上市后眼部注射剂质控指标再评价

吴超君， 徐丽君

(吉林省人民医院药学部， 吉林 长春 130000)

上市后眼部注射剂质控指标再评价

吴超君， 徐丽君

(吉林省人民医院药学部， 吉林 长春 130000)

目的：为了提高药品质量，减少不良反应，提高用药安全性，探讨已上市眼部注射制剂在质控指标上的差异。方法与结果：根据《中国药典》2015版中的检测方法，对两种上市后的眼部注射制剂进行实验室再检测，结果发现在非还原性SDS-PAGE和不溶性颗粒两个指标上，两种药物存在显示差异。非还原性SDS-PAGE检测显示，A药主条带含量86.5%，B药63.6%；不溶性颗粒≥10μm的颗粒数，A药为0个/mL，B药平均450个/mL；不溶性颗粒≥2μm，但小于≤10μm的，B药平均值25680个/ mL，A药2170.8个/mL。结论：两种药物在质控指标上存在差异，需要关注的是检测结果是否对临床疗效存在潜在影响，是否影响药品质量及用药的安全性，有待继续研究。

眼部注射制剂； 质控标准； 疗 效； 安全性

目前，生物制剂在国内蓬勃发展，越来越多的生物制剂研发得到了市场准许并成功应用于临床。我国现有两种治疗湿性年龄相关性黄斑变性疾病的生物制剂被CFDA批准用于临床，分别为雷珠单抗(A药)和康柏西普(B药)眼部注射剂。但是我国药典没有针对此类特殊部位生物制剂的质控标准，因此，本实验对关键质量指标进行检测，目的在于观察两药之间质控指标的差异，为该类药品的质控标准提供参考依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器：电泳仪，产地：美国Bio-Rad Laboratories，GWJ-8微粒检测仪，产地：天津天大天发科技有限公司。

1.2 试药：预制胶(BIO-RAD 7.5%)产地：美国Bio-Rad Laboratories。雷珠单抗 批次 S0034，产地：瑞士Novartis Pharma Stein AG，康柏西普 批次201507b07，产地：成都康弘生物科技有限公司。

2 方法与结果

2.1 方法：参考《中国药典》附录中的相关检测方法，对试药进行检测，每个检测项目建立标准化流程，保证结果的可重复性。

2.1.1 非还原分子量测定(聚丙烯酰胺凝胶电泳法)：待测试药用HPLC水稀释至2mg/mL，然后与(4×)样品缓冲液、HPLC水以1比1比2的比例进行混合。蛋白分子量标准品(BIO-RAD)上样3μl，试药上样后用BIO-RAD电泳仪150V电泳到溴酚蓝前沿接近分离胶底部3-5mm，取出胶，经考马斯亮蓝染色，然后在Bio-Rad ChemiDoc MP凝胶成像仪上进行扫描，通过已知的蛋白分子量标准品分析出样品的相对的分子量及非还原条带的百分比。

2.1.2 检测采用光阻法，试验操作环境以及所用到的微粒检查用水均符合中国药典的相关规定。在层流台上稀释样品，加入适量新制的微粒检查用水，使总体积不少于5mL。供检测6次样品，每个样品检测由不溶性微粒检测仪依次测定4次，每次取样1mL。第一次结果舍掉，取后续测定三次结果的平均值。

2.2 检测结果

2.2.1 非还原性SDS-PAGE：见图1。

表1 不溶性微粒检测指标

图1

图中2、7泳道为标准对照，泳道3为A药加样量10ug，泳道4为A药加样量5ug；泳道5为B药加样量10ug，泳道6为B药加样量5ug。图中A药得到主要分子表达量约40KD的分子产物，条带的百分比占86. 5%，B药获得主要分子表达量约154KD的分子产物，条带百分比占63.6%。2.2.2 不溶性颗粒：B药不溶性颗粒的含量，≥10μm平均值426.7个/mL，而A药为0，两者间差异较为显著。但B药每瓶间颗粒含量差异较大，≥10μm的颗粒分别为45～675个/mL不等。我国药典对≥2μm，≤10μm的颗粒数量没有限量标准，本试验检测到的大于≥2μm，≤10μm的微粒，B药平均值25680个/ mL，A药2170.8个/mL。见表1。

3 讨 论

3.1 为了减少人为产生的检测误差，分别由两位研究员进行操作，一位研究员去除药品标签，改为编号A-01，A-02，A-03，A-04，A-05，A-06，B-01，B-02，B-03，B-04，B-05，B-06，另一位研究员进行实验室操作。

3.2 非还原性SDS-PAGE是检验药品纯度的指标，与药物杂质、成药性、及储存条件等因素相关。说明书中A药为分子量 48KD的单抗药物，B药为分子量143KD的融合片段。本研究结果中对应主要分子表达量的成分比例的差异，与药物的分子量大小、药物的糖基化水平都有关关。图谱中B药有一个明显的拖尾带，拖尾带比例较高可能与药物结构的稳定性有关，从而造成分子在检测过程中更多的解离，这对药品临床疗效、活性、稳定性是否有影响，还需要更多的相关临床研究验证。

3.3 我国2015版药典，在保障药品安全、药品质量控制方法、技术等方面广泛吸取国内外先进技术和实验方法，但是还存在一些差距。如USP中除了对注射剂中不溶性微粒有明确的限制外，对眼用制剂中不溶性微粒也有明确的限制规定，而我国眼用制剂不溶性微粒的标准只是参照静脉注射剂的标准。

表2 药典不溶微粒对比

3.4 不溶性微粒是药品临床应用安全性指标，也是药品生产的质控指标之一，因为其作为一种可流动的无法被循环代谢的外源性物质，进入人体后可通过刺激血管内壁，引起静脉血管光滑度改变，导致血小板黏附，从而引起静脉炎；较大的微粒可直接造成局部循环障碍，引起血管栓塞或导致肉芽肿；微粒引起的肉芽肿脱落后随血运行，也可引起血管栓塞，导致血管堵塞、供血不足、血栓、局部组织坏死等疾病[3]。

3.5 眼部制剂作为一种特殊的局部使用药物制剂，由于其自身的生理解剖特性，对微粒的耐受性可能更差。曾有报道随着皮质类固醇局部注射剂在眼科日益普及，由此治疗导致的严重眼部并发症(如视网膜中央动脉闭塞)事件也呈上升趋势，分析认为主要与皮质类固醇颗粒堵塞视网膜中央动脉有关。

[1] Xu，L，et al(2013).Pharmacokinetics of Ranibizumab in Patients with Neovascular Age-Related Macular Degeneration：A Population Approach[J].Investigative Ophthalmology＆Visual Science，54(3)：1616～1624.

[2] Li，X，et al(2014).Safety and Efficacy of Conbercept in Neovascular Age-Related Macular Degeneration：Results from a 12-Month Randomized Phase 2 Study[J].AURORA Study."Ophthalmology.

[3] 韩敏，张爱琴.不溶性微粒分析在临床注射剂质量控制中的应用[J].中国药学杂志，2006，41(24)：1917～1918.

A【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2017.01.057

1006-6233(2017)01-0167-03

吉林省自然科学基金，(编号：20160101199JC)

徐丽君