四氯乙烯消除乳糜对常规血清生化项目检测的影响

葛 熙

（南通市第一人民医院检验科，江苏226001）

由生理、病理以及临床治疗等多种原因引起的血清呈乳糜状,常出现在常规生化检测的标本中,是目前严重干扰自动生化分析仪检测的主要因素之一。乳糜血清一般是因血脂含量异常增高引起,以甘油三酯（TG）为主,约占90%,严重乳糜（TG＞15.0 mmol/L）血清标本占生化检测标本总数的1%～3%,其中约1/3引起的干扰超出自动分析仪的处理极限,导致实验室无法为临床提供可靠的测定结果,寻找一种能消除乳糜影响并确保检测结果准确可靠的方法尤为重要。以往报道曾推荐一些方法,主要有血清标本稀释法、低温高速离心法、乙醚等有机溶剂萃取法、PEG沉淀法、应用进口Lipoclear脂质清除剂等[1]。我们用生理盐水稀释标本进行测定,只有部分速率法测定能消除乳糜的影响；使用贝克曼1-16K小型台式高速冷冻离心机,12 000转/分钟离心5分钟,不能使乳糜血的脂质与血清明显分层；乙醚等有机溶剂萃取加上高速离心可以很好将血清与乳糜的分层,但乙醚萃取乳糜处于最上层,覆盖血清液面,致使吸取血清较困难[2]；进口Lipoclear脂质清除剂采购困难,成本较高；PEG沉淀法步骤较多,不适合临床常规使用。我们于2018年1月～6月通过试验,发现四氯乙烯（C2Cl4）能较好消除血清乳糜脂质,且对常规生化检测的影响符合临床要求,操作简便可作推广。

1 资料与方法

1.1 标本 选择当天我院体检、门诊或住院患者的标本,各血清标本量＞2 mL（可用符合要求的多人混合血清）,因甘油三脂含量高低不同外观呈多样,有清澈透明、微浑、浑浊但无明显溶血和黄疸。严重乳糜血清标本5例用作验证除脂效果；非乳糜正常血清标本40例用于判断四氯乙烯去脂处理前后常规生化项目测定结果的比对,判断处理后检测结果的可靠性。要求选取的血清生化指标有轻度增高,且标本的TG测定值在1.50～15.00 mmol/L范围内,自动生化分析仪能够几乎不受脂质的影响,测出其他生化项目的结果。

1.2 测定项目 常规生化项目包括速率法测定ALT、AST、ALP、GGT、LDH、CK、AMY、CHE、BUN,终点法测定 UA、GLU、TBIL、ALB、TP、Ca2+、Mg2+、P,离子选择电极法测定K+、Na+、Cl-,免疫透射比浊测定IgG、IgM、IgA、PA、ASO、RF、H-CRP、CYS-C 等

1.3 仪器 （1）日立7600-E20全自动生化分析仪；（2）SC-3616低速离心机、1-16K小型台式高速冷冻离心机；（3）VORTEX-6 振荡器。

1.4 试剂 所用试剂由日本和光纯药业株式会社、奥斯邦生物科技有限公司、日立（苏州）仪器株式会社、北京利德曼生物科技有限公司提供,校准品为各相应公司提供,质控血清为英国郎道产品。四氯乙烯由国药集团化学试剂有限公司提供,批号：20160727。

1.5 方法 取血清标本1.0 mL于2.5 mL的有盖离心管中,加入200 μL四氯乙烯试剂,盖紧,经VOR-TEX-6振荡器震荡混匀2 min,用1-16K小型台式高速冷冻离心机10 000 r/min高速离心6 min。使用加样枪吸取上层清亮血清600 μL于样品杯中,测定上述各项生化检测项目。

2 结 果

2.1严重乳糜血标本用四氯乙烯处理前后结果 5例严重乳糜血清标本由于存在过多脂质,对比色系统透光以及实际加样量造成影响,检测结果常出现异常,高低不定甚至超出仪器控制水平而无法检测,不能准确反映真实含量。四氯乙烯去脂处理后的血清明显澄清,各种常规生化项目均能较好的检测,见表1。

表1 5例严重乳糜血标本四氯乙烯处理前后检测结果

2.2 非乳糜正常血清标本用四氯乙烯去脂处理前后的结果相关性分析 非乳糜正常血清标本40例,血脂TG测定值在1.50～15.00 mmol/L,进行四氯乙烯去脂,血脂以外其他常规生化项目处理前后测定结果无明显差异,各类型不同测定方法的结果均有可比性,速率法如 ALT,Yˆ=0.9984X+0.0631,R2=0.9996；终点法如 TP,Yˆ=1.0064X+0.3912,R2=0.9991；离子选择电极法如 K+,Yˆ=0.9575X+0.1755,R2=0.9942；免疫透射比浊法如 IgG,Yˆ=1.0245X+0.2292,R2=0.9983。各项均R2＞0.975,回归方程可信度高,回归统计的斜率和截距可靠,说明四氯乙烯处理前后血清常规项目测定结果具有可比性,见表2。

表2 非乳糜正常血清标本40例四氯乙烯去脂处理前后的结果相关性分析

3 讨 论

四氯乙烯是一种不饱和卤代烃的有机溶剂,是用途较为广泛的不溶于水的非极性有机化合物,无色透明,气味似乙醚,但刺激性较弱,相对分子量较高（165.83）,对油脂具有极强的溶解能力,物理、化学性质稳定,常规状态下不与其他物质发生化学反应。主要用作有机溶剂、干洗剂、工业金属脱脂溶剂等[2]。同时也发现四氯乙烯去脂处理前后RF、H-CRP、IgA等免疫胶乳增强比浊测定项目的相关性较好,但偏差超过要求范围,原因有待进一步探讨。另外,由于测定例数少,不能充分佐证结论,特别是免疫透射比浊测定的一些项目,后期将进一步完善这些工作,做出更客观的评价。

通过试验,我们初步认为可利用四氯乙烯对油脂的极强溶解能力,物理、化学性质稳定,常规状态下不与其他物质发生化学反应的特性,且与水互不相容,不改变血清中的溶质分布, 作为一种血清乳糜的清除剂,通过与血清混匀、离心的简单操作,对血清中脂质进行去除,消除乳糜对常规生化检测的干扰,而且由于四氯乙烯分子量高,吸附脂质处在血清的下方,使去脂后澄清的血清处于分离管的上层,可被方便吸取[4-5]。从试验的结果看,无论是酶类速率法测定、化学显色终点法测定、免疫透射比浊、离子选择电极法测定等,处理后血清测定结果稳定可靠[6]。该处理乳糜血清方法操作简单、可操作性强,可在乳糜标本做临床生化项目检验时选择采用。