HPLC法测定复方抗溃混悬液中盐酸小檗碱的含量

崔　田，邓祖磊

(蚌埠市食品药品检验中心，安徽　蚌埠　233000)



HPLC法测定复方抗溃混悬液中盐酸小檗碱的含量

崔田，邓祖磊

(蚌埠市食品药品检验中心，安徽蚌埠233000)

目的：建立测定复方抗溃混悬液中盐酸小檗碱含量的方法；方法：用高效液相色谱法测定含量，采用ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液 (50 ∶50)(每100 mL加十二烷基磺酸钠0.1 g)，检测波长345 nm，流速1.0 mL/min。结果：盐酸小檗碱的线性范围为6.175～61.75 μg/mL(r=0.9998)，平均回收率为99.3%，RSD为0.69 %(n=6)，复方抗溃混悬液中小檗碱含量为1.02～1.05 mg/g。结论：试验表明该方法可用于复方抗溃混悬液的质量控制,该方法专属性强、操作简便。

复方抗溃混悬液；盐酸小檗碱；高效液相色谱法

复方抗溃混悬液为蚌埠市第一人民医院皮肤科研制的院内制剂，由黄芪、黄连、黄柏、白芷、地榆、水杨酸、冰片、黄芩、樟脑、氧化锌、苯酚药味组成，具有抗炎镇痛、排毒生肌、促进溃疡面愈合等作用[1-2]。方中主药为黄连、黄柏，其中盐酸小檗碱是其主要活性成分[2]。当前，盐酸小檗碱测定方法有高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)[3-4]、高效液相荧光色谱法[5]、荧光分光光度法[6]、直接电位法[7]等多种方法。高效液相色谱法具有分离效能高，灵敏度高，应用范围广，分析速度快、载液流速快，色谱柱可反复使用，样品不被破坏、易回收等优点，已成为当前药物分析的重要方法之一[8]。采用HPLC法测定复方抗溃混悬液中盐酸小檗碱含量尚未见报道，本文建立HPLC法测定复方抗溃混悬液盐酸小檗碱含量，为其质量控制和确保临床疗效提供检测手段。

1　材料与方法

1.1仪器与设备

Agilent 1260高效液相色谱仪(美国，Agilent公司)，二级管阵列检测器，Agilent Chemstation工作站；ZORBAX Eclipse XDB-C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱(美国，Agilent公司)；Sartorius CP225D电子天平(德国Sartorius公司，十万分之一天平)；Sartorius BS210S电子天平(德国Sartorius公司，万分之一天平)；KQ-500DE超声波仪(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2材料与试药

盐酸小檗碱(购自中国食品药品检定研究院，批号110713-200609)；甲醇(美国天地试剂有限公司，色谱纯)；十二烷基磺酸钠、磷酸(国药集团化学试剂有限公司，分析纯)；实验用重蒸水(实验室自制)；其他试剂均为分析纯；复方抗溃混悬液(蚌埠市第一人民医院提供，批号分别为140302、140303、140304)。

1.3方法

1.3.1色谱条件色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18(150 mm×4.6 mm， 5 μm)，流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液(50 ∶50)(每100mL加十二烷基磺酸钠0.1 g)，检测波长为345 nm，流速为l mL/min，柱温为30 ℃，进样体积为5 μL。

1.3.2检测样品溶液的制备供试品溶液的制备：取本品约2.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100 mL，密塞，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

1.3.3对照品溶液的配制精密称取盐酸小檗碱12.35 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。精密量取2 mL至20 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.0247 mg/mL对照品溶液。

1.3.4阴性对照溶液的制备按处方比例，取除黄连、黄柏以外的药材，按制备工艺要求制备阴性样品，再按供试品溶液制备方法制备成阴性对照溶液。

1.3.5方法学考察与样品测定按1.3.2项下方法制备供试品溶液，采用1.3.1项下的色谱条件，分别对线性关系、精密度试验、重复性试验、稳定性试验、专属性试验、加样回收试验进行考察，然后分别取3批复方抗溃混悬液样品，测定峰面积，按外标法计算含量。

2　结果与分析

2.1线性关系的考察

分别精密吸取对照品储备液0.5、1、2、3、5 mL，分别置20 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。分别进样5 μL，按上述色谱条件进行测定，记录色谱峰面积，以浓度(X)对峰面积(Y)进行线性回归，得回归方程为Y=19.9785X-7.2891，r=0.9998，结果表明盐酸小檗碱在6.175～61.75μg/mL范围内线性关系良好。

2.2专属性试验

取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液按上述色谱条件测定，结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间的色谱峰，而阴性对照色谱图中，在此保留时间无干扰峰，见图1。

a

b

c

2.3精密度试验

取对照品溶液连续进样5次，每次5 μL，记录盐酸小檗碱峰面积，RSD为0.40 %，表明精密度良好。

2.4重复性试验

精密称取同一批号供试品(140302)6份，按供试品溶液的制备方法制备并测定峰面积，代入线性方程计算，平均含量为1.03 mg/g (n=6)，RSD=0.56%；表明该方法重复性良好。

2.5稳定性试验

取供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12 h，按色谱条件测定。结果表明12 h之内测定供试品稳定，盐酸小檗碱峰面积RSD为0.72%(n=6)。

2.6加样回收试验

精密称取已知含量的同一批供试品(批号140302，含量为1.03 mg/g)6份，精密加入对照品溶液储备液5.0 mL，按供试品测定方法测定含量，计算回收率，结果见表1。

表1　回收率测定结果(n=6)

2.7供试品测定

取三批样品按1.3.2项下样品溶液的方法制备供试品溶液，按1.3.1色谱条件进行分析测试，测定峰面积，按外标法计算含量，结果见表2。

表2　供试品测定结果(n=3)

3　结论与讨论

结合DAD光谱，选择345nm作为盐酸小檗碱的测定波长，在345nm测定时分离度较好，基线稳定，响应值适中，因此选择345nm为测定波长参考文献[9-11]报道。

本文采用的流动相是乙腈-0.1%磷酸溶液 (50 ∶50)(每100mL加十二烷基磺酸钠0.1g)，曾比较多种流动相比例[9～12]，以离子对溶液作为流动相，可以使盐酸小檗碱峰达到较好分离，峰型也较好，理论塔板数高 (n=8560)，因此选其作为流动相。

超声波作为一种新技术在提取中草药有效成分方面，应用已日趋广泛。超声波提取效率高，操作简便。同时对超声提取时间做了比较，分别超声10min、15min、20min、30min和45min处理，结果表明随超声时间延长，含量也相应增加，但30min后含量并无变化，故选择超声提取30min。

由于医院制剂质量标准一般都较简单，提高完善标准对于保证药品质量，维护患者用药安全都有重要意义。本实验方法中盐酸小檗碱的线性范围为6.175～61.75 μg/mL(r=0.9998)，平均回收率为99.3%，RSD为0.69 %(n=6)复方抗溃混液中盐酸小檗碱含量为1.02～1.05mg/g。本文建立的含量测定方法，经方法学验证该方法灵敏度高，重复性好，准确，为有效控制复合抗溃混悬液质量提供了科学依据。

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[2]忻志鸣，叶根深，黄红艳，等．复方抗溃混悬液Ⅱ对创面愈合的疗效观察[J]．安徽医药，2015，19(9)：1811-1812, 1813．

[3]贲彦鸿．RP-HPLC法同时测定复方黄连洗剂中黄芩苷、盐酸小檗碱的含量[J]．中国药房，2015，26(15)：2145-2147．

[4]任烨，徐辉，葛争艳，等．HPLC法测定降糖消脂片中盐酸小檗碱的含量[J]．中国药房，2015，26(18)：2530-2532．

[5]陈娟．高效液相荧光色谱法测定黄连上清片中盐酸小檗碱含量[J]．海峡药学，2015，27(11)：53-55．

[6]张萍，刘丹，陈安银，等．荧光粉光光度法测定盐酸小檗碱含量[J]．广州化工，2015，43(19)：103-104．

[7]刘宽浩，刘勇华，庞榕．基于分子印迹技术的直接电位法测定黄柏中的盐酸小檗碱[J]．中国医院药学杂志，2015，35(13)：1179-1182．

[8]孙会敏，田颂九．高效液相色谱法简介及其在药品检验中的应用[J]．齐鲁药事，2011，30(1)：38-42．

[9] 国家药典委员会编. 中国药典2015年版一部[S].北京:中国医药科技出版社,2015:285,458.

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[11]缪珊，栗艳，李捷，等．HPLC法测定参蛇软膏中盐酸小檗碱的含量[J]．中国药师，2014，0(9)：1576-1577, 1578．

[12]王瑞静，李瑞明．HPLC法测定连夏消痞颗粒中盐酸小檗碱的含量[J]．天津药学，2015，27(1)：17-19．

[13]汪玉萍，郝自新．HPLC法同时测定羚羊感冒口服液中牛蒡苷和连翘苷的含量[J]．安徽科技学院学报，2015，29(4)：38-41．

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(责任编辑：马世堂)

Determination of Berberine Hydrochloride in Fufangkangkui Suspension by HPLC Method

CUI Tian, DENG Zu-lei

( Bengbu Institute for Food and Drug Control,Bengbu 233000,China)

Objective：To establish a method for the content determination of berberine hydrochloride in Fufangkangkui suspension.Methods：The content was measured by HPLC. The determination was performed on ZORBAX Eclipse XDB-C18 column，and acetonitrile-0.1% H3PO4which contained 0.1 g/100mL sodium dodecyl sulfate(50 ∶50)and was used as mobile phase．The detection wavelength was 345 nm，and the flow rate was 1.0mL/min. Results：The linear ranges of berberine hydrochloride was linear at the range of 6.175～61.75μg/mL (r=0.9998).The average recovery was 99.3% with RSD 0.69%(n=6). Conclusion：Test shows that the method is specific and simple. It can be used for the quality control of Fufangkangkui suspension.

Fufangkangkui suspension；Berberine hydrochloride；HPLC

2016-01-08

安徽省药品评价监督抽检计划项目。

崔田(1983-)，女，安徽省蚌埠市人，硕士，主管中药师，主要从事药品检验和药品质量标准研究工作。

R284.1；R286.0

A

1673-8772(2016)04-0046-04