东莞市汉族女性亚甲基四氢叶酸还原酶和甲硫氨酸合成酶还原酶的基因多态性分布

孙晓岩 韩临晓 陈博

近年来, 临床上加强了对基因多态性和同型半胱氨酸(Hcy)代谢、叶酸的研究, 但受研究方法与研究对象影响后,各研究结果均在不同程度上存在差异性［1,2］。本研究主要针对东莞市汉族女性MTHFR(hvlenetetrahvdrofolate reductase)和MTRR(methionine synthase reductas)的基因多态性分布特点进行探究, 以此为该地区心脑血管疾病与出生缺陷预防方案的制定提供依据, 报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选取2015年7月～2016年3月在东莞市第三人民医院进行备孕、孕前和孕期检查的汉族女性718例为研究对象, 平均年龄(30.02±1.59)岁。所有女性均自愿签署知情同意书, 且均接受了口腔黏膜细胞采样与遗传检验, 将DNA抽提不符合要求的女性排除。

1. 2 方法 所有受检者进行空腹抽取外周静脉血5 ml, DNA提取通过柱式抽提试剂盒进行抽提, 提取结束后并进行DNA浓度测定。MTRR A66G、MTHFR A1298C、MTHFR C677T的基因多态性采用Mass ARRAY技术进行SNP分型检测, 利用MASS ARRAY的引物设计平台设计PCR引物, 包括一对多重PCR扩增引物及一条MASS EXTEND延时引物。然后进行聚合酶链反应, 每个反应体系总体积为5 μl, 1 μl包含浓度为 20 ng/μl的 DNA模板 , 1.8 μl无酶水 , 0.5 μl 10× PCR buffer, 0.4 μl 25 μM MgC12, 0.1 μl 25 μM dNTP Mix, 1 μl 0.5 μM Primer Mix, 0.2 μl 5 U/μl PCR Enzyme。设定反应条件为：95℃2 min, 然后再完成20个循环的扩增(95℃30 s, 56℃ 30 s, 72℃1 min)与45个循环的扩增。结束整个反应过程之后得到的PCR产物经过树脂纯化后在Nanodispenser Spectro CHIP芯片上点样, 然后进行Mass ARRAY 分析, 每个检测点只需3～5 s,全自动分析, 通过TYPPER4.0软件分析实验结果。

1. 3 统计学方法 采用SPSS20.0统计学软件分析数据, 采用基因计数法计算基因频率, χ2检验法完成等位基因频率、基因型、Hardy-Weinberg遗传平衡检验, 相对风险采用95%可信区问(CI)表示, α=0.05为检验水准。

2 结果

2. 1 各地区基因型频率与频数对比 MTRR A66G、MTHFR A1298C、MTHFR C677T分别接受H-w遗传平衡检验之后,发现其均能和H-w平衡高度符合, 表示该样本能够有效代表本区域群体。本研究对东莞市汉族女性MTHFR、MTRR基因多态性分布情况与海南、德阳、郑州、潍坊等4个地方进行对比, MTRR A66G的基因型构成和海南对比差异有统计学意义(P＜0.05), 和德阳、郑州、潍坊对比差异无统计学意义(P＞0.05), 纯合突变基因GG频率低于海南(P＜0.05)；MTHFR A1298C基因型构成和海南、德阳对比, 差异无统计学意义(P＞0.05), 和郑州、潍坊对比差异有统计学意义(P＜0.05), 纯合突变基因型CC高于郑州、潍坊(P＜0.05)；东莞性MTHFR C677T基因型构成和海南地区对比, 差异无统计学意义(P＞0.05), 和德阳、郑州、潍坊对比差异有统计学意义(P＜0.05),纯合突变基因型TT频率高于德阳, 低于郑州、潍坊。见表1。

2. 2 各地区等位基因频率与频数对比 东莞市汉族女性MTHFR C677T突变等位基因频率和德阳对比, 差异无统计学意义(P＞0.05), 低于海南, 高于郑州、潍坊, 差异具有统计学意义(P＜0.05)；MTHFR A1298C突变等位基因频率和德阳、海南对比, 差异无统计学意义(P＞0.05), 高于潍坊、郑州, 差异具有统计学意义(P＜0.05)；MTRR A66G突变等位基因频率和德阳、郑州、潍坊对比, 差异无统计学意义(P＞0.05), 低于海南差异具有统计学意义(P＜0.05)。潍坊、郑州、德阳、东莞和海南地区的MTHFR C677T突变等位基因频率从北到南递减。见表2。

表1 各地区基因型频率与频数对比［n(%)］

表2 各地区等位基因频率与频数对比［n(%)］

3 讨论

妊娠期高血压综合征、复发性流产、先天性心脏病、唇腭裂、神经管缺陷等疾病发展过程中, 血浆Hcy均具有十分重要的作用［3］。受到营养因素与遗传因素的共同作用之后, 便会促使血浆Hcy水平在一定程度上升高。叶酸代谢中, MTRR与MTHFR属于两种关键酶, 编码酶活性、血浆Hcy浓度、血清和红细胞叶酸浓度均会受到MTRR A66G、MTHFR C677T和MTHFR A1298C的影响。本研究中, 潍坊、郑州、德阳、东莞和海南地区的MTHFR C677T突变等位基因频率从北到南递减, 可知对MTRR与MTHFR进行分子流行病学调查有利于我国深入化的研究出生缺陷病因学, 基因多态性地域分布差异在一定程度上反映了我国出生缺陷发病率南低北高情况。其次, 东莞市汉族女性具有自身独特的MTHFR和MTRR基因多态性分布特点, 为此, 制定健康干预方案时, 应该严格遵循“因人而异、因地制宜”的原则, 最大程度上对出生缺陷进行有效预防［4-6］。

综上所述, 东莞市汉族女性具有自身独特的MTHFR和MTRR基因多态性分布特点, 要根据该地区实际情况制定针对性的预防措施。