液相色谱-串联质谱法测定饲料中金霉素、土霉素方法的探讨

2018-02-26 13:31周平郑强胡深谈暠媛王峻
湖北畜牧兽医 2018年12期
关键词:串联质谱法液相色谱测定

周平 郑强 胡深 谈暠媛 王峻

摘要:探讨了利用QuEChFRS净化柱快速处理饲料样品,采用液相色谱-串联质谱仪准确测定猪浓缩饲料、精料补充料、预混合饲料等不同饲料样品中金霉素、土霉素含量的可行性,结果表明:该方法试验结果的相对平均偏差在2.09%~3.74%,回收率在71.5%~83.7%,说明该方法准确度高、重复性好,可用于饲料中金霉素、土霉素含量的测定。

关键词:液相色谱—串联质谱法;饲料;金霉素;土霉素;测定

中图分类号:S859.796;TQ465.4       文献标识码:A        文章编号:1007-273X(2018)12-0007-02

金霉素、土霉素均为四环素类抗生素药,对革兰氏阳性菌和阴性菌均有抑制作用,是一种高效广谱抗生素,普遍用于动物各种传染性疾病的治疗,是常用的生产和临床用抗生素药物,也具有良好的促进动物生长的作用,常应用于饲料添加,但长期使用会产生耐药性和药物残留[1]。为规范饲料中金霉素、土霉素的使用,2005、2008年我国分别颁布了饲料中金霉素、土霉素的高效液相色谱法测定标准[2,3],部分地区也相继颁布了地方标准来规范金霉素、土霉素等抗生素的使用,同时也在逐步优化测定方法[4,5]。目前,金霉素、土霉素的检测方法主要有高效液相色谱法[2,3]、液相色谱-串联质谱测定法[4]、紫外分光光度法[6]等。本试验对液相色谱-串联质谱法测定饲料中金霉素、土霉素的含量进行了研究,旨在为生产实际中相关检测提供参考。

1  材料与方法

1.1  仪器设备

QTRAP4500液质联用仪(美国Sciex);AE-200型電子天平; QuEChFRS净化柱;离心机。

1.2  试剂

试验用水为双重蒸馏水;金霉素、土霉素标准物质(纯度≥95%):德国DR公司;甲醇、乙腈、甲酸为色谱纯;柠檬酸、磷酸氢二钠、乙二胺四乙酸二钠、氨水为分析纯。

Na2EDTA-Mcllvaine缓冲液(0.1 mol/L):称取11.8 g柠檬酸-水合物,13.72 g磷酸氢二钠二水合物,33.62 g EDTA-2Na溶解于1 L水中,溶解摇匀后用氢氧化钠和盐酸调节pH至4.5。

甲酸水0.1%。

复溶液:甲酸水∶乙腈(90∶10,体积比)。

1 mg/ml的标准储备液:准确称取适量的金霉素、土霉素标准物质分别用甲醇配成1 mg/mL的标准储备液(-18 ℃保存)。

1.3  方法

1.3.1  样品前期处理  准确称取5 g样品于100 mL容量瓶中,加入60~70 mL Na2EDTA-Mcllvaine混匀,超声20 min,用Na2EDTA-Mcllvaine定容至100 mL备用。

取5 mL超声后的溶液于QuEChFRS净化柱中,混匀,5 000 r/min离心10 min,取中间层清液2 mL,40 ℃氮气吹干,加入1 mL复溶液复溶,过0.2 μm膜后供液相色谱-串联质谱仪测定。

1.3.2  最佳仪器条件的选择  对仪器进行调试和调整,确定最佳的仪器测定参数。

液相色谱条件:色谱柱,C18柱,150 mm×3.0 μm;粒径3.0 μm;柱温,33 ℃;进样量,20 μL。

质谱条件:离子源,电喷雾离子源;扫描方式,正离子扫描模式;检测方式,多反应监测;电喷雾电压、碰撞电压等条件优化至最佳。

1.3.3  液相色谱-串联质谱测定  用金霉素、土霉素基质混合标准工作溶液进样,用标准工作曲线对样品进行定量,样品溶液中金霉素、土霉素的响应值应在曲线范围内。

1.3.4  加标回收率试验  分别于空白样品中各加入5 μg的金霉素、土霉素标准使用液,利用“1.3.1”的前处理方式对样品进行处理,进行加标回收率的测定。

1.3.5  精密度试验

(1)平行性试验。将含有金霉素、土霉素的样品分别按照“1.3.1”的前处理方式对样品进行处理,每组3个平行,进行平行性试验。

(2)重现性试验。分别对样品进行连续3 d的测定,对此方法的稳定性进行检测。

2  结果与分析

2.1  线性范围和检出限结果

用标准储备液配制成0、10、20、50、100、200、500 ng/mL的浓度,以峰面积为纵坐标,标准工作溶液为横坐标绘制标准曲线,结果表明其线性关系较好(图1、图2、图3)。

2.2  样品加标回收率结果

由表1可见,样品加标回收率在71.5%~83.7%。表明该方法有较高的准确性。

2.3  精密度试验结果

由表2可见,3种样品本底测定值之间的相对平均偏差在2.09%~3.74%。由此可看出该种方法有较好的重复性。

对3种饲料进行连续3 d的试验结果见表3。由表3可见,其相对平均偏差在2.27%~3.23%,可看出该方法重现性良好,有较高的精密度。

3  结论

本试验利用QuEChFRS净化柱对猪的几种饲料进行处理,用液相色谱-串联质谱法测定饲料中金霉素、土霉素的含量,结果表明,该方法的重复性、平行性良好,精密度高、准确性好,回收率在71.5%~83.7%,试验前处理较为简单,便于大批量饲料样品中金霉素、土霉素含量的准确检测,可推广应用于饲料中金霉素、土霉素的监察测定等。

参考文献:

[1] 宋慧敏,耿士伟,冯三令,等.高效液相色谱法测定饲料中土霉素[J].中国农业科技导报,2008,10(S2):43-47.

[2] GB/T 19684—2005饲料中金霉素的测定 高效液相色谱法[S].

[3] GB/T 22259—2008饲料中土霉素的测定 高效液相色谱法[S].

[4] DB13/T 1384.2—2011河北省地方标准 饲料中土霉素、四环素、金霉素的测定[S].

[5] 李北罡,王  义.高效液相色谱法研究饲料金霉素中金霉素和四环素含量的分别测定[J].内蒙古石油化工,1999,25(4):48-50.

[6] 林红华,黄冬菊.用紫外分光光度法测定盐酸金霉素含量实验[J].福建畜牧兽医,2000,22(4):24-26.

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