EZH2在乳腺癌中的表达及与患者临床病例特征关系

沙聪 杨峻峰 胡伟 周东智

江苏南通瑞慈医院普外科 南通 226000



EZH2在乳腺癌中的表达及与患者临床病例特征关系

沙聪 杨峻峰 胡伟 周东智

江苏南通瑞慈医院普外科 南通 226000

目的 探讨组蛋白甲基转移酶EZH2在人乳腺癌组织中的表达及与患者临床病例特征和预后的关系。方法 选取2011-01-2015-02间南通瑞慈医院普外科手术治疗的乳腺癌患者88例和同期手术切除的良性乳腺病变24例患者为研究对象。采用免疫组织化学法检测乳腺癌组织和良性病变组织中EZH2蛋白的表达水平，并分析其与患者临床病理学特征及生存期关系。结果 EZH2主要表达于肿瘤细胞核呈棕黄色颗粒。乳腺癌组织中EZH2阳性表达率为56.8%(50/88)，良性病变中表达率为20.8%(5/24)，两者差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌患者EZH2阳性表达与肿瘤大小(P<0.05)和淋巴结转移(P<0.05)有关。Kaplan-Meier生存分析显示，EZH2阳性和阴性乳腺癌患者3 a无疾病进展生存率分别68.5%和84.1%，阴性患者高于阳性患者(P<0.05)。结论 EZH2在乳腺癌中表达高于乳腺良性病变组织，且阳性表达乳腺癌患者预后较差。

EZH2；乳腺癌；免疫组化；临床病理特征；生存期

EZH2基因定位于人7染色体3带5区，为多梳蛋白复合体PcG (Polycomb group)家族重要成员之一[1]。分子生物学研究显示，EZH2蛋白是组蛋白甲基化重要的工具酶，能够催化H3K27(组蛋白H3赖氨酸27位)甲基化，促进多个癌基因的表达[2]。EZH2在肺癌[3]、结直肠癌[4]和胃癌等多种实体肿瘤组织中呈现高表达并与患者预后存在一定的关系。我们通过免疫组织化学方法检测乳腺癌组织和乳腺良性病变组织中EZH2的表达，探讨其在乳腺癌发生中的作用及与患者预后和临床病理参数的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2011-01—2015-02间我科手术治疗的乳腺癌患者88例和同期手术切除的良性病变24例作为研究对象。入选标准：标本经病理学确诊为乳腺癌或良性乳腺病变者。术前未接受过新辅助放化疗及生物治疗。有完整的术后随访时间及生存时间数据。组织标本获取经家属签署知情同意书。排除标准：术前接受过放化疗或生物治疗者。合并其他恶性肿瘤者。术后无随访数据者。乳腺癌患者中位年龄51岁(26～79岁)，良性乳腺病变患者中位年龄38岁(22～76岁)，本组患者全部为女性。

1.2 EZH2蛋白表达检测方法 将组织标本切成5um左右的石蜡切片，然后对切片进行脱蜡水化，置于二甲苯中浸泡10 min，无水乙醇浸泡5 min，然后将切片置于3% H2O2中，避光孵育15 min，进行灭活内源性过氧化物酶。然后进行组织抗原修复，将切片放入加有0.01% mol/L枸橼酸钠的水浴锅中至95 ℃，15 min。用100 μl 含10%的正常血清将滴在组织处，孵育1 h进行封闭。加入一抗，4℃ 孵育过夜。然后加入二抗，室温孵育1 h。然后对切片进行显色。封片，干燥后显微镜先观察拍照，观察表达水平。

1.3 阳性结果判定[5]每张切片选取5个视野，计数每个视野中细胞总数及EZH2阳性的细胞数。染色强强度：不着色0分，淡黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分。阳性细胞所占的百分比：无着色为0分，阳性细胞上<25%为1分，阳性 25%～50%为2分，阳性细胞上>50%为3分，两种积分相乘，>3分为阳性。

1.4 随访 患者通过定期住院、门诊复查或电话方式进行随访，将手术结束日期作为随访开始时间。随访结束时间为2015年2月。随访期间记录患者疾病进展或死亡事件发生的时间。

1.5 统计学方法 所有统计分析采用SPSS17.0软件完成，计量资料采用表示，组间比较采用t检验，计数资料采用率表示，组间比较采用χ2检验或者Fisher精确检验。生存分析采用Kaplan-Meier风险比例模型Log-rank 检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 EZH2在乳腺癌及良性乳腺组织中的表达 EZH2蛋白主要表达于细胞核，呈现棕黄色颗粒(图1)。乳腺癌组织中EZH2阳性表达率为56.8%(50/88)，良性病变中表达率为20.8%(5/24)，两者比较P<0.05。

(A:阴性；B:弱阳性；C：中度表达；D：强阳性)

2.2 EZH2表达与乳腺癌患者临床病理特征关系 乳腺癌患者EZH2阳性表达与肿瘤大小(P<0.05)和淋巴结转移(P<0.05)有关，而与患者年龄(P>0.05)、月经状态(P>0.05)、组织类型(P>0.05)及临床分期无关(P>0.05)，见表1。

表1 EGFR蛋白表达与乳腺癌临床病理特征之间的相关性

2.3 EGFR蛋白与患者预后 Kaplan-Meier生存分析显示，EZH2阳性和阴性乳腺癌患者3 a无疾病进展生存率分别为68.5%和84.1%，阴性患者高于阳性患者(P<0.05)，图2。

图2 2组患者生存曲线

3 讨论

乳腺癌(breast cancer)是女性发病率最高的恶性肿瘤，并且随着年龄的增加发病率呈现上升趋势[6]。近年来由于我国妇女普遍生育年龄较晚，且生育数量较少，同时由于不恰当的应用激素等，乳腺癌的发病年龄呈现年轻化趋势。来自美国的流行病学研究显示，乳腺癌在女性实体肿瘤中发病率为第一位，病死率为第二位，乳腺癌占到女性所有实体肿瘤的23%左右[7]。

乳腺癌的发病确切机制不详，近年来的研究显示[8]，乳腺癌组织中存在多个癌基因的激活过度表达与抑癌基因的失活有关。这种癌基因与抑癌基因的表达平衡紊乱可能在乳腺癌的发生发展中发挥了重要作用。

EZH2是由Hobert等采用酵母双杂交系统方法发现的一个新基因，是一个典型的癌基因。该基因编码的蛋白能够与其他蛋白构成多梳蛋白复合体PcG。该复合体具有组蛋白修饰活性，能够使组蛋白H3K27和或H3K9发生甲基化，进而沉默基因组中多个抑癌基因的表达，导致肿瘤的发生[9-10]。汪小霞等人[5]研究发现，EZH2在乳腺癌组织中的阳性表达率为59.0%，高于乳腺良性肿瘤组织。本组乳腺癌组织中EZH2的阳性表达率为56.8%，与汪小霞等人的报道基本一致，提示EZH2在乳腺癌的发生发展中起到重要作用。姚凡[11]及其同事采用免疫组织化学法检测了105例乳腺癌中EZH2蛋白表达情况,并进一步探讨其与乳腺癌临床病理因素及预后的关系。结果认为EZH2蛋白在乳腺癌组织中表达明显高于乳腺良性疾病,其表达与淋巴结转移、病理组织学分级、ER表达及乳腺癌预后相关(P<0.05)。本组中我们对EZH2对患者预后的影响做了分析，阳性患者3 a无疾病进展生存率显著低于阴性组，与姚凡等人的研究结论相似。因此，我们认为EZH2基因的过度表达在乳腺癌的发生发展中起到重要作用，上可通过检测EZH2的表达水平对患者预后进行预测。

[1] Bauge C, Bazille C, Girard N, et al. Histone methylases as novel drug targets: developing inhibitors of EZH2[J]. Future Med Chem, 2014,6(17):1 943-1 965.

[2] Chou RH, Chiu L, Yu YL, et al. The potential roles of EZH2 in regenerative medicine[J]. Cell Transplant, 2015,24(3):313-317.

[3] Poirier JT, Gardner EE, Connis N, et al. DNA methylation in small cell lung cancer defines distinct disease subtypes and correlates with high expression of EZH2[J]. Oncogene, 2015,34(48):5 869-5 878.

[4] Liu YL, Gao X, Jiang Y, et al. Expression and clinicopathological significance of EED, SUZ12 and EZH2 mRNA in colorectal cancer[J]. J Cancer Res Clin Oncol, 2015,141(4):661-669.

[5] 汪小霞, 孟刚, 李丽, 等. 乳腺癌中EZH2和p53蛋白表达及其临床意义[J]. 临床与实验病理学杂志, 2015,31(3):273-276.

[6] DeSantis C, Siegel R, Bandi P, et al. Breast cancer statistics, 2011[J]. CA Cancer J Clin, 2011,61(6):409-418.

[7] DeSantis C, Ma J, Bryan L, et al. Breast cancer statistics, 2013[J]. CA Cancer J Clin, 2014,64(1):52-62.

[8] Drukker CA, Schmidt MK, van Dalen T, et al. Gene expression classifiers in the prognosis of breast cancer [J]. Nederlands tijdschrift voor geneeskunde, 2014,158:7 001.

[9] Curry E, Green I, Chapman-Rothe N, et al. Dual EZH2 and EHMT2 histone methyltransferase inhibition increases biological efficacy in breast cancer cells[J]. Clin Epigenetics, 2015,7(1):84.

[10]Lee SR, Roh YG, Kim SK, et al. Activation of EZH2 and SUZ12 Regulated by E2F1 Predicts the Disease Progression and Aggressive Characteristics of Bladder Cancer[J]. Clinical cancer research, 2015,21(23):5 391-5 403.

[11]姚凡, 刘崇, 房月, 等. EZH2在乳腺癌中的表达及其临床意义[J]. 中国微生态学杂志, 2013,25(2):143-146.

(收稿 2016-03-10)

杨峻峰，电话：051385969908

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