消肿片中枫香脂的鉴别与松香酸的检查

黄海燕，饶伟文，钟建理

（广西桂林市食品药品检验所，广西 桂林 541001）

消肿片收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂(第七册)》，由枫香脂、没药、当归、制草乌、地龙、乳香、马钱子、香墨和五灵脂9味中药组方，具有消肿拔毒功效，用于瘰疬痰核、流注、乳房肿块、阴疽肿毒等[1]。方中枫香脂、乳香、没药均为树脂类原料药，且枫香脂为君药，用量比较大。枫香脂质量参差不齐，市场掺杂、掺假现象严重，而乳香和没药为进口药材，来源有限，价格较贵，市场上常有伪劣品出现[2－3]。伪劣枫香脂、乳香、没药药材多为用松香掺假，含有松香酸，如误用于中成药生产中，将严重影响中成药的质量。本研究中采用高效液相－二极管阵列（HPLC－DAD）法检测5个厂家的5批消肿片样品，结果检出有松香酸的4批；同时，枫香脂薄层色谱（TLC）法鉴别试验发现，结果仅有1批检出枫香脂，其余4批未检出。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters 2695型高效液相色谱仪（分离单元－Waters 2998 PAD检测器，Waters公司）；XS205DU型电子分析天平（梅特勒 －托利多公司）；KQ－600E型超声仪（昆山市超声仪器有限公司）；CAMAG AUTOMATIC TLC SAMPLER4全自动点样仪，CAMAG TLC Visualizer薄层色谱照相仪，均购于CAMAG公司。

1.2 试药

松香酸对照品(批号为111938－201201)，枫香脂对照药材(批号为121637－201201)，均购于中国食品药品检定研究院；乙腈、甲酸为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为高纯水；硅胶GF254预制薄层板（青岛鼎康硅胶有限公司）；消肿片（市售品，5批）。

2 方法与结果

2.1 枫香脂TLC法鉴别

取本品2片，研细，加甲醇20 mL，超声处理20 min，滤过，滤液浓缩至2 mL，作为供试品溶液。按消肿片处方比例，制备不含枫香脂的阴性样品，同法制成阴性对照品溶液。另取枫香脂对照药材0.2 g，加甲醇10 mL，超声处理20 min，取上清液作为对照药材溶液。照TLC法试验，吸取上述3种溶液各1 μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚 (60～90℃)－乙酸乙酯－冰醋酸(9 ∶1 ∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254 nm)下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，表明阴性对照无干扰。详见图1。

图1 枫香脂薄层色谱图

2.2 松香酸含量测定

2.2.1 色谱条件

色谱柱：AgilentZORBAX SB－C18柱(250 mm×4.6mm，5 μm)；流动相：乙腈 －0.1% 甲酸溶液(82 ∶18)；检测波长：241 nm，DAD检测器采集 200～400 nm光谱图；柱温：35 ℃；流速：1.0 mL ／min。

2.2.2 溶液制备

取松香酸对照品约10 mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，精密量取1 mL置20 mL容量瓶中，加乙醇至刻度，制成每 1 mL含5 μg的对照品溶液。取本品研细，取约0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇20 mL，称定质量，超声处理20 min，放冷，称定质量，用乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，即得。

2.2.3 测定方法

精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，以色谱峰的保留时间及DAD的紫外吸收图谱进行定性鉴别。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱峰相应位置上不得出现相同的色谱峰，若出现保留时间相同的色谱峰，采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰的紫外－可见吸收光谱，吸收光谱应不同；若吸收光谱相同，则视为检出松香酸。如检出，则以外标法计算样品中松香酸的含量。色谱图见图2和图3。

图2 高效液相色谱图

图3 松香酸二极管阵列吸收图

2.2.4 方法学考察

精密度试验：取松香酸对照品溶液，连续进样5次。结果松香酸峰面积的 RSD为0.86%(n＝5)，表明仪器精密度良好。

线性关系考察：取质量浓度为 5.053 6 μg／mL的松香酸对照品溶液，分别进样 1，2，5，10，20，50 μL 测定。以峰面积（Y）为纵坐标、进样量(X，μg)为横坐标进行线性回归，得回归方程 Y＝2.304 9 X－1.307 1，r＝0.999 9(n ＝6)。结果表明，松香酸进样量在 5.053 6 ～252.680 0 μg范围内与峰面积线性关系良好。

空白试验：按处方自制消肿片样品，按2.2.3项下方法测定。结果未检出松香酸，表明该方法无干扰。

稳定性试验：取供试品溶液 1份，分别于0，2，4，8，12，24 h时测定，记录峰面积。结果的 RSD为 0.34%(n＝6)，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

重复性试验：称取同一批(1号)样品6份，分别测定松香酸含量。结果平均含量为1.624 4 mg／g，RSD为0.77%(n＝6)，表明方法重复性良好。

加样回收试验：取已知松香酸含量的消肿片样品(松香酸含量为 1.624 4 mg ／g)约 0.1 g，共 9 份，分别加质量浓度为 0.051 8 g／L的对照品溶液 3 mL，为0.103 6 g／L 的 3 mL，为 0.051 8 g／L 的 10 mL，再分别精密加入乙醇20，20，10 mL，称定质量，依法制备供试品溶液，测定松香酸的含量，计算回收率。结果见表1。

表1 松香酸加样回收试验结果(n＝9)

检出限和定量限测定：分别精密量取质量浓度为0.005 054 g／L 和 0.050 540 g／L 的松香酸对照品溶液各2 mL置锥形瓶中，再分别加入自制消肿片样品0.203 3，0.202 6 g，依法制备供试品溶液，测定。结果松香酸色谱峰的信噪比(S／N)分别为4和13，方法的检出限为 0.05 mg ／g，定量限为 0.50 mg ／g。

耐用性试验：曾试验不同色谱柱[DIKMA Inertsil ODS－3 柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，资生堂 CAPCELL PAK C18MG 柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm)]，以及液相色谱仪Agilent 1260型液相色谱仪(DAD检测器)，其测定结果均一致。

2.2.5 样品含量测定

取不同厂家的样品，依法制备供试品溶液，测定，按外标法计算含量。结果5批消肿片中有4批未鉴别出枫香脂却检出了松香酸，只有1批鉴别出枫香脂而且未检出松香酸。详见表2。

表2 5批样品松香酸含量检测结果

3 讨论

3.1 展开剂选择

曾比较了中国药典中枫香脂鉴别项的展开剂正己烷－石油醚(60～90℃)－乙酸乙酯－冰醋酸(6∶2∶3∶0.2)，但枫香脂的主斑点 Rf值偏高，故采用原国家食品药品监督管理总局药品检验补充检验方法和检验项目批准件(批准件编号为2016005)中相关枫香脂中松香酸检查项补充检验方法的展开剂石油醚(60～90℃)－乙酸乙酯 －冰醋酸(9 ∶1∶0.1)[4]；同时，枫香脂的主斑点 Rf值约为0.6，展开效果较理想，且阴性无干扰。

3.2 流动相选择

曾参照枫香脂中松香酸检查项补充检验方法试验流动相乙腈－四氢呋喃－0.1%甲酸溶液(35∶25∶40)，但枫香脂在松香酸色谱峰相近保留时间处出现干扰峰，不易分离。

3.3 检测指标选择

现已有很多对处方中含有乳香和没药等树脂类原料药的中成药进行松香酸检查[4－8]和补充方法如聂俭林等[9]进行了消肿片的质量标准研究，对当归、地龙、五灵脂进行鉴别，对乌头碱进行限量检查，对士的宁进行含量测定，但尚无对消肿片进行松香酸检查和枫香脂鉴别研究的文献报道。本研究中收集5个厂家的5批消肿片，结果4个厂家的4批检出了不该有的松香酸，应为枫香脂、乳香、没药原料药带入，同时这4批却未检出处方中为君药的枫香脂，说明生产时未投料枫香脂或使用了假枫香脂。4批样品中松香酸的含量测定结果相差也很大，说明其原料的掺假程度也各不相同。可见，消肿片生产厂家未能有效控制原料药质量，市场上消肿片的质量参差不齐。本方法简单、可靠，可用于提高消肿片的质量标准。