RP-HPLC测定自微乳中雷公藤甲素的含量

吕 飞 冯 珺 倪坚军 俞春燕 蔡鑫君

·药学研究·

RP-HPLC测定自微乳中雷公藤甲素的含量

吕 飞 冯 珺 倪坚军 俞春燕 蔡鑫君

RP-HPLC；雷公藤甲素；自微乳

雷公藤甲素（triptolide，TP）是从雷公藤中提取分离到的环氧化二萜内酯化合物，是各种雷公藤制剂的主要活性成分，具有抗炎、免疫抑制、抗肿瘤和抗生育等多种药理作用[1]。但雷公藤甲素存在水溶性差，对胃肠道刺激性大，生物利用度不高等问题。自微乳释药系统（self-microemulsifying drug delivery system，SMEDDS）是由药物、油相、表面活性剂和助表面活性剂组成的热力学稳定的均一、透明或半透明、各向同性的溶液，口服后在生理体温、胃肠道蠕动作用下，遇胃肠液分散成粒径＜100nm的性能良好的O/W（水/油）微乳[2]，可以有效改善药物溶解度，提高药物生物利用度。本研究利用伪三相图确定雷公藤甲素自微乳的处方工艺，并采用HPLC法建立雷公藤甲素自微乳的含量测定方法。

1 仪器与试药

Agilent 1100高效液相色谱仪（G1322A脱气机，DAD检测器，手动进样器，Chemstation色谱工作站)，BT25S分析天平（赛马利斯科学仪器（北京）有限公司），KQ-50E超声仪（昆山市超声仪器有限公司），雷公藤甲素对照品（纯度99.9%，111567-201404，中国食品药品检定研究院），雷公藤甲素原药（纯度≥98%，20150109，上海宝曼生物）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18（4.6mm×150mm，5μm）；流动相甲醇：0.01mol/L磷酸二氢钠水溶液（pH调节到4.1）40∶60，流速1.0mL，柱温28℃，检测波长218nm，进样量20μL。

2.2 对照品溶液的制备 精密称定雷公藤甲素对照品约10mg，置于100mL容量瓶，加入流动相溶解、稀释至刻度，摇匀定容。

2.3 供试品及阴性样品溶液的制备 精密量取雷公藤甲素自微乳约5.0mL于100mL容量瓶，加入流动相溶解、超声（200w，50kHz）30min使其溶解，稀释至刻度，摇匀定容。滤过即得样品。取不含主药空白自微乳同法制备阴性样品溶液。

2.4 专属性实验 将雷公藤甲素供试品、对照品及阴性样品溶液均按“2.1”色谱条件项下的方法进样，比对，结果见图1。显示雷公藤甲素供试品主峰的保留时间（4.5min）与对照品溶液主峰的保留时间一致，辅料对其主峰并未有影响。

图1 雷公藤甲素供试品、对照品及阴性样品溶液HPLC色谱图

2.5 线性关系试验 精密量取雷公藤甲素标准品储备液1、2、4、6、8、10mL，分别置25mL容量瓶中，定容。分别进样20μL，按“2.1”色谱条件项下的方法，测定雷公藤甲素峰面积的响应值（A）。以峰面积响应值（A）对雷公藤甲素浓度（ρ）进行回归，得线性方程A=43.266ρ+ 0.3425（r=0.9999），其进样量在4.048～40.48mg/mL范围内线性关系良好。

2.6 精密度和重复性试验 取浓度分别为5.42、13.55、27.1μg/mL的高、中、低三个对照品溶液20 μL进样注入液相色谱仪，每个浓度重复进样6次，计算峰面积响应值（A）的RSD分别为1.07%、0.79%、0.51%（n=6）；取雷公藤甲素自微乳，按“2.3”项供试品制备方法平行制备6份，按“2.1”色谱条件项下的方法测定其含量，各进样1次，得到平均含量为2.25mg/mL，RSD为2.54%（n=6）。

2.7 加样回收率测定 精密量取已知含量的供试品溶液3份，分别加入高、中、低3种浓度的对照品（即雷公藤甲素处方量的80%、100%、120%），用流动相溶解超声，定容至20mL，按“2.1”色谱条件项下的方法测定其含量，得平均加样回收率为（97.2±1.4）%（RSD=1.44%，n=9），见表1。

杭州市科技发展计划项目（No.20130733Q14）；浙江省中医药科技计划项目（No.2015ZA148）

杭州市红十字会医院药剂科（杭州 310003）

蔡鑫君，Tel：0571-56109869；E-mail：zjtcmcxj@163.com