桃果实中多菌灵残留量的高效液相色谱-串联质谱结合QuEchERS检测方法

李晓辉，程 卫

（河北省林果桑花质量监督检验管理中心，河北 石家庄 050081）

桃果实中多菌灵残留量的高效液相色谱-串联质谱结合QuEchERS检测方法

李晓辉，程 卫

（河北省林果桑花质量监督检验管理中心，河北 石家庄 050081）

为分析桃果实中多菌灵残留量，采用QuEchERS方法对样品进行前处理，建立了快速检测桃果实中多菌灵残留量的高效液相-串联质谱法。样品经乙腈提取、QuEchERS方法脱水盐析和萃取净化，采用Inertsil ODS-2（5mm，150mm×2.1mm）色谱柱进行分离，梯度洗脱，在多反应检测模式下测定。经方法学验证，在添加不同浓度的标准溶液时，多菌灵残留量的平均回收率为89.5%～94.4%，RSD为1.95%。该方法简单、快速，准确度高，能够满足多菌灵残留分析的要求。

桃果实；多菌灵残留量；QuEchERS

桃果实味道鲜美，营养丰富，是人们最喜爱的鲜果之一。我国的桃产量位居世界第一位，但桃的出口额仅占世界出口额的1.38%，出口贸易不容乐观，最主要的原因是部分农残超标[1]。苯并咪唑类药物作为广谱性内吸杀菌剂被广泛用于水果生产，而多菌灵是苯并咪唑类农药的主要种类之一[2]，因此桃病害的防治会使用大量的多菌灵。由于多菌灵化学性质稳定，在自然环境中降解较慢，并对人体有一定的毒性[3-4]，因此，农产品中多菌灵残留量的测定越来越受到重视[5]。目前，国内外多为关于多菌灵在苹果、柑桔、油菜等果蔬上残留的研究，而对于桃果实上多菌灵残留的研究则鲜有报道。

高效液相色谱-串联质谱技术具有检测灵敏度高、选择性好、适用范围广等优点而广泛应用于农药残留分析中。QuEchERS方法具有快速、简单、便宜、有效、可靠和安全等优势，因此本研究利用高效液相色谱-串联质谱结合QuEchERS方法对桃果实中的多菌灵残留量进行测定，旨在为更好地研究桃果实中多菌灵的残留水平提供检测依据。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

液相色谱串联质谱联用仪（Thermo Uitimate 3000）、食品加工机、电子天平（PL4002）、高速冷冻离心机（SiGMA 3k30）、漩涡振荡器（IKA MS 3）；多菌灵标准品（纯度＞99%）、乙腈（色谱纯）、甲酸（分析纯）。

1.2 QuEchERS前处理方法

取不少于1000g样品，去核，将可食部分切碎，充分混匀放入食品加工机粉碎，制成待测样，装入容器中备用。参照QuEchERS方法，取约10g均质好的样品转移到50mL离心管中，加入20mL乙腈，漩涡振荡1min，添加提取盐试剂包，剧烈振荡1min，离心（5000r/min，8min），取 10mL 上清液转移到SPE净化管中，剧烈振荡30s，离心，上清液用0.22μm微孔滤膜过滤后待测。

1.3 分析检测条件

1.3.1 色谱条件

色谱柱为 Inertsil ODS-2（5μm，150mm×2.1mm）柱，柱温20℃；流动相 A：0.1%甲酸；流动相 B：乙腈；流动相梯度洗脱方法见表1；流速0.3mL/min；进样量10μL；梯度洗脱时间6min；外标法定量。

表1 多菌灵HPLC-MS/MS分析的洗脱方法

1.3.2 质谱条件

离子源：带有喷射流技术的电喷雾电离源；扫描方式：正离子模式；鞘气温度：270℃；鞘气流速：10L/min；喷嘴电压：3.50kV；雾化气：氮气；雾化气压力：35psi；检测方式：多反应监测（MRM）模式。

1.4 标准品溶液的配制

将多菌灵标准品（100μg/mL）用乙腈稀释并定容到100mL容量瓶中，配制成1μg/mL的标准储备溶液，然后用乙腈稀释得到0.1μg/mL的标准使用溶液，并贮藏于4℃冰箱中备用。

2 结果与分析

2.1 前处理方法的选择

传统的样品前处理技术经历了液固萃取、液液萃取、固相萃取、固相微萃取、基质固相分散萃取几个阶段[6-7]。有研究分析发现检测分析的误差约50%来源于样品的准备和处理，而真正来源于分析的还不到30%，而且大部分前处理所占用的工作量超过整个分析的70%[8]。而QuEchERS方法灵敏、简便、快速、高效的独特优势正可以弥补这些不足。有实验认为QuEchERS方法处理步骤简单、易于操作，样品经乙腈提取后的提取液无需浓缩直接采用净化剂净化后上机即可，此方法更合适果蔬中农药残留分析[9]。同时，此方法中使用的PSA净化剂具有弱的阴离子交换能力，有利于吸附水果样品基质中的有机酸、糖以及色素。总之，与传统样品前处理技术相比，QuEchERS方法较大程度地解决了传统方法所需时间长、有毒溶剂使用量大、共存物易干扰定性和定量等问题。因此，本实验采用QuEchERS方法对桃果实样品进行前处理。图1为多菌灵标准品的色谱图，图2为桃果实基质中多菌灵含量的色谱图。

图1 多菌灵标准品的色谱

图2 桃果实基质中多菌灵含量的色谱

2.2 提取溶剂的选择

检测食品基质中多组分农药残留时，提取剂的选择非常重要。QuEchERS方法常用的提取溶剂有乙腈、甲醇、乙酸乙酯、酸化甲醇及酸化乙腈，其中，最常用的提取溶剂为乙腈。有研究发现，用不同的试剂对添加农药标样的苹果样品进行提取，结果发现乙腈和甲醇的提取回收率较高，同时，通过盐析作用，乙腈较甲醇更有利于提取的分层，可以满足实验要求[10]。另外，乙腈对农药的极性要求不高，可在较宽泛的pH值范围内获得较高的回收率，且对于非极性物质及极性较大的化合物溶解地较少，如脂肪、蛋白质、盐类、糖等[11]，因此本实验选择乙腈为提取溶剂。

2.3 QuEchERS方法的回收率、精密度计算

准确称取4份等质量的样品于离心管中，其中1份不添加多菌灵标准溶液，另外3份分别添加不同水平的标准溶液进行加标回收实验，样品处理方法同1.2，每个样品平行测定2次，计算回收率。结果表明：桃果实中多菌灵的平均回收率为87.5%～93.0%（见表 2）。

表2 桃果实基质中多菌灵残留量的回收率

在对中间浓度的加标样品连续进样7次的试验中，通过对比峰面积计算多菌灵组分的RSD为1.95%，表明该方法精密度良好。

3 结论

本研究采用改进的QuEchERS方法建立了高效液相色谱-串联质谱法检测桃果实中的多菌灵残留量，此方法精密度好，灵敏度高，能够很好地满足农药残留分析的要求。与传统的检测方法相比，QuEchERS方法中的样品经乙腈提取后直接脱水盐析和萃取净化，无需浓缩处理。此方法简单、快速、低成本、准确，仅需6min即可完成样品的检测，适合大批量快速准确和定量检测桃果实样品中多菌灵的含量，可为果蔬中多菌灵的残留检测提供参考，有较高的应用推广价值。

［1］杨静，刘丽娟，李想.我国桃和油桃生产与进出口贸易现状及其展望［J］.农业贸易展望，2011（3）：48-52.

［2］LIU Qian-kai，ZHU Nian-guo.The new editor of pesticides guidelines［M］.Shanghai：Shanghai Scientific and Technical Publishers，1999：309.

［3］LIN Yu.Total application of pesticides［M］.Beijing：Agriculture Press，1989：140.

［4］化工部农药信息站，化工部原化肥司，化工部合成材料研究院.化工产品手册：农用化学品［M］.北京：化学工业出版社，1996：227-281.

［5］郭瑞刚，范崇辉，赵政阳，等.HPLC法对苹果中多菌灵及其消解动态的测定［J］.中国农学通报，2006，22（9）：63-65.

［6］朱俊杰，陆利霞，熊晓辉.食品中农残检测及预处理新技术进展［J］.食品研究与开发，2008，29（2）：129-132.

［7］张淑霞，巩卫东，孙亚真，等.食品中农药残留检测样品前处理的研究［J］.粮油加工，2010（7）：78-81.

［8］邵华，金芬，杨锚，等.QuEchERS方法在我国农药残留分析中的应用与前景［J］.质量监督与检验，2007：120-122.

［9］李海飞，聂继云，李静，等.QuEchERS方法联合高效液相色谱法测定水果中5种农药残留研究［J］.中国果树，2015（4），58-60.

［10］陈莹，丛佩华，聂继云，等.分散固相萃取-高效液相色谱法测定水果中多菌灵和噻菌灵［J］.果树学报，2008，25（5）：769-773.

［11］LEHOTAY S J，MASTOWSKÁ K，YUN S J.Evluation of two fast and easy methods for pesticide tesidue analysis fatty food matrixes［J］.Journal of Aoac International，2005，88（2）：630-638.

Determination of Carbendazim Residues in Peach Fruit by High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry Combined with QuEchERS

LI Xiao-hui，CHENG Wei
（Hebei Provincial Center for Quality Supervision and Test of Forestry Fruit，Mulberry and Flower，Shijiazhuang，Hebei 050081）

In order to analyze the carbendazim residue in peach fruit，a high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry method combined with QuEchERS for sample pretreatment was established.Carbendazim residue was extracted from the peach sample by acetonitrile，dehydrated、salted out and cleaned up by QuEchERS method and then analyzed by HPLC-MS-MS in multiple reaction monitoring（MRM） mode.The separation was performed on Inertsil ODS-2（5mm，150mm×2.1mm）by the gradient elution.The results showed that the average recovery rate was 89.5%～94.4%and RSD was 1.95%.This method was simple，rapid，high accuracy，which could meet the requirements of carbendazim residue analysis.

Peach Fruit；Carbendazim Residues；QuEchERS

TS272.7

A

1002-3356（2017）03-0018-03

2017-06-13

李晓辉（1982-），男，学士，助理工程师，主要从事果品质量安全检测工作。