组的血清TP、ALB显著升高，TC与TG水平显著降低，尿素氮、肌酐水平无统计学意义。表明黄芪白花蛇舌草汤有助于ADR大鼠各项生理指标的恢复，治疗效果明显。中药低剂量组与高剂量组无明显差异，表明治疗效果无剂量依赖性，见表2。

2.4 黄芪白花蛇舌草汤对ADR大鼠肾组织的影响各组大鼠肾脏肉眼观察均无明显异常。光镜下:正常对照组肾小球结构正常(图1);模型组肾小球系膜细胞、系膜基质弥漫性增生(图2);中药低剂量组与中药高剂量组肾小球结构均无明显异常(图3，图4)。电镜下:正常对照组肾小球基底膜结构清晰，未见增厚，系膜未见增生，足突清晰完整，未见融合(图5);模型组肾小球基底膜结构清晰，未见增厚，系膜未见增生，但足突广泛融合(图6);中药低剂量组与中药高剂量组肾小球基底膜结构尚清晰，无明显增厚，系膜未见增生，足突部分融合(图7，图8)。

表1 ADR对大鼠24 h尿蛋白定量的影响(±s)mg/24 h

表1 ADR对大鼠24 h尿蛋白定量的影响(±s)mg/24 h

注:与正常组比较，#P ＜0.05;与模型组比较，△P ＜0.05

组 别 n 造模前 造模后第7天 造模后第14天 给药后第14天 给药后第28天正常组 10 3.47 ±0.77 3.28 ±1.03 3.35 ±0.87 3.23 ±0.92 3.51 ±0.97模型组 9 4.12 ±1.38 63.56 ±6.04# 117.03 ±8.62# 135.85 ±6.27 161.11 ±6.77中药低剂量组 9 3.83 ±2.17 63.06 ±5.21# 122.08 ±8.33# 82.67 ±1.90 57.58 ±6.72△中药高剂量组 9 3.99 ±1.15 62.76 ±4.84# 116.74 ±9.65# 92.17 ±2.48△ 62.74 ±4.09△

表2 给药4周后对各组实验大鼠血液生化指标的影响(±s)

表2 给药4周后对各组实验大鼠血液生化指标的影响(±s)

注:与正常组比较，#P＜0.05;与模型组比较，△P＜0.05

组 别 n TP/(g/L)ALB/(g/L)TC/(mmol/L)TG/(mmol/L)Scr/(mmol/L)BUN/(mmol/L)正常组 10 69.14 ±4.23 25.97 ±4.37 0.92 ±0.29 1.03 ±0.11 47.76 ±9.92 7.56 ±0.73模型组 9 55.60 ±5.27# 15.92 ±5.27# 1.57 ±0.42# 1.64 ±0.22# 44.56 ±7.65 7.09 ±2.22中药低剂量组 9 64.55±8.24△ 18.17±2.70△ 1.19 ±0.20△ 1.35 ±0.37△ 47.57±5.85 7.14±1.04中药高剂量组 9 58.74±6.74△ 17.67±6.71△ 1.30 ±1.01△ 1.24 ±0.85△ 46.13±6.71 6.94±1.89

图1 正常组光镜(HE，×400)

图2 模型组光镜(HE，×400)

图3 中药低剂量组光镜(HE，×400)

图4 中药高剂量组光镜(HE，×400))

图5 正常组电镜(×40 000)

图6 模型组电镜(×40 000)

图7 中药低剂量组电镜(×40 000)

图8 中药高剂量组电镜(×40 000)

3 讨论

一次性尾静脉注射阿霉素造成肾病综合征动物模型［7］，现已成为研究肾病综合征公认模型之一，亦被广泛应用于中药及其成分对肾脏保护作用的药物筛选。本研究采用此方法造模后，模型动物的尿蛋白排出显著上升，生化指标及病理变化明显，表明本次实验成功建立了大鼠ADR肾病模型。阿霉素诱导肾病综合征的机制，一般认为是由活性氧族介导的细胞损伤;同时活性氧还能趋化中性粒细胞，刺激肾小球合成前列腺素及血栓素，最终破坏肾小球滤过膜的结构和功能，使上皮细胞足突融合导致足突裂隙及其隔膜消失，引起孔径屏障及电荷屏障损伤，而引起蛋白尿;另外，细胞免疫可能也参与了发病，因为活性氧可以间接趋化中性粒细胞，黏附及吞噬免疫反应物，引起细胞活化，释放一系列炎性介质，引起肾脏损伤［8］。该模型类似于人类微小病变型肾病，因此，对此模型进行药物干预，可以有效进行药物对肾病综合征的疗效评价。

黄芪具有补气升阳、消肿生肌等功效，是补气的要药。黄芪含有黄芪多糖、黄芪皂苷类、多种微量元素如硒、铁、锌等、黄酮及黄酮类似物等成分，具有多种生物学活性，不但有清除自由基、促进蛋白质合成、诱生干扰素等作用，还可以提高机体免疫力，增强机体抗病能力［9］。通过上调肝脏白蛋白mRNA转录，在基因转录水平促进肝脏白蛋白合成，从而提高血浆白蛋白水平。本实验显示黄芪白花蛇舌草汤治疗后，阿霉素肾病大鼠血清白蛋白含量升高，说明此药具有促进肝脏合成白蛋白的作用，与文献［10］结论一致。黄芪中富含多种微量元素，尤其是元素硒可以保护基底膜的电荷屏障和机械屏障［11］，修复受损肾小球滤过膜，从而减轻通透性尿蛋白，降低肾病大鼠尿蛋白。肾病大鼠血脂明显降低，可能与尿蛋白减少，血浆白蛋白升高使肝脏合成脂蛋白减少有关。

白花蛇舌草有清热除湿、活血止痛等功效，其含有的总黄酮具有增强机体特异性免疫功能和非特异性免疫功能的作用，亦可以刺激网状内皮系统增生，增强吞噬细胞活力而达到抗菌消炎作用［4］;白花蛇舌草还具有抗氧化活性［5］，黄芪能清除自由基，二者组方治疗阿霉素肾病大鼠，可减轻活性氧介导的细胞损伤，修复肾小球滤过膜，改善病理组织学变化，从而减轻肾脏损害。

肾病综合征属于中医学的“水肿”“精气下泄”等范畴，其发生与水液代谢及肺、脾、肾三脏功能失调有关。NS病机复杂，虚实相间，清浊不分，中医证型为气阴两虚证，湿热、热毒等实邪亦常夹杂其间。将黄芪与白花蛇舌草组方，一补一泻，一升一降，切合NS病机，能达到补气升阳、清热利湿、利尿消肿之功效。黄芪白花蛇舌草汤能显著降低ADR肾病大鼠尿蛋白，提高血清蛋白含量，降低异常血脂、胆固醇水平，减轻对肾脏的损害，对肾病大鼠病理组织学变化有明显改善作用，从而表现出对ADR肾病具有良好的治疗作用。为其临床治疗肾病综合征提供了理论依据，其作用机制有待于进一步研究。

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