雷公藤多苷对糖尿病肾病大鼠肾损伤的保护作用及可能机制

张丽敏　李鸿燕　高　燕　李　敬　陈　骅

(河北大学附属医院肾内科，河北　保定　071000)



雷公藤多苷对糖尿病肾病大鼠肾损伤的保护作用及可能机制

张丽敏李鸿燕1高燕李敬陈骅

(河北大学附属医院肾内科，河北保定071000)

目的探讨雷公藤多苷对糖尿病(DM)肾病(DN)大鼠肾损伤的保护作用及其可能机制。方法将50只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组(10只)和DM模型组(40只)，采用链脲佐菌素诱导的方法建立大鼠DM模型，将DM模型成功的大鼠按随机数字分为模型组、西药组、雷公藤多苷低、高剂量组，每组10只。西药组给予50 mg/kg厄贝沙坦灌胃，雷公藤多苷低剂量组、高剂量组均给予雷公藤多苷8 mg/kg、16 mg/kg灌胃。对照组和模型组均给予生理盐水灌胃，各组均连续灌胃8 w。观察大鼠血糖(BG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、血尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、尿蛋白(Pro)水平及肾脏指数(RI)、肾小球面积(MGA)、肾小球体积(MGV)。结果模型组的BG和HbA1c水平均显著高于对照组(P<0.01)；西药组和雷公藤多苷低、高剂量组BG和HbA1c水平与模型组对比均无明显差异(P>0.05)。与对照组对比，模型组的SCr、BUN 和 Pro水平均显著升高(P<0.01)；与模型组对比，西药组和雷公藤多苷低、高剂量组均明显降低(P<0.01)。与对照组对比，模型组的RI、MGA、MGV均显著性升高(P<0.01)；与模型组对比，西药组和雷公藤多苷低、高剂量组均明显降低(P<0.01)。对照组大鼠肾组织形态正常；模型组异常，肾小球管壁薄肿胀，呈现无规则，管腔大小不均匀，血管萎缩，肾小管上皮细胞空泡变性。西药组和雷公藤多苷低、高剂量组的以上病理变化明显改善，尤其雷公藤多苷高剂量组改善程度更大。结论雷公藤多苷能改善DN大鼠SCr、BUN、Pro水平，对DN大鼠肾损伤有一定的保护作用。

糖尿病肾病；雷公藤多苷；肾功能

糖尿病(DM)肾病(DN)属于DM患者最常见的微血管并发症，病因和发病机制尚不完全清楚〔1〕。DN的临床病理主要体现在肾脏的损伤，细胞外基质(ECM)、微量蛋白尿的合成与降解失衡上〔2〕。雷公藤多苷具有抗感染、抑制免疫等作用，临床用于类风湿关节炎、肾病综合征等疾病治疗〔3〕。有研究报道〔4〕，雷公藤多苷具有明显降低DN患者蛋白尿，提高患者免疫功能，缓解DN患者症状的功效。本文旨在探讨雷公藤多苷对DN大鼠肾损伤的保护作用及其可能作用机制。

1　资料与方法

1.1动物、药物、主要试剂与仪器50只健康雄性SD大鼠，体重(200±20)g，级别 SPF，购于蚌埠医学院实验动物中心，许可证号SYXK(皖2012-002)。雷公藤多苷(片剂，规格：10 mg×50 s，国药准字Z31020415，上海复旦复华药业有限公司)；厄贝沙坦(片剂，规格：0.15 g×7 s，国药准字H20053912，修正药业集团股份有限公司)。实验药物均以生理盐水配制溶液。链脲佐菌素(STZ，由美国Sigma 公司提供，批号：040M1367)；美国Humalyzer 2000型自动生化分析仪；稳择易TM血糖仪及血糖试纸(强生中国医疗器材有限公司)。

1.2方法

1.2.1DM模型的建立〔5〕实验前，对大鼠进行适应性喂养1 w，按随机数字分为对照组(10只)和DM模型组(40只)。禁食12 h，DM模型组单次腹腔内注射55 mg/kg STZ(溶于0.1 mol/L柠檬酸缓冲液)，72 h后，取大鼠尾静脉血液，通过血糖仪测定血糖水平，并用尿糖试纸测大鼠随意尿糖，血糖浓度≥16.7 mmol/L，且尿糖定性结果显示，则表明DM模型成功。对照组给药腹腔注射等体积的柠檬酸缓冲液。

1.2.2分组及给药处理将造模成功的大鼠按随机数字分为模型组、雷公藤多苷低剂量组(每天8 mg/kg)、雷公藤多苷高剂量组(每天16 mg/kg)、西药组(厄贝沙坦，每天50 mg/kg)各10只，药物均按灌胃方式，对照组和模型组均灌胃同等体积的生理盐水。在实验观察过程中，给予大鼠自由饮水、进食，但不给予降糖药物。

1.2.3观察指标连续灌胃8 w后，收集代谢笼24 h 尿液，并对大鼠眶下静脉取血，采用全自动生化分析仪测定血生化水平：血糖(BG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、血尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、尿蛋白(Pro)。待采血后，处死大鼠，取两肾，称重。采用病理组织学，右侧肾脏组织行苏木素-伊红(HE)染色，高倍镜(×400)观察，每个标本随机选择6个肾小球，显微摄影系统摄取图像，采用Image J 图像分析软件测量肾小球面积，6个肾小球面积平均值为此标本平均肾小球面积(MGA)，平均肾小球体积(MGV)=1.25×MGA×3/2〔6〕。并将肾重(mg)与体重(g)比值作为肾脏指数(RI)。

1.3统计学方法采用SPSS19.0软件进行单因素方差分析、LSD检验、χ2检验。

2　结　果

2.1各组BG、HbA1c水平比较与对照组对比，DM模型组BG和HbA1c水平均显著升高(P<0.01)；与模型组、西药组对比，西药组和雷公藤多苷低、高剂量组均无明显差异(P>0.05)，见表1。

2.2各组SCr、BUN及Pro水平比较与对照组对比，DM模型组SCr、BUN和Pro水平均显著升高(P<0.01)；与模型组对比，西药组和雷公藤多苷低、高剂量组均明显降低(P<0.01)；与西药组对比，雷公藤多苷低、高剂量组均明显降低(P<0.01或P<0.05)。见表2。

2.3各组RI、MGA、MGV比较与对照组对比，DM模型组RI、MGA、MGV均显著升高(P<0.01)；与模型组对比，西药组和雷公藤多苷低、高剂量组均明显降低(P<0.01)；与西药组对比，雷公藤多苷高剂量组均明显降低(P<0.01或P<0.05)。见表3。

2.4各组大鼠肾组织病理形态学情况见图1。对照组大鼠肾组织形态正常，肾小球管壁薄厚均一，管腔大小正常，无明显的病理变化；模型组大鼠肾组织形态异常，肾小球管壁薄肿胀，呈现无规则，管腔大小不均匀，血管萎缩，肾小管上皮细胞空泡变性。西药组和雷公藤多苷低、高剂量组的以上病理变化明显改善，尤其雷公藤多苷高剂量组改善程度更大。

表1　各组大鼠BG和HbA1c水平比较

与对照组比较：1)P<0.01

表2　各组大鼠SCr、BUN及Pro水平比较

与对照组对比：1)P<0.01；与模型组对比：2)P<0.01；与西药组对比：3)P<0.05，4)P<0.01；下表同

表3　各组大鼠RI、MGA、MGV比较

图1　各组大鼠肾组织病理形态学(HE，×400)

3　讨　论

早期DN病理变化主要为肾小球肥大、基底膜增厚，ECM蛋白积聚致系膜区扩张，导致弥漫性或结节性肾小球硬化及肾小管间质纤维化，一旦出现持续大量蛋白尿，病情往往不可逆转，直至终末期肾衰竭〔7〕。因此，DN的诊断和治疗宜早不宜晚，应该在肾脏病变处在代偿期时予以干预，延缓其进展到失代偿期。雷公藤多苷是雷公藤的有效活性成分，对于免疫相关性肾炎、原发性肾小球肾炎的治疗有一定的作用〔8，9〕。有研究报道〔10〕，雷公藤多苷能通过降低尿蛋白的排泄，保护肾小管，抑制肾间质纤维化，改善肾功能。本实验结果提示雷公藤多苷对DM大鼠血糖的调节作用有限，并不会随着剂量的增加，BG和HbA1c水平发生明显变化。另外提示DN大鼠的肾功能得到改善，雷公藤多苷对DM大鼠的肾脏具有一定的保护作用，这可能与雷公藤多苷的作用相关，雷公藤多苷能改善肾小球微血管功能，降低肾小球高滤过率，减少蛋白尿的排泄，从而保护肾功能，改善肾损伤。同时，雷公藤多苷对DM大鼠的RI、MGA、MGV均有降低的作用，可改善肾功能，可抑制肾小球肾炎系膜纤维增生，能收缩肾血管可促进微循环。从肾组织病理形态分析，通过雷公藤多苷干预治疗后，大鼠肾组织形态改善，且改善程度随着雷公藤多苷的剂量越来越明显。

1陈卫东，张继强，张燕，等.雷公藤多苷对糖尿病肾病大鼠肾基质金属蛋白酶-9和基质金属蛋白酶抑制剂-1表达的影响〔J〕.中国临床药理学杂志，2015；31(12)：1157-61.

2张燕，常保超，陈卫东，等.雷公藤多苷对糖尿病肾病大鼠肾组织转化生长因子β1、骨形成蛋白7及Gremlin表达的影响〔J〕.肾脏病与透析肾移植杂志，2012；21(3)：237-43.

3池婕，林兵，刘志宏，等.雷公藤制剂指纹图谱及谱效关系研究〔J〕.中国中药杂志，2015；40(8)：1479-83.

4Li CL，He J，Li ZG，etal.Effects of multi-glycosides of tripterygium wilfordiion in the treatment of Sjögren′s syndrome in the non-obese diabetic mouse model〔J〕.Chin J Dent Res，2015；18(2)：95-101.

5柯箫韵，柯俊树.缬沙坦联合雷公藤多苷对2型糖尿病肾病微量蛋白尿的影响〔J〕.时珍国医国药，2012；23(8)：2060-1.

6Ota T，Takamura T，Ando H，etal.Preventive effect of cerivastatin on diabetic nephropathy through suppression of glomerular macrophage recruitment in a rat model〔J〕.Diabetologia，2003；46(6)：843-51.

7李敏州，高彦彬，马鸣飞，等.糖尿病肾病发病机制研究进展〔J〕.中国实验方剂学杂志，2012；18(22)：344-9.

8Wang J，Miao M，Zhang Y，etal.Quercetin ameliorates liver injury induced with Tripterygium glycosides by reducing oxidative stress and inflammation〔J〕.Can J Physiol Pharmacol，2015；93(6)：427-33.

9张丽春.雷公藤多苷对慢性肾炎的作用机制研究〔J〕.南京中医药大学学报，2012；28(6)：594-6.

10彭健韫，兰乐健，张小如，等.小剂量他克莫司联合雷公藤多苷治疗特发性膜性肾病的临床研究〔J〕.中国临床药理学杂志，2015；31(11)：905-8.

〔2016-02-17修回〕

(编辑袁左鸣/滕欣航)

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.14.017

李鸿燕(1978-)，女，硕士，主治医师，主要从事糖尿病肾病研究。

张丽敏(1978-)，女，硕士，主治医师，主要从事糖尿病肾病研究。

R692

A

1005-9202(2016)14-3389-03；

1河北大学附属医院内分泌科