PowerPlex®21复合扩增系统漏检微量男性成分1例

金国文傅煜 冯杏玲 杨幸怡

PowerPlex®21复合扩增系统漏检微量男性成分1例

金国文1傅煜1冯杏玲2杨幸怡2

（1.广东省佛山市公安局南海分局，广东佛山528200；2.南方医科大学法医系，广东广州510515）

本案使用PowerPlex®Fusion6C复合扩增系统对案件中嫌疑人接触手提包可疑部位擦拭物DNA同步检测常染色体及Y染色体STR。由于PowerPlex®Fusion6C复合扩增系统新增的DYS391、DYS570和DYS576等3个Y-STR基因座能够灵敏地指示男性成分的存在，虽然该系统Y-STR基因座数量有限，但Y-STR基因座扩增不受女性成分影响，对男性成分比例很少或含量很低的混合检材可有效分型，从而为此类疑难案件的定性及侦破提供明确的指导方向。日常工作中对于一些特殊案件中提取的可能为男女混合且男性成分极微量的检材样本，采用同步检测常染色体及Y染色体STR复合扩增系统有独到的实用价值。

法医物证学混合检材微量检材STR分型

1 案例

2015年×月×日，李某（女）在公路上行走时被一骑摩托男子抢劫，后在距现场约2公里工地旁边的草丛中发现其手提包，其内财物被抢。用磁珠法提取嫌疑人接触手提包可疑部位擦拭物DNA，用PowerPlex®21复合扩增系统（以下简称PP21，美国Promega公司）扩增检测，仅检出女事主李某成分，后使用Power⁃Plex®Fusion6C复合扩增系统（以下简称PP6C，美国Promega公司）检测，2个Y-STR基因座检出结果，提示该检材含男性成分。经用Y-STR排查法排查出在附近工地打工的嫌疑人马某，为该案侦破提供了关键线索和证据。

2 DNA检验

对嫌疑人接触手提包的可疑部位用尖头棉签擦拭、套管悬空保存法［1］保存，用磁珠法提取嫌疑人接触手提包可疑部位擦拭物DNA［2］。先后采用PP21扩增系统，PP6C扩增系统，PowerPlex®Y23复合扩增系统（以下简称PPY23，美国Promega公司）扩增DNA模板，在ABI9700型PCR扩增仪（美国应用生物系统公司）上进行PCR扩增。3个系统均用25μL体系进行扩增：PCRreactionMix5μL，primer5μL和DNA模板10μL，超纯水5μL。热循环参数：96℃1min，96℃5s，60℃1min，29个循环，终延伸60℃10min。取1μLPCR产物与0.5μLCC5 ILS500和9.5μL去离子甲酰胺混合，采用ABI 3130xl基因分析仪（美国应用生物系统公司）进行毛细管电泳检测，电泳结果数据使用GeneMapper@ID-X软件进行基因型分析。

3 结果

嫌疑人接触手提包可疑部位提取的DNA样本用PP21检测结果（如图1所示），显示Amel基因座分型为X；用PP6C系统检测，检出DYS576和DYS570基因座分型（如图2所示），检见的常染色体STR基因座分型与事主李某（女）口腔拭子提取的DNA样本相应的常染色体STR基因座分型相同（如图3所示）。提示嫌疑人接触手提包可疑部位提取的DNA样本为男女混合样本。用PPY23系统对棉签DNA样本进行检测（如图4所示），结果显示除DYS19、DYS390和DYS392基因座未检出分型外，其余Y-STR基因座均得到明确分型，且该分型与嫌疑人马某的口腔拭子提取的DNA样本检见的Y-STR分型一致（如图5所示）。

图1 嫌疑人接触手提包可疑部位提取的DNA样本用PP21复合扩增体系检见的STR分型

图2 嫌疑人接触手提包可疑部位提取的DNA样本用PP6C复合扩增体系检见的STR分型

图5 嫌疑人马某口腔拭子提取的DNA样本用PPY23复合扩增体系检见的STR分型

4 讨论

目前，法医遗传学检验所用的扩增系统多为四色荧光标记系统，可同步扩增常染色体STR基因座多在13～15个之间，且均用Amelo⁃genin基因判断性别［3］。Amel-Y染色体的片段缺失、引物结合区的突变均将导致性别判断错误［4］。研发同步检测常染色体、Y染色体STR基因座检测系统十分必要［5］。美国Promega公司新近研发的PP6C系统，包括了CODIS和ESS推荐的全部基因座和PentaD、PentaE、SE33、D2S1338和D19S433等共23个常染色体STR基因座，3个Y-STR基因座（DYS391、DYS570、DYS576）以及1个Amel性别基因座，具有很高的兼容性。本案中的男女混合检材，由于女性成分比例太大、男性DNA含量太少，采用PP21扩增系统扩增检测，Amel-Y没有检出，常染色体STR基因座分型结果与女事主相同，这种情况下极易将混合检材误判为单一检材。使用PP6C系统检测，DYS576和DYS570基因座成功得到分型，提示该样本为男女混合样本，可见PP6C系统新增的DYS391、DYS570和DYS576等3个Y-STR基因座，能够灵敏地指示男性成分的存在，虽然该系统Y-STR基因座数量有限，但Y-STR基因座扩增不受女性成分影响，对男性成分比例很少或含量很低的混合检材可有效分型，从而为此类疑难案件的定性及侦破提供明确的指导方向。提示日常工作中对于一些特殊案件中提取的可能为男女混合且男性成分极微量的检材样本，采用同步检测常染色体及Y染色体STR复合扩增系统有独到的实用价值。

［1］杨电，刘超，李越，等.生物检材采集与保存套管的应用［J］.中国法医学杂志，2014，29（4）：352-354.

［2］邓淑娇，李萍，黄桂清，等.检材采集与保存方式对提取效率的影响［J］.刑事技术，2015，40（3）：242-243.

［3］刘超，童大跃.新编法医物证学检验技术［M］.北京：中国医药科技出版社，2013：249-255.

［4］陈爱萍，陈勇，王会品，等.中国人群基因的突变频率［J］.中华医学遗传学杂志，2007，24（6）：615-619.

［5］ShuanglinLiCLHL.Developmentalvalidationofthe EX20+4system［J］.ForensicScienceInternational:Ge⁃netics,2014，11（7）：207-213.