止痛祛风汤对急性痛风性关节炎大鼠血清IL—6、IL—8的影响

庞学丰++王思超　蒙宇华　李玉玲　刘欢　吴燕红　黄海燕　冯玉青　唐丽萍　廖键侥　舒建龙　刘莎莎　杜永怡　林菊

【摘 要】目的：观察止痛祛风汤对急性痛风性关节炎大鼠血清白细胞介素（IL）-6、IL-8的影响。方法：将60只健康雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组，模型对照组，秋水仙碱组，止痛祛风汤高、中、低剂量组，每组10只。空白对照组大鼠不限制饮水，自由进食；模型对照组大鼠给予生理盐水0.135 mg·kg-1进行灌胃；秋水仙碱组大鼠给予秋水仙碱溶液0.135 mg·kg-1进行灌胃；止痛祛风汤高、中、低剂量组大鼠分别给予止痛祛风汤31.25 g·（100 g）-1、15 g·（100 g）-1、7.5 g·（100 g）-1进行灌胃。于第7天给药后30 min，除空白对照组外，其余各组大鼠采用注射尿酸钠方式诱导急性痛风性关节炎大鼠模型，分别检测各组大鼠血清IL-6、IL-8水平的变化情况。结果：止痛祛风汤高、中剂量组以及秋水仙碱组大鼠血清中的IL-6、IL-8含量均明显降低，3组分别与模型对照组进行比较，差异均有统计学意义（P < 0.05）；止痛祛风汤高、中剂量组与秋水仙碱组比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。结论：止痛祛风汤能通过降低IL-6、IL-8的水平而达到治疗痛风性关节炎的作用。

【关键词】 急性痛风性关节炎；止痛祛风汤；IL-6；IL-8；大鼠

Effect of Zhitong Qufeng Tang（止痛祛风汤）on IL-6 and IL-8 in Serum of Rats with Acute Gouty Arthritis

PANG Xue-feng，WANG Si-chao，MENG Yu-hua，LI Yu-ling，LIU Huan，WU Yan-hong，HUANG Hai-yan，

FENG Yu-qing，TANG Li-ping，LIAO Jian-jiao，SHU Jian-long，LIU Sha-sha，DU Yong-yi，LIN Ju

【ABSTRACT】Objective：To observe the effect of Zhitong Qufeng Tang（止痛祛风汤）on IL-6 and IL-8 in serum of rats with acute gouty arthritis.Methods：Sixty healthy male Wistar rats were randomly divided into a blank control group，a model control group，a colchicine group，and high moderate and low dose groups of Zhitong Qufeng Tang（H，M and L groups），10 rats in each group.The rats in the blank control group are allowed to drink and eat freely.The rats in the model control group were given 0.135 mg·kg-1 of normal saline by gavage.The rats in the colchicine group were given intragastric administration of 0.135 mg·kg-1 of colchicine solution.The H，M and L groups were respectively given intragastric administration of 31.25 g·（100 g）-1，15 g·（100 g）-1 and

7.5 g·（100 g）-1 of Zhitong Qufeng Tang.Thirty minutes after administration in the third day，rats in all the groups but the blank control group were induced by injecting sodium urate to establish modes with acute gouty arthritis.The changes of IL-6 and IL-8 levels in rats serum were detected respectively.Results：The levels of IL-6 and IL-8 in rats of the colchicine group and the H and M groups were significantly decreased.The differences between the H，M groups and the model control group were statistically significant（P < 0.05）.The differences between the H，M groups and the colchicine group were not statistically significant（P > 0.05）.Conclusion：Zhitong Qufeng Tang can treat gouty arthritis by reducing the levels of IL-6 and IL-8.

【Keywords】 acute gouty arthritis；

Zhitong Qufeng Tang（止痛祛風汤）；IL-6；

IL-8；rats

痛风是遗传性和（或）获得性引起的嘌呤代谢障碍和（或）尿酸排泄减少所导致的一组疾病，是临床常见疾病之一，目前发病日益增多，本病最常见的表现形式为痛风性关节炎急性发作。研究资料表明，白细胞介素（IL）-6、IL-8在痛风性关节炎的发病中起到了重要的作用。本研究拟通过动物实验，研究探讨止痛祛风汤对大鼠血清IL-6、IL-8水平的影响。

1 实验材料

1.1 实验动物 清洁级健康雄性Wistar大鼠60只，体质量（200±20）g，购于广西中医药大学实验动物中心，动物合格证号：桂医动字第11005号。

1.2 实验试剂 IL-6、IL-8检测试剂盒（南京建成生物工程研究所）；实验用尿酸钠晶体（北京化学试剂公司）。

1.3 实验药物 本实验选择秋水仙碱片（云南昊邦制药有限公司，国药准字H53021798）作为对照药物；止痛祛风汤则由本院新药研发中心按药物剂量和比例进行制备提供；实验时将2500 mg尿酸钠晶体加入到100 mL生理盐水中，不断进行加温搅拌，最后制成质量分数为25 mg·mL-1的尿酸钠溶液，供实验中造模时使用。

2 方 法

2.1 动物造模及分组给药 60只大鼠均进行适应性饲养1周（置入鼠笼中），观察大鼠无异常后，再随机分为空白对照组，模型对照组，秋水仙碱组，止痛祛风汤高、中、低剂量组，每组10只。空白对照组大鼠不限制饮水，自由进食；模型对照组大鼠给予生理盐水0.135 mg·kg-1进行灌胃；秋水仙碱组大鼠给予秋水仙碱溶液0.135 mg·kg-1进行灌胃；止痛祛风汤高、中、低剂量组大鼠分别给予止痛祛风汤31.25 g·（100 g）-1、15 g·（100 g）-1、7.5 g·（100 g）-1进行灌胃。每日1次，连续7 d。于第7天给药后30 min，将空白对照组之外的其余各组大鼠按照国外Coderre方法[1]进行造模：在大鼠右后足踝关节背侧，采用6号注射针头向右踝关节腔内注入0.2 mL的尿酸钠溶液，制备急性痛风性关节炎的大鼠模型（实验过程中所有大鼠造模均成功，无大鼠死亡）。

2.2 IL-6、IL-8的检测 除空白对照组外，其余各组大鼠继续给药，3 d后采用腹腔注射水合氯醛对全部大鼠进行麻醉，然后用5 mL注射器从腹主动脉处取血，采用EDTA抗凝，置于4 ℃ 2000 r·min-1

离心机离心10 min，取上清液置于-20 ℃冰箱保存待测。最后采用双抗体夹心ABC-ELISA法对各组大鼠血清IL-6、IL-8的含量进行检测，具体步骤和方法则按照检测试剂盒说明书进行。

2.3 统计学方法 采用SPSS 18.0软件进行统计分析。计量资料以表示，采用方差分析及t检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。

3 结 果

模型对照组大鼠血清IL-6、IL-8含量均显著高于空白对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。止痛祛风汤高、中剂量组以及秋水仙碱组大鼠血清IL-6、IL-8含量均明显降低，3组分别与模型对照组进行比较，差异均有统计学意义（P < 0.05）；止痛祛风汤高、中剂量组与秋水仙碱组比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。见表1。

4 讨 论

痛风性关节炎的急性发作主要是由于体内的尿酸盐沉积于关节部位而引起，常常突然发作。研究发现，由于关节局部温度突然降低、血尿酸水平突然升高以及原有的尿酸结晶脱落等原因，导致大量尿酸盐结晶进入关节腔，被白细胞吞噬后，促使趋化因子、激肽等很多物质不断被释放出来，进而引起局部的各种炎症反应，释放出多种不同的细胞因子，如白细胞介素（IL-1、IL-6、IL-8）和肿瘤坏死因子（TNF）等，促使炎症范围不断扩大，溶解并侵蚀其组织，从而出现红肿热痛等典型的临床症状[2]。

既往研究发现，在痛风性关节炎中，由于尿酸钠晶体刺激产生大量的炎性细胞浸润，导致关节出现明显红肿、剧烈疼痛以及功能障碍[3]。同时研究还发现，痛风的病理过程中存在趋化因子IL-8和其他单核因子及淋巴因子不同程度的参与[3-4]。Liu等[5]研究亦表明，采用尿酸盐晶体注射诱导小鼠痛风模型后，发现分离于新鲜血的单核细胞在尿酸盐晶体的刺激下，IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1β等炎性细胞因子的分泌均有明显增加。这些研究结果均提示IL-6和IL-8在痛风性关节炎的发病中起到了非常重要的促进作用。

目前，痛风性关节炎急性期主要使用抗炎镇痛类药物进行止痛对症治疗，以及运用药物抑制尿酸生成或促进尿酸排泄；但长期服用此类药物可产生肝肾系统以及胃肠道损害，患者难以坚持服用，至今尚无特效的根治药物。中医学将痛风性关节炎归属于“痹病”“历节风”等范畴，认为是因饮食失调，恣食膏粱厚腻，酿生湿热，痹阻于关节肌肉导致，因此清熱利湿止痛是急性期的首选疗法。目前国内对中药治疗本病的研究不少，也取得了一定的效果，但对痛风性关节炎中IL-6、IL-8影响的研究报道尚不多。王晓璐等[6]研究发现，五藤痛风饮能明显下调大鼠痛风性关节炎模型关节液中IL-8、TNF-α的水平而起到抗炎作用，是其治疗痛风性关节炎的作用机制之一。谢人明等[7]研究发现，强筋健骨胶囊治疗痛风性关节炎急性发作期的机制是通过显著降低血清中IL-6、TNF-α、IL-1β及基质金属蛋白酶-3的水平而实现的。

止痛祛风汤是课题负责人多年研究痛风性关节炎诊治而总结出的有效方药，由白虎加桂枝汤合芍药甘草汤化裁而成，具有祛风除湿、清热通络止痛之功效。白虎加桂枝汤最早见于《金匮要略》，此方具有清热通络、调和营卫的作用，是疗效确切的治疗痹病的经典方；而芍药甘草汤则具有缓急止痛的作用。现代药理研究发现，止痛祛风汤中的白芍具有抗炎、镇痛、解痉、解热作用，并且与桂枝配伍具有协同作用；忍冬藤、葛根、萆薢可以降低血脂；桂枝具有解热、镇痛的功效；甘草具有抗炎、镇痛等作用；山慈菇则因含有秋水仙碱等成分而发挥止痛、降血尿酸作用[8]。临床研究发现，止痛祛风汤能较快缓解患者的关节肿胀、疼痛等临床症状，较好降低患者的血尿酸、C-反应蛋白水平，表明其具有消肿止痛好、副作用小等优点[9]。笔者前期已经完成的动物实验结果表明，其能明显抑制急性痛风性关节炎大鼠踝关节肿胀度，能显著降低血清中TNF-α、IL-1β水平[10]。

本研究结果提示，止痛祛风汤治疗痛风性关节炎是通过降低急性痛风性关节炎大鼠血清中IL-6、IL-8水平实现的。

5 参考文献

[1] CoderreTJ，Wall PD.Ankle joint urate arthritis（AJUA）in rat：an alternative animal model of arthritis to that produced by Freund's adjuvant[J].Pain，1987，28（3）：379-393.

[2] McCarty DJ.Crystal and arthritis[J].Dis Mon，1994，40（6）：255-299.

[3] Pascual E，Pedraz T.Gout[J].Curr Opin Rheumatol，2004，16（3）：282-286.

[4] Weinberger A，Pinkhas J.A hypothesis on the possible role of interferon in the initiation of acute gouty arthritis attack[J].Med Hypotheses，1980，6（8）：781-784.

[5] Liu R，O'Connell M，Johnson K，et al.Extracellular signal-regulated kinase 1/extracellular signal-regulated kinase 2 mitogen-activated protein kinase signaling andactivation of activator protein 1 and nuclear factor κB transcription factors play central roles in interleukin-8 expression stimulated by monosodium urate monohydrate and calcium pyrophosphate crystals in monocytic cells[J].Arthritis Rheum，2000，43（5）：1145-1155.

[6] 王曉璐，徐静，李慧，等.五藤痛风饮对大鼠急性痛风性关节炎模型的IL-8、TNF-α的影响[J].中国现代药物应用，2013，7（13）：6-7.

[7] 谢人明，范引科，张红，等.强筋健骨胶囊对急性痛风模型炎症因子的影响[J].西北药学杂志，2013，28（2）：165-167.

[8] 雷载权，张廷模.中华临床中药学[M].北京：人民卫生出版社，1998：490.

[9] 庞学丰.自拟止痛祛风汤治疗痛风性关节炎疗效观察[J].广西中医药，2006，29（6）：7-8.

[10] 庞学丰，唐丽萍，冯玉青，等.止痛祛风汤对大鼠急性痛风性关节炎影响的实验研究[J].风湿病与关节炎，2012，1（3）：50-52.

收稿日期：2016-12-22；修回日期：2017-02-23