结肠癌组织DPD和Ki-67蛋白的表达和临床意义

艾晓晴，贾喜花

（1.承德医学院，河北承德 067000；2.保定市第一中心医院）

结肠癌组织DPD和Ki-67蛋白的表达和临床意义

艾晓晴1，贾喜花2△

（1.承德医学院，河北承德 067000；2.保定市第一中心医院）

目的：探讨结肠癌组织二氢嘧啶脱氢酶（DPD）、细胞增殖核抗原Ki-67的表达及临床意义。方法：采用免疫组织化学法检测70例结肠癌组织和30例癌旁正常组织DPD、Ki-67蛋白的表达情况，并分析二者与结肠癌临床病理特征的关系。结果：结肠癌组织DPD、Ki-67的阳性表达率均明显高于癌旁正常组织（P＜0.05）。结肠癌组织DPD、Ki-67表达与性别、年龄、肿瘤大小、分化程度无关（P＞0.05），与pTNM分期和浸润深度有关（P＜0.05）。结肠癌组织DPD、Ki-67的表达呈正相关关系（r=0.283，P＜0.05）。结论：DPD、Ki-67可能共同参与了结肠癌的发生发展过程，二者表达升高可能与结肠癌的不良预后有关。

二氢嘧啶脱氢酶；Ki-67；结肠癌

结肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，发病率呈逐年升高的趋势。结肠癌患者早期常无特异性表现，确诊时往往已属中晚期，因此，积极寻找预测结肠癌生物学行为的标志物对结肠癌的治疗和评价预后具有重要意义。二氢嘧啶脱氢酶（DPD）是5-FU分解代谢的限速酶，与核酸的合成和分解代谢相关，多项研究表明，肿瘤组织中DPD水平与5-FU的抗癌效应有密切关系，近年来成为消化道恶性肿瘤的研究热点［1］。Ki-67是目前应用最广泛的增殖细胞标志物之一，是检测肿瘤增殖活性最可靠的指标。本研究旨在检测DPD、Ki-67在结肠癌组织中的表达情况及二者的相关性，并探讨二者在结肠癌发生发展中的意义。

1　材料与方法

1.1一般资料 2011年1月-2012年12月保定市第一中心医院经外科手术切除并经病理诊断的原发性结肠癌患者70例，均为腺癌。男38例、女32例，年龄28-83岁、中位年龄60岁；术前均未行放、化疗及生物靶向治疗等；按2010年美国联合癌症分类委员会（AJCC）制定的标准，患者TNM病理分期，Ⅰ-Ⅱ期49例，Ⅲ-Ⅳ期21例；高分化29例，中分化31例，低分化10例。取癌旁正常组织标本30例（距肿瘤边缘＞5cm的正常组织）作为对照。

1.2试剂 鼠抗人DPD单克隆抗体（1：150稀释）、兔抗人Ki-67单克隆抗体（1：50稀释），美国Abcam公司；通用免疫组织化学SP试剂盒和DAB显色试剂，福州迈新生物技术开发有限公司。

1.3免疫组化染色 应用免疫组织化学染色SP二步法。DPD阳性染色呈棕黄色颗粒，主要位于细胞质；Ki-67阳性染色呈棕黄色颗粒，主要位于细胞核。

1.4结果判定 染色切片在双盲情况下由两名病理科资深医师观察并评价结果。①每例每个指标随机观察5个400倍高倍视野，计数阳性细胞数，根据阳性细胞百分率＜5%、5%-25%、26%-50%、51%-75%、＞75%分别计0、1、2、3、4分。②根据显色强度，未着色、浅黄色、棕黄色、棕褐色分别计0、1、2、3分。根据①×②判定最终结果：0-1分为（-）、2-4分为（+）、5-8分为（++）、9分以上为（+++），以（-）为阴性表达，（+）、（++）、（+++）为阳性表达。

1.5统计分析 采用SPSS 19.0软件进行统计分析，计数资料采用卡方检验，相关性行Spearman等级相关分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1结肠癌和癌旁组织DPD、Ki-67的表达情况 结肠癌组织DPD、Ki-67的阳性表达率均明显高于癌旁正常组织（P＜0.05）。见表1：

表1　结肠癌和癌旁组织DPD、Ki-67的表达

2.2DPD、Ki-67表达与结肠癌临床病理特征的关系 结肠癌组织DPD、Ki-67表达与性别、年龄、肿瘤大小、分化程度无关（P＞0.05）；与pTNM分期和浸润深度有关（P＜0.05）：Ⅲ-Ⅳ期明显高于Ⅰ-Ⅱ期，T3、T4明显高于T1、T2。见表2：

表2　DPD、Ki-67表达与结肠癌临床病理特征的关系

2.3结肠癌组织DPD、Ki-67表达的相关性 结肠癌组织DPD、Ki-67的表达呈正相关关系（r=0.283，P＜0.05）。见

表3：

表3　结肠癌组织DPD、Ki-67表达的相关性

3　讨论

二氢嘧啶脱氢酶（DPD）是5-FU分解代谢起始阶段的降解酶，在辅基NADPH的参与下，将5-FU还原为二氢氟尿嘧啶（FUH2），再经二氢嘧啶酶打开环状结构，产生5-氟-β-酰脲丙酸（FUPA），最后在β-丙氨酸合成酶催化下，形成5-氟-β-丙氨酸（FBAL）经肾脏排出体外［2］。5-FU进入体内后，80%以上在肝脏和其他组织中分解，而决定5-FU细胞毒性的合成代谢只占极少比例，作为5-FU分解过程的关键酶，DPD活性高低直接决定了5-FU进入合成代谢和产生核苷酸类似物的量［3-5］。Ki-67是目前应用最广泛的增殖细胞标志物之一，大量实验研究表明，Ki-67的表达主要定位于增殖期细胞核，可见于细胞周期的所有活动阶段（G1期、S期、G2期），它的表达与细胞周期及细胞生长分数密切相关，是检测肿瘤细胞增殖活性最可靠的指标［6］。本研究采用免疫组化法检测了结肠癌组织DPD、Ki-67的表达情况，结果显示结肠癌组织DPD、Ki-67的阳性表达率均明显高于癌旁正常组织，TNM分期越晚、浸润深度越深，DPD、Ki-67的阳性表达率越高；并且，结肠癌组织DPD、Ki-67的表达呈正相关关系，表明二者的阳性表达与结肠癌的恶性程度和疾病进展有着密切关系。

综上所述，本研究提示，DPD、Ki-67可能与结肠癌组织核酸代谢亢进以及结肠癌的不良预后有密切关系，联合检测结肠癌DPD、Ki-67蛋白的表达水平可能会有助于结肠癌的临床诊断和预后判断。

［1］Zhu AX， Puchalski TA， Stanton VP Jr， et al. Dihydropyrimidine dehydrogenase and thymidylate synthase polymorphisms and their association with 5-fl uorouracil/leucovorin chemotherapy in colorectal cancer［J］.Clin Colorectal Cancer，2004，3（4）:225-234.

［2］Mattison LK，Soong R，Diasio RB.Implications of dihydropyrimidine dehydrogenase on 5-fluorouracil pharmacogenetics and pharmacogenomics［J］.Pharmacogenomics，2002，3（4）:485- 492.

［3］Maring JG，van Kuilenburg AB，Haasjes J，et al.Reduced 5-FU clearance in a patient with low DPD activity due to heterozygosity for a mutant allele of the DPYD gene［J］.Br J Cancer， 2002，86（7）: 1028-1033.

［4］Etienne MC，Chatelut E，Pivot X，et al.Co-variables influencing 5-fluorouracil clearance during continuous venous infusion.A NONMEM analysis［J］.Eur J Cancer，1998，34（1）:92-97.

［5］Diasio RB， Beavers TL， Carpenter JT. Familial deficiency of dihydropyrimidine dehydrogenase. Biochemical basis for familial pyrimidinemia and severe 5-fluorour acil-induced toxicity［J］. J Clin Invest，1988，81（1）:47-51.

［6］Bruno S，Darzynkiewicz Z.Cell cycle dependent expression and stability of the nuclear protein detected by Ki-67 antibody in HL-60ceHs［J］.Cell Prolif，1992，25（1）:31-40.

EXPRESSIONS AND CLINICAL SIGNIFICANCE OF DPD AND KI-67 IN COLON CANCER

AI Xiao-qing， JIA Xi-hua
(Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China)

Objective: To investigate the expression and clinical signifi cance of dihydropyrimidine dehydrogenase（DPD） and Ki-67 in colon cancer. Methods: Immunohistochemical stain was used to detect the expression of DPD and Ki-67 in 70 cases colon cancer and 30 cases adjacent normal tissues， and the relationship between DPD， Ki-67 and clinicopathologic features of colon cancer was also analyzed. Results: The positive expression rate of DPD and Ki-67 in colon cancer were obviously higher than adjacent normal tissues （P＜0.05）. In colon cancer， the expression of DPD and Ki-67 was irrelevant to sex， age， size of tumour and differentiation degree （P＞0.05）； but related to pTNM stage and infi ltration depth（P＜0.05）. In colon cancer， the Ki-67 expression was positively related to DPD expression （r=0.283， P＜0.05）. Conclusions: DPD and Ki-67 maybe involve the development of colon cancer together， and their higher expression maybe concerned with poor prognosis of colon cancer.

DPD； Ki-67； Colon cancer

R735.3

A

1004-6879（2016）01-010-03

2015-07-28）