植物血凝素诱发凝集反应及对凝血系统的影响

贾睿奕，张　庆，丁晓旭，苏艳娜

（承德医学院附属医院呼吸科，河北承德 067000）

植物血凝素诱发凝集反应及对凝血系统的影响

贾睿奕，张庆△，丁晓旭，苏艳娜

（承德医学院附属医院呼吸科，河北承德 067000）

目的：探讨植物血凝素（PHA）诱发红细胞凝集反应及对凝血系统的影响。方法：12只Wistar大鼠随机分为实验组和对照组，分别经尾静脉注射植物血凝素和生理盐水，观察红细胞在体内外的凝集反应、溶血现象，大鼠的一般状况以及大鼠凝血指标的变化情况。结果：植物血凝素在体内外均能诱发凝集反应。实验组大鼠表现为竖毛、弓背、蜷缩、颤抖，而对照组大鼠无上述表现。实验组大鼠纤维蛋白原显著低于对照组，凝血酶原时间、凝血酶时间、活化的部分凝血活酶时间、国际标准化比值显著高于对照组，组间比较差异有统计学意义（P＜0.01，P＜0.05）。结论：植物血凝素在体内外均能诱发凝集反应，并能激活凝血系统，在临床应用时应注意其对凝血系统的影响。

植物血凝素；凝集反应；凝血系统；临床应用

植物血凝素（PHA）是一种由低聚糖和蛋白质组成的高分子糖蛋白，能与人和动物的红细胞受体相结合，引起凝集反应，故命名为植物血凝素［1］。植物血凝素可从植物的根、茎、种子等部位进行萃取、提纯，有着较为广泛的应用，如用于各种细菌、病毒性疾病的治疗和预防，以及肿瘤性疾病的治疗［2-5］。植物血凝素还具有一个特性，即在体外能够引起红细胞发生凝集反应，但在体内的凝集反应尚不明确。目前，国内外对植物血凝素的研究还不充分，临床应用中也未注意到其体内的凝集现象。是否血凝素在体内也能诱发红细胞发生凝集反应，并导致凝血系统及微循环的障碍，本研究对此进行了探讨。

1　材料与方法

1.1实验动物与试剂 SPF级Wistar大鼠12只，雌雄各半，体重150-200g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供（许可证号：SCXK（京）2012-0001）。实验中按实验动物使用的3R原则给予大鼠人道关怀。植物血凝素，购自上海生物实验技术有限公司。

1.2方法

1.2.1动物分组：大鼠随机分为血凝素实验组和生理盐水对照组，每组6只（雌雄各半），分别经尾静脉注射血凝素和生理盐水，剂量均为1.5ml/100g。

1.2.2观察指标：经静脉注射血凝素和生理盐水4h后：①观察大鼠的一般状况；②经大鼠尾静脉采血，采用玻片法在显微镜下观察有无凝集现象；同时，应用试管法，将血液离心后观察有无溶血现象。

1.2.3监测凝血指标：腹腔麻醉大鼠后，经下腔静脉取血，检测大鼠的凝血指标：纤维蛋白原（FIB）、凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）、活化的部分凝血活酶时间（APTT）和国际标准化比值（INR）。

1.3统计分析 数据应用SPSS 17.0软件包进行统计处理，组间比较采用两独立样本的t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1大鼠一般状况 实验组大鼠主要表现为精神不振、弓背、蜷缩、竖毛、颤抖、反应差、活动少；对照组大鼠无上述表现。

2.2凝集及溶血现象 对照组无凝集及溶血现象；实验组出现凝集现象，且离心后血液上清液呈橙红色，出现溶血现象（图1-2）。

图1　显微镜下血涂片观察（A.对照组，B.实验组）

图2　溶血实验结果（左.对照组，右.实验组）

2.3凝血指标 实验组大鼠FIB显著低于对照组，PT、TT、APTT、INR显著高于对照组，组间比较差异有统计学意义（P＜0.01，P＜0.05）。见附表：

附表 两组大鼠凝血指标检测结果（，n=6）

附表 两组大鼠凝血指标检测结果（，n=6）

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3　讨论

植物血凝素是一种具有较强免疫调节作用的高分子糖蛋白，对T淋巴细胞、B淋巴细胞、CIK细胞等多种免疫细胞的活性均有较强的促进作用，能够刺激机体产生IFN-γ、IL-2、IL-4等多种细胞因子［6-7］。植物血凝素在临床上用于各种细菌、病毒性疾病的治疗和预防、也可用于肿瘤的治疗。但目前对植物血凝素的研究还有不同观点，有研究报道原发性肿瘤细胞的淋巴转移、血行转移等与体内血凝素结合位点的存在呈正相关关系；同时，植物血凝素也可诱发人体的过敏症状［8-9］。虽然植物血凝素在体外的凝集现象被广泛熟知，但在体内可能由于血浆的稀释作用，红细胞的凝聚现象减弱，从而被忽视。但当血凝素在体内达到一定浓度后，红细胞凝集能力加强，通过微血管时可能会使血管内皮受损，从而激活凝血系统，产生继发凝血和纤溶失衡。

本研究将植物血凝素注入大鼠体内，当血凝素进入血液并达到一定浓度后，血液出现凝集反应，导致红细胞凝集成团，阻塞毛细血管，从而造成组织缺血缺氧，大鼠出现相应的病理表现，如精神不振、弓背、蜷缩、竖毛、颤抖等；同时本研究发现，体内出现凝集反应后，在补体的作用下可发生溶血；并伴随着纤维蛋白原的下降，凝血酶原时间、凝血酶时间、活化的部分凝血活酶时间等明显升高，提示凝血系统被激活。

随着相关研究的不断深入，作为免疫学领域极其重要的药物，植物血凝素不但具有巨大的应用前景，而且植物血凝素抗菌、抗病毒、抗肿瘤的作用也逐渐应用于临床。但在临床应用时应注意，植物血凝素在体内还具有诱发红细胞凝集的作用，并且可引起凝血系统的改变。

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AGGLUTINATION REACTION INDUCED BY PHYTOHEMAGGLUTININ AND ITS’ EFFECTS ON
COAGULATION SYSTEM

JIA Rui-yi， ZHANG Qing， DING Xiao-xu， et al
(Department of Respiratory Medicine, the Affiliated Hospital of Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China)

Objective: To explore the agglutination reaction induced by phytohemagglutinin （PHA） and it's effects on coagulation system. Methods: 12 Wistar rats were randomly divided into experimental group and control group，which were injected PHA and 0.9% saline into caudal vein respectively. The agglutination of red blood cells in vitro and in vivo， hemolysis， the rats' general conditions and coagulation markers of rats were observed. Results: PHA could induce agglutination reaction and hemolysis in vitro and in vivo. The rats in experimental group showed the following performance: piloerection， arched， cured up and trembling； but the rats in control group did not show above performance. The fi brinogen of rats in experimental group was obviously lower than that of rats in control group （P＜0.01）； While the prothrombin time， thrombin time， thromboplastin time and international normalized ratio were obviously higher （P＜0.01， P＜0.05）. Conclusions: PHA can induce agglutination reaction in vivo and in vitro； it also can activate coagulation system. Clinical application should pay attention to its' effects on coagulation system.

Phytohemagglutinin （PHA）；Agglutination reaction；Coagulation system；Clinical application

R392-3

A

1004-6879（2016）01-012-03

2015-04-07）

（基础医学栏目编辑：陈志宏）