Topo Ⅱ、MRP和GST-π在食管胃交界部腺癌中的表达及与新辅助化疗疗效的关系

宋清荣

河南安阳市肿瘤医院胸外科 安阳 455000



Topo Ⅱ、MRP和GST-π在食管胃交界部腺癌中的表达及与新辅助化疗疗效的关系

宋清荣

河南安阳市肿瘤医院胸外科 安阳 455000

目的 探讨Topo Ⅱ、MRP和GST-π5在进展期食管胃交界部腺癌新辅助化疗疗效中的预测价值。方法 对72例食管胃交界部腺癌患者行SOX方案新辅助化疗，以RECIST 1.0评价标准评价疗效。用免疫组化方法检测化疗前3种蛋白的表达情况，并分析其与化疗疗效的关系。结果 年龄和病理类型与化疗敏感性无关(P>0.05)。本组72例患者中新辅助化疗有效率为48.6%，其中5例达病理完全缓解,6例进展。患者肿瘤标本中3种蛋白的表达情况：Topo Ⅱ、MRP和GSTπ的阳性率分别为73.6%、34.7%和40.3%。Topo Ⅱ、MRP和GST-π的表达与化疗敏感性无关(P>0.05)。结论 Topo Ⅱ、MRP和GST-π的表达与食管胃交界部腺癌新辅助化疗的疗效无关，尚不能作为预测SOX方案疗效的指标。

食管胃交界部肿瘤；Siewert Ⅱ 型；新辅助化疗；多药耐药相关蛋白；化疗敏感性

食管胃交界部腺癌(adenocarcinoma of esophagogastric junction)(AEGJ)发病率呈增长趋势[1]。新辅助化疗对进展期胃癌可提高手术切除率、减少术后复发转移、延长生存期[2]。但对于Siewert II型AEGJ，新辅助化疗疗效的报道较少。我们回顾性检测了3种多药耐药基因相关蛋白：Topo Ⅱ、P-gp和GST-π在AEGJ活检标本中的表达，探讨其与化疗疗效的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2010-06—2013-12，我院对72例进展期Siewert II型AEGJ患者给予新辅助化疗。男63例，女9例；年龄40～76岁(中位年龄67岁)。治疗前临床分期为cT3～4N1～3。术前病理类型：中、低分化腺癌66例(其中4例伴印戒细胞癌，7例伴黏液腺癌)，高分化腺癌2例，黏液腺癌3例，印戒细胞癌1例。入选标准：(1)病理检查确诊为腺癌。(2)无远处转移。(3)腹部增强64排CT显示局部肿块侵犯胃壁全层(T3或T4)或有区域淋巴结肿大。(4)体力状况(ECOG)评分为0～2分，且无严重心、肺、肝、肾等脏器功能异常。(5) 无其他恶性肿瘤病史及放疗化疗史。(6)签署知情同意书，愿意接受新辅助化疗及手术者。

1.2 治疗方案 术前行SOX方案新辅助化疗：第1天奥沙利铂注射液130 mg/m2静脉滴注2～3 h ，第1～14天替吉奥胶囊40～60 mg口服 ，2次/d。 3周后重复，共2次。化疗同时予以地塞米松、西米替丁、格拉司琼、苯海拉明等辅助用药防治不良反应。化疗结束后4周进行疗效评价，若无肿瘤进展则行标准AEGJ根治术(D2)。术后常规辅助化疗。

1.3 检测方法

1.3.1 临床检测 在新辅助化疗前对活检肿瘤组织作3种蛋白检测。在新辅助化疗前后分别行胃镜、64排增强CT检查评价疗效。术后行常规病理组织学检查，进一步评价疗效。

1.3.2 免疫组化检测 标本用10%甲醛固定,石蜡包埋,连续切片厚4 μm。玻片用多聚-L-赖氨酸涂覆,常规苏木素-伊红(HE)染色,确定病理类型。采用柠檬酸缓冲液微波抗原修复法。实验试剂：鼠抗人Topo Ⅱ(Ki-S1)、鼠抗人MRP(PA28(6))、鼠抗人GST-π(353-10)、即用型单克隆抗体、检测试剂盒(KIT-9701)、阳性对照片均购自福州迈新生物技术开发公司，操作按说明书进行。Topo Ⅱ蛋白定位于细胞核，MRP蛋白定位于细胞膜及(或)细胞质，而GST-π则定位于细胞质。以细胞结构中存在粗细一致的棕黄色颗粒判断为阳性。若阳性细胞数<50%表示蛋白低表达，计为(-)，而阳性细胞数≥50%则表示蛋白高表达，计为(+)。以上结果由2名病理学专家阅片判断。

1.4 疗效判断 以新辅助化疗前后胃镜、64排增强CT及术后病理切片作为疗效判断的证据。新辅助化疗后原发病灶的疗效判定根据RECIST 1.0[3]标准评估。分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、疾病稳定(SD)、疾病进展(PD)。以CR加PR计算有效率(RR)。毒性反应采用NCI-CTC 3.0不良反应分级标准判定[4]。

1.5 统计学分析 使用SASW 18.0统计软件，对计量资料采用t检验，计数资料采用χ2检验,相关分析采用Logistic多因素回归分析处理相关数据。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 病理特征 分化良好型[5](包括乳头状腺癌、高中分化管状腺癌)38例，分化不良型(低分化管状腺癌、黏液腺癌、印戒细胞癌、未分化癌和单纯癌)34例。PD患者共6例，未行手术治疗，余66例均行R0切除。年龄<65岁者45例，≥65岁者27例。患者年龄、肿瘤分化程度与化疗效果关系，见表1。

表1 新辅助化疗后疗效与年龄分化程度的关系[n(%)]

2.2 治疗情况 本组72例患者全部完成新辅助化疗SOX三周方案2周期。不良反应主要为外周神经毒性、恶心呕吐、粒细胞减少、血小板减少，均经对症治疗后缓解，未出现III度及以上不良反应。新辅助化疗后4周行标准AEGJ根治术(D2)。术后严重并发症：吻合口出血3例，吻合口瘘2例，均保守治疗治愈。

2.3 新辅助化疗结果及术后病理结果 本组66例手术治疗患者新辅助化疗综合疗效判断：5例CR(6.9%)，30例PR(41.7%)，31例SD(43.1%)。新辅助化疗总有效率RR(CR+PR)为48.6%。结果显示AEGJ对SOX三周方案化疗中度敏感。术后病理结果显示：5例未见残留癌细胞，活检病理均为低-中分化腺癌或低分化腺癌，而且不合并粘液腺癌或印戒细胞癌等其他成分。有4例仅见灶状散在癌细胞簇，分别为中低分化腺癌、中分化腺癌合并乳头状腺癌、低分化腺癌、中分化腺癌。病理结果显示单纯中低分化腺癌化疗效果较好。术后病理分期(AJCC 2010年TNM分期标准)[6]： 9例无法分期(5例未发现残留癌细胞，4例癌细胞零散分布，无法判定T分期)，Ⅱ期23例、Ⅲ期34例。

2.4 预测因子检测的结果 各预测因子的表达与年龄、分化程度无明显相关性(P>0.05)。在72例AEGJ标本中，3种蛋白的表达情况及与化疗疗效的关系见表2。Topo Ⅱ、MRP和GST-π阳性表达分别为53例(73.6%)、25例(34.7%)、和29例(40.3%)，回归结果显示在CR+PR组和SD+PD组之间均无显著性差异(P>0.05)。

表2 各预测因子表达情况及与疗效的关系[n(%)]

3 讨论

研究表明[7]AEGJ与中远段胃癌在临床病理指标及分子标记物上存在明显差异，提示两者在发生发展机制上可能存在不同。新辅助化疗在进展期胃癌中受到关注，Li等[8]的研究显示：新辅助化疗能显著改善中国人群进展期胃癌的治疗效果，提高5 a无瘤生存率。但将AEGJ单独进行新辅助化疗研究的报道仍较少。肿瘤细胞耐药是消化道恶性肿瘤疗效差、复发转移率高、5 a生存率低的主要原因。如何预测AEGJ对化疗的敏感性，找到较为准确的预测新辅助化疗敏感性的因子，将有助于制定出针对性个体化化疗方案，减少原发性耐药发生和不获益的治疗，提高5 a无瘤生存率及患者生活质量。

我们应用SOX三周方案对AEGJ进行新辅助化疗，有效率为48.6%，与有关报道基本相似[9]。达到了降期、提高R0切除率的目的，而且不良反应均经治疗后缓解。术后仅发生3例吻合口出血、2例吻合口瘘。表明新辅助化疗并未明显增加手术并发症及手术风险。化疗效果与年龄、肿瘤分化程度无明显相关性。

多药耐药基因产物主要为Topo Ⅱ、MRP和GST-π。我们回顾性分析了Topo Ⅱ、MRP和GST-π在AEGJ新辅助化疗前的表达，探讨其与化疗敏感性的关系。

在其他恶性肿瘤的研究结果显示[10]，Topo Ⅱ在肿瘤细胞中的表达增强可以提高以DNA拓扑异构酶为靶点的抗肿瘤药物的效果。而Topo Ⅱ的含量下降及酶活性的降低均会引起易解离复合物形成减少,导致DNA损伤减少而致肿瘤细胞对化疗药物耐受。MRP是通过减少还原型谷胱甘肽的协同转运机制来降低细胞内的药物浓度[11]，从而导致肿瘤细胞耐药。研究表明[12]细胞表达MRP增高将明显增加肿瘤细胞对烷化类抗癌药的耐药性药物抵抗性。而GST-π主要是通过将谷胱甘肽耦联到化疗药物上，从而增加了化疗药物外流，降低了抗肿瘤药物的细胞毒性作用[13]。本组中Topo Ⅱ、MRP和GST-π的表达与化疗效果之间均无明显相关，与有关研究[14]相一致，说明其表达状况尚不能预测SOX方案在AEGJ新辅助化疗的作用。

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(收稿 2016-02-22)

Expression of Topo Ⅱ,MRP and GST-π in adenocarcinoma of esophagogastric junction and its relation to neoadjuvant chemotherapy

SongQingrong.

DepartmentofSurgery,AnyangTumorHospital,Anyang, 455000,China

Objective To investigate the predictive values of Topo Ⅱ, MRP and GST-π to neoadjuvant chemotherapy in patients with adenocarcinoma of esophagogastric junction (AEGJ). Methods Clinical data of 72 patients of locally advanced AEGJ between June 2010 and Dec 2013 were analyzed retrospectively, who underwent neoadjuvant chemotherapy were reviewed．All patients were given SOX neoadjuvant chemotherapy and the responses to treatment were evaluated according to RECIST 1.0．Expressions were detected by immunohistochemistry in 72 cases of AEGJ tissues before neoadjuvant chemotherapy．Relationship between various proteins and chemotherapy efficacy was analyzed by univariate and logistic multivariate regression analyses.Results The chemotherapy sensitivity had no correlation with age and pathological types(P>0.05)．The overall response rates was 48.6% including complete response in 5 cases and progressive(advanced) disease in 6 cases. Expressions of the 3 proteins in 72 cases of AEGJ tissues were as follows：Topo Ⅱwas 73.6%, MRP was 34.7%, GST-πwas 40.3%. Topo Ⅱ, MRP and GST-π were not correlated with chemotherapy sensitivity(P>0.05).Conclusion Expression of Topo Ⅱ, MRP and GST-π has not great value in the prediction of SOX neoadjuvant chemotherapy efficacy，they may not be used to predict the efficacy before chemotherapy for AEGJ patients．

Esophagogastric junction neoplasms; Siewert Ⅱ; Neoadjuvant chemotherapy； Multidrug resistance-associated protein； Chemosensitivity

R446.6

A

1077-8991(2016)04-0005-03