HPLC法测定止眩胶囊中丹酚酸B的含量

山西省晋城市食品药品检验所，山西 晋城 048000

止眩胶囊由丹参、当归、延胡索、鸡血藤、莪术、蒲公英、石决明、薏苡仁、夏枯草、泽泻、续断、桃仁、醋三棱、川芎等14味药物组成，具有活血化瘀、通脉止眩等功效，适用于原发性高血压。该胶囊为医院制剂，原有质量标准较低，不能全面反映制剂质量状况，为更好地控制该制剂的内在质量，提高标准，拟增加含量测定等内容，方中以丹参为君药，走血分、通血脉，攻擅活血化瘀，现代医学研究表明，丹参具有扩张冠状动脉，增加冠状血流量，促进毛细管血管网开放，扩张血管等作用[1]。基于此，笔者选择丹参作为控制指标，建立了其有效成分丹酚酸B的含量测定方法。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Waters 2695高效液相色谱仪(2998二极管阵列检测器，美国Waters)；AUW120D型电子分析天平(日本岛津)；BRANSONIC 超声波清洗机(美国BRANSON)；Medium-s300超纯水器(四川优普超纯科技有限公司)。

1.2 材料 丹酚酸B对照品(批号：111562-201514，中国食品药品检定研究院)；止眩胶囊(批号：180101、180102、180103，自制)；乙腈为色谱纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取丹酚酸B对照品1.85 mg，置10 mL棕色量瓶中，加75%甲醇至刻度，摇匀，制得每1 mL含0.185 mg的溶液，即得。

2.1.2 供试品溶液的制备 取本品内容物1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率150 W，频率40 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，取续滤液，即得。

2.1.3 阴性对照溶液的制备按处方比例依法配制除丹参以外的阴性制剂，精密称取适量，按“2.1.2”项下方法制备阴性对照溶液。

2.2 色谱条件 色谱柱：Waters xterra C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：甲醇乙腈(3∶1)-1.0%甲酸溶液(34∶66)；检测波长：286 nm；流速：1 mL/min；进样量：10 μL。

2.3 含量测定方法学考察

2.3.1 专属性试验 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 μL，注入液相色谱仪中，记录色谱图(如图1所示)。试验表明，阴性对照溶液的色谱峰中，在丹酚酸B对应的位置上无干扰，专属性较强。

2.3.2 线性关系的考察 精密量取“2.1.1”项下对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、2.0 mL至2 mL量瓶中，用75%甲醇定容，得不同浓度对照品溶液，分别进样10 μL，测定峰面积积分值，以峰面积积分值为纵坐标，进样量ng为横坐标作图，得一直线回归方程：Y=1 102.1X-58097，r=0.999 9，表明丹酚酸B在进样量92.5～1 850 ng范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.3.3 精密度试验 取“2.1.1”项下对照品溶液，进样10 μL，连续进样6次，测定峰面积。结果丹酚酸B峰面积积分值RSD值为0.58%(n=6)，表明仪器的精密度良好。

2.3.4 重复性试验 取批号180101的止眩胶囊样品，称取6份，精密称定，按“2.1.2”项下方法制备溶液，测定峰面积积分值，计算平均含量为5.18 mg/g，RSD值为0.49%(n=6)。表明本方法重复性良好。

2.3.5 稳定性试验 取同一供试品溶液，在室温下放置，于0、2、4、6、8、10 h分别进样10 μL，并测定峰面积，结果RSD为1.32%(n=6)。表明供试品溶液在10 h内基本稳定。

2.3.6 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品(批号180101：5.18 mg/g)6份，分别精密加入丹酚酸B对照品适量，按“2.1.2”项下方法制备溶液，测定，计算回收率。结果见表1。

表1 丹酚酸B加样回收率试验结果

2.4 样品含量测定 取不同批号止眩胶囊3批(批号：180101、180102、180103)，按“2.1.2”项下方法制备溶液，进样测定，记录峰面积，计算样品中丹酚酸B的含量，分别为5.18 mg/g、5.20 mg/g、5.16 mg/g。

3 讨论

丹参为本处方的君药，丹酚酸B为丹参的主要有效成分[2-3]，故选择丹酚酸B作为控制本品质量的指标成分。

在流动相的选择上，考察了乙腈-0.1%磷酸溶液(22∶78)[2]，乙腈-甲醇-甲酸-水(10∶30∶1∶59)[3]和甲醇：乙腈(3∶1)-1.0%甲酸溶液(34∶66)的流动相体系，通过比较出峰时间、峰形、拖尾因子、分离度等，选择甲醇乙腈(3∶1)-1.0%甲酸溶液(34∶66)为本方法的流动相体系。

在提取溶剂及提取方式的选择上，考察了不同的提取溶剂(70%乙醇[2]、75%甲醇[4]、甲醇[5])以及提取方式(加热回流、超声处理、索氏提取)对所测组分提取效果的影响，综合考虑提取率以及操作的便捷性，确定提取方式为75%甲醇超声处理30 min。

上述三批止眩胶囊中丹酚酸B含量测定来看，结果重现性较好，表明本文所建立的方法适用于该制剂的质量控制，对于原药材、饮片的选择，制剂的生产，存储环境的控制以及有效期的考察等方面可以起到数据支撑的作用。