miR-16在早产儿呼吸窘迫综合征患儿血清中表达水平的研究

朱天一 许云仙 金蕊 陈筱青 胡毓华

早产儿出生之后, 很容易患上呼吸窘迫综合征［1］, 主要症状有呼吸急促、呻吟、发绀等, 一旦出现这样的问题就需要及早进行治疗, 否则很容易导致早产儿呼吸衰竭死亡［2］。即使是存活下来的早产儿, 也很容易留下一系列的后遗症,比如说, 由于吸入了大量的高体积分数氧最终导致支气管的发育不良, 这些后遗症会大大降低早产儿的生存和生活质量,同时也给早产儿的家庭带来承重的经济和精神负担。micro RNAs是一种新发现的单链小分子RNA, 这种RNA具有很强的调节活性, 同时micro RNAs还能与其他的分子共同组成一种新的沉默复合体, 这一沉默复合体也受到RNA的诱导。另外, 沉默复合体还与mRNA 的 3’端非编码区相互影响, 并在最终的相互作用下能够抑制翻译过程的进行, 或者是实现对mRNA的降解, 进而调节蛋白质的表达结果, 最终对细胞的活动过程进行调控, 也就是对病理的生理过程进行调控。在炎症的调控中, micro RNAs发挥了重要的作用, 这也为分析早产儿呼吸窘迫综合征的发病机制探讨提供了新的思路。如前所述, 早产儿呼吸窘迫综合征具有发病急、病情恶化快和死亡率高的特征, 因此在临床治疗过程中, 需要对该病症进行及时的诊断, 然而现有的临床和实验都缺乏早产儿呼吸窘迫综合征的早期诊断指标, 鉴于此, 本研究通过PCR检测方法来测量炎症因子miR-16在呼吸窘迫综合征早产儿血清中的表达情况, 旨在为呼吸窘迫综合征的治疗提供参考。现报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选择2016年1月~2018年2月于本院出生的60例早产儿作为研究对象, 根据是否合并呼吸窘迫综合征分为RDS组(合并呼吸窘迫综合征)和对照组(未合并呼吸窘迫综合征), 每组30例。

1. 2 方法 以欧洲共识指南为依据, 对所有早产儿进行处理, 具体的包括给予肺磷脂注射、机械通气等。两组早产儿均采用PCR检测方法测定血清中的miR-16表达水平, 在血清miR-16表达的检测过程中, 首选要提取每一个标本的RNA, 并检测标本RNA的吸光度值, 计算标本总RNA的纯度和质量。然后将RNA转录为cDNA, 并在温度为82℃的条件下进行荧光信号的采集, 运用PCR自带软件分析溶解曲线。并将上述过程重复3次。

1. 3 观察指标 分析PCR检测血浆miR-16水平的可行性,比较两组早产儿血浆miR-16表达水平。

1. 4 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件对研究数据进行统计分析。计量资料以均数 ± 标准差(±s)表示, 采用t检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1 PCR检测血浆miR-16水平的可行性分析 将样本RNA进行转录之后, 需要运用PCR方法进行miR-16表达水平的检测。最终的溶解曲线为单峰, 且PCR的产物是单一条带, 没有进行转录的RNA和对照组都没有出现增产物, 这一结果表示可以运用RT-PCR进行miR-16表达水平的检测。为了进一步分析血清中miR-16的表达水平, 需要对miR-16进行合成, 并构建相应的标准曲线, 最终所得的Ct值在现行检测范围之内。

2. 2 两组早产儿血浆miR-16表达水平比较 RDS组早产儿miR-16表达水平为(18.59±0.66), 对照组早产儿的miR-16表达水平为(19.10±0.85), RDS组早产儿miR-16表达水平低于对照组, 差异具有统计学意义(t=2.596, P＜0.05)。

3 讨论

早产儿呼吸窘迫综合征发生的主要原因包括：早产儿的肺发育不成熟和肺表面活性剂合成不足, 呼吸窘迫综合征大大提高了早产儿的死亡率［3］。在炎症的调控中, microRNAs发挥了重要的作用, 这也为分析早产儿呼吸窘迫综合征的发病机制探讨提供了新的思路。本研究通过PCR检测方法来测量炎症因子miR-16在呼吸窘迫综合征早产儿血清中的表达水平, 旨在为呼吸窘迫综合征的治疗提供参考。本研究运用RT-PCR进行miR-16表达水平的检测, 首选要提取每一个标本的RNA, 然后将RNA转录为cDNA, 最后运用PCR自带软件分析溶解曲线。最终的研究结果显示溶解曲线为单峰,且PCR的产物是单一条带, 这一结果表示可以运用RT-PCR进行miR-16表达水平的检测。

在肿瘤的治疗过程中, miR-16是一种十分重要的抑制剂, 比如说在乳腺癌和淋巴癌中miR-16的表达水平都出现下降的情况［4］。本研究通过运用RT-PCR的方法检测呼吸窘迫综合征早产儿血浆中的miR-16表达水平, 结果显示RDS组早产儿miR-16表达水平低于对照组, 差异具有统计学意义(t=2.596, P＜0.05) , 并且下降程度与疾病的活动度存在显著相关。分析早产儿呼吸窘迫综合征的发病机制可知, 细胞的过渡活化是主要原因之一, 而临床上对早产儿呼吸窘迫综合征的治疗方法主要包括抑制B细胞的增殖和促进细胞的凋亡［5］。通过本研究结果可以推测, miR-16表达水平的降低可能会降低细胞增殖的抑制作用, 进而加快了早产儿呼吸窘迫综合征的发病速度。

综上所述, 通过分析miR-16的表达水平能够分析早产儿呼吸窘迫综合征的发病情况, 可以将miR-16看作是早产儿呼吸窘迫综合征的一种标志物。