一起保育猪沙门氏菌感染的诊断与药敏检测分析

黄婕峰，李 淼，马 攀，李润成

（湖南农业大学动物医学院，湖南长沙410128）

猪沙门氏菌病，又称猪副伤寒，是由沙门氏菌属包括猪霍乱沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌变型、肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、猪伤寒沙门氏菌、猪伤寒沙门氏菌变型、德尔俾沙门氏菌等引起的一种传染病[1]。主要表现为急性败血症和坏死性肠炎，慢性病例则多为肺炎及大肠坏死性炎症。病猪常因生长受阻和增重缓慢而给养猪业带来极大的经济损失。2014年8月衡阳某40头母猪的小型猪场，50~60日龄保育猪全部腹泻，部分有呕吐现象，体温无明显变化，补种了猪瘟、伪狂犬病毒疫苗同时也使用了一些抗生素药物，均无明显好转，15天内，死亡13头。本文对2头发病典型的小猪进行了实验室诊断，分离到了大量沙门氏菌并进行了药物敏感性检测。现报告如下：

1 材料与方法

1.1病料。衡阳某猪场2头发病典型的小猪。

1.2主要试剂及细菌培养基。巧克力琼脂培养基购自郑州贝瑞特公司，PCR试剂购自北京天恩泽基因科技有限公司，沙门氏菌显色培养基购自郑州贝瑞特生物技术有限公司。

1.3发病小猪的解剖。将发病小猪处死并进行解剖、观察各脏器及肠道的情况。

1.4细菌分离培养及鉴定。

1.4.1 按无菌操作要求用接种环钩取肝脏、肠系膜淋巴结分别划线接种巧克力琼脂培养基，然后将巧克力琼脂放于37℃培养，48h后观察结果并取培养物涂片革兰染色镜检。

1.4.2 选取接种病猪肝脏的巧克力营养琼脂，从中随机挑取20个单菌落划线接种沙门氏菌显色培养基放于37℃培养，24h后观察结果。

1.5分离菌的P CR鉴定

以沙门氏菌显色培养基上长出紫色菌落为模板，用细菌16SRNA通用引物[2]进行PCR扩增，并将阳性PCR产物送上海华大基因公司进行测序分析。

1.6分离细菌的药物敏感性试验

从沙门氏菌显色培养基上挑取紫色菌落接种血清肉汤培养基37℃震荡培养24h，然后用纸片扩散法进行药物敏感性检测，具体操作按常规进行。

2 结果

2.1病猪解剖结果

将发病小猪处死、解剖、观察各脏器及肠道的情况，主要病理变化为，小猪回肠、结肠充满糠麸样物质（见图 1）。

图1 发病猪肠道糠麸样物质

2.2细菌分离培养结果

用病猪肝脏、肠系膜淋巴结接种巧克力琼脂培养基，培养48h后观察细菌生长形态结果从肝脏、肠系膜淋巴结均分离出了大量细菌，且肝脏、淋巴结分离菌形态特征一致，挑取菌落涂片革兰氏染色镜检，结果见分离菌为革兰氏阴性杆菌。

2.3培养物的鉴定结果

2.3.1 选取接种病猪肝脏的巧克力营养琼脂，从中随机挑取20个单菌落划线接种沙门氏菌显色培养基放于37℃培养，随机挑取的细菌在沙门氏菌显色培养基上均呈现沙门氏菌特有的紫色。

图2 细菌16SRNA基因PCR扩增结果

2.3.2 以纯培养的细菌为模板，用细菌16SRNA通用因为进行PCR扩增（结果见图2），并将扩增产物送长沙铂尚生物技术有限公司测序分析，结果发现分离菌为沙门氏菌。测出序列如下：

2.4细菌药物敏感性检测结果

取分离的细菌进行敏感性检测，检测方法为纸片法（K-B法），具体检测结果见表1。由表1可见分离的沙门氏菌对头孢曲松、恩诺沙星、氧氟沙星、氟苯尼考比较敏感，但对复方新诺明、氨苄西林、庆大霉素、丁胺卡那霉素等耐药。

表1 分离菌药物敏感性检测结果

3 讨论与分析

猪沙门氏菌病以1~4月龄仔猪多发，6月龄以上仔猪则较少发病。猪霍乱沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、猪伤寒沙门氏菌、德尔卑沙门氏菌、肠炎沙门氏菌等血清型是引起该病的主要病原[1]。本文从发病猪肝脏以及肠系膜淋巴结分离到大量形态一致的细菌，并通过沙门氏菌显色培养基以及PCR测序鉴定，证明发病猪存在大量的沙门氏菌感染。但由于细菌16SRNA基因保守性很强，所以未能区分是何种沙门氏菌，这将在下一步工作中进行研究。

沙门氏菌在自然界中十分普遍，近年来，随着中国养猪业的快速发展，沙门氏菌对养猪业的影响越来越严重。而且沙门氏菌本身就极易产生抗药性，加上生产中抗生素的滥用，导致了病菌耐药性不断增强，耐药谱扩大，加大了对此病原的预防与治疗的难度[3]。本文分离的沙门氏菌药物敏感性检测表明其对头孢曲松、氟苯尼考和喹诺酮类的恩诺沙星、氧氟沙星比较敏感，对氨苄西林、多西环素、复方新诺明、以及氨基糖苷类药物耐药。程春荣[4]、黄福标[5]、邹立扣[6]对大量沙门氏菌的耐药性进行调查同样表明分离的沙门氏菌对第三代头孢类药物、以及氟苯尼考、恩诺沙星、氧氟沙星比较敏感，而对氨基糖苷类和四环素类药物耐药。可见，当前临床上针对小猪沙门氏菌感染应首选第三代头孢类药物、恩诺沙星、氧氟沙星或氟苯尼考来进行防控，并组合成轮换用药方案，防止细菌耐药性过快产生。

[1]黄福标，卢冰霞，刘磊，等.屠宰猪肠道沙门氏菌的分离鉴定、耐药性分析及致病性试验[J].2012,39（1）：172-175.

[2]Run-Cheng Li,Chao-Ting Xiao,Xing Qian,et al.Occurrence of Streptococcus dysgalactiae subsp.Equisimilis in Masked Palm Civet(Paguma larvata)[J].Journal of Animal and Veterinary Advances,2012,11(12)：2020-2023.

[3]刘芹防，崔尚金.猪沙门氏菌病病原学、流行病学、诊断及防治进展[J].猪业科学,2009,（12）：24-27.

[4]程春荣，安戈，罗琦，等.145株沙门氏菌耐药性分析[J].河南预防医学杂志，2012，23(4)：256-261.

[5]黄福标，卢冰霞，刘磊，等.屠宰猪肠道沙门氏菌的分离鉴定、耐药性分析及致病性试验 [J].中国畜牧兽医，2012，39（1）：172-176.

[6]邹立扣，蒲妍君，杨莉，等.四川省猪肉源大肠杆菌和沙门氏菌的分离与耐药性分析 [J].食品科学，2012,33（13）：203-206.