山东省菏泽市部分散养济宁青山羊肠道寄生虫检测

温海燕，董宝霞，孔 娜，葛仕豪，姜莉莉

（菏泽学院药学院，山东菏泽 274015）

济宁青山羊以性成熟早、常年发情、繁殖率高、毛色花型独特、羔皮优质而著称，是我国优良的皮肉兼用山羊品种，也是国家级畜禽遗传资源保护品种。在我国地方山羊品种中，济宁青山羊繁殖力最高，年产两窝或两年三窝[1]，另外吃草少、耐粗饲、易饲养、成本低，具有极高的饲养价值[2]。然而济宁青山羊在散养过程中易发生肠道寄生虫感染，由此引起消化道紊乱、腹泻、消瘦、贫血、发育不良、生长缓慢、抵抗力下降等症状，同时可诱发其他疾病，严重时甚至死亡，给济宁青山羊养殖带来巨大经济损失[3-4]。

为了解山东省菏泽市散养济宁青山羊肠道寄生虫感染情况，2019年3月，采集3家济宁青山羊散养户的32份新鲜粪便进行虫卵检测，以期为散养济宁青山羊肠道寄生虫的诊断及防制提供依据。

1 材料与方法

1.1 粪便样品

从菏泽市郓城县杨庄集镇孙庄村、刘庄村、冯庄村3家济宁青山羊散养户（编号为1、2、3）采集32份样品（表1）。把每份粪便样品分别装入干净的封口袋中，并做好编号和记录，带回实验室，放在4 ℃冰箱中保存待检。3家散养户卫生条件良好，主要以放养为主，在家中饲喂玉米秸秆、花生秧、玉米面、小麦麸皮等。

表1 3家散养户的济宁青山羊饲养数量及粪样采集数量

1.2 方法

1.2.1 目镜测微尺标定 按照《微生物学实验教程》中的显微镜测微尺的使用方法[5]，分别对10×物镜、40×物镜下的尺状、方格状目镜测微尺进行标定，并记录结果。

1.2.2 离心沉淀法检测 由于吸虫、棘头虫虫卵比重比水大，即使用自然沉淀法也可检测，而用离心沉淀法则可以提高工作效率。根据《动物寄生虫病学实验教程》中离心沉淀法的操作方法[6]，取新鲜粪便2 g，置于小烧杯中，加入20 mL清水，搅拌均匀，然后用两层纱布过滤；将滤液分装至离心管中，500 r/min离心3 min；倒去大部分上清液，留约1/2沉淀物的溶液量；用胶头吸管吹打均匀后，取1滴粪液于载玻片上，加盖玻片，在光学显微镜下观察；参照《动物寄生虫病学实验教程》中的羊寄生虫虫卵形态图片[6]和《兽医寄生虫病学》中的各种寄生虫虫卵大小[3]进行判定。

1.2.3 饱和盐水漂浮法检测 该方法根据比重不同，使比饱和盐水轻的虫卵漂于液体表面，以达到富集虫卵的目的，主要用于线虫卵、绦虫卵和球虫卵囊检测。根据《动物寄生虫病学实验教程》中饱和盐水漂浮法操作方法[6]，取新鲜粪便2 g，置于小烧杯中，加入20 mL饱和盐水，用玻璃棒搅拌均匀，然后用两层纱布过滤；将滤液分装至青霉素小瓶中，至瓶口稍隆起，但不要溢出，放上盖玻片，静置30 min；将盖玻片置于滴有甘油水的载玻片上，在光学显微镜下观察；参照《动物寄生虫病学实验教程》中的羊寄生虫虫卵形态图片[6]和《兽医寄生虫病学》中各种寄生虫虫卵大小[3]进行判定。

2 结果

2.1 目镜测微尺标定

10×物镜、40×物镜下，尺状、方格状目镜测微尺的标定结果见表2。

表2 目镜测微尺每个小格长度 单位：μm

2.2 离心沉淀法检测

利用离心沉淀法检测32份粪样，检出6份阳性粪样，检测到2种吸虫虫卵（图1）。根据虫卵形态和大小初步判定：前后盘吸虫卵，呈长椭圆形、灰色，内含大量卵黄细胞，大小为87.5 μm×52.5 μm；歧腔吸虫卵，呈卵圆形、褐色，有卵盖，大小为 27.5 μm×18.8 μm。

2.3 饱和盐水漂浮法检测

在32份粪样中，通过饱和盐水漂浮法，检出31份阳性粪样，检出8种虫卵或卵囊。根据形态和大小初步判定结果见表3、图2。

图1 离心沉淀法检测虫卵结果（400×）

表3 根据形态和大小初步判定的虫卵种类

2.4 总体感染情况

3个散养户的32份粪便样品中，均有虫卵被检出，感染率为100%。其中：线虫感染率最高，为90.6%；其次是球虫，感染率为81.3%；吸虫感染率最低，为18.8%（表4）。

表4 散养济宁青山羊不同肠道寄生虫感染情况

图2 饱和盐水漂浮法检测虫卵结果（400×）

2.5 混合感染情况

32份粪样品中，28份为混合感染，混合感染率为87.5%（28/32）。其中：2种寄生虫混合感染19份，占混合感染的67.9%（19/28）；3种混合感染5份，占混合感染的17.9%（5/28）；4种和5种混合感染各2份，均占混合感染的7.1%（2/28），见表5。

表5 散养济宁青山羊肠道寄生虫混合感染情况

3 讨论

粪便中的寄生虫检测应用最多的是饱和盐水漂浮法和离心沉淀法。饱和盐水漂浮法可用于线虫虫卵、绦虫虫卵、球虫卵囊的检测。该方法应用广，检出率高，易于操作。离心沉淀法可用于吸虫、棘头虫虫卵检测。该方法应用广，但检出率低，尽管沉淀时粪液已经过滤处理，但在沉淀虫卵的同时会同时伴有大量粪渣沉淀下来，因而增加了检出虫卵的难度。根据虫卵形态可以初步判定寄生虫种类，从而可以采取针对性药物进行驱虫。但是许多寄生虫的虫卵或卵囊形态相似，因而仅借助虫卵形态往往无法确定具体种类。本试验在根据虫卵形态鉴定的基础上，首次应用显微镜测微尺，对检测到的虫卵进行大小测定，摸清了不同种类寄生虫虫卵的大小特性，为寄生虫虫卵种类诊断提供了一种有效的方法，并为下一步虫卵的分子生物学诊断以及流行病学调查奠定了基础。

本调查从散养济宁青山羊粪便中检测到10种肠道寄生虫，寄生虫感染率高达100%，主要以线虫和球虫感染，感染率分别为90.6%和81.3%，并且2种寄生虫的混合感染最为普遍。朱丹等[7]报道河南省大尾寒羊中的肠道寄生虫有10种，总感染率为98.8%，其中球虫、圆线虫和鞭虫为主要感染虫种，并且混合感染也较普遍。睢攀博等[8]报道河南安阳市羊肠道寄生虫有7种，总感染率为66.93%，其中球虫等肠道原虫的感染率为57.16%，线虫、吸虫、绦虫等肠道蠕虫感染率为26.14%，并且2种肠道寄生虫的混合感染率最高。张文丽等[9]报道四川省凉山彝族自治州会理黑山羊肠道寄生虫有13种，其中线虫10种，感染率高达89.29%，其次为球虫，感染率为83.93%。闫晓菲等[10]报道新疆乌鲁木齐市羊肠道寄生虫有25种，其中球虫感染率最高，为71.38%，其次是线虫，感染率为36.53%。本检测结果与以上地区羊肠道寄生虫感染的种类及感染率有一定差异，但总体一致，这可能与本次检测的采样范围和数量偏少有关。不同研究发现的羊肠道寄生虫种类与感染率不同，其原因可能与羊的个体差异以及饲养管理情况以及地域和检测季节不同有关，需进一步开展研究。但上述研究均显示，羊肠道寄生虫感染普遍存在，因而需要加大羊肠道寄生虫防治力度，积极做好羊肠道寄生虫驱虫工作，保障羊养殖户的经济利益。

4 结论

经对山东省菏泽市3家济宁青山羊散养户的32份粪样进行检测，发现该地的散养济宁青山羊肠道寄生虫感染较为普遍，以线虫感染为主，其次为球虫，且多呈混合感染，因而该地散养户需要积极开展羊群驱虫工作，同时加强饲养管理，防止寄生虫感染。