硫辛酸对老年2型糖尿病肾病患者足细胞标志蛋白、明胶酶相关载脂蛋白、足细胞裂孔膜蛋白表达的影响

孟天宇 王颜刚

(1青岛大学附属医院内分泌与代谢病科，山东 青岛 266000；2山东省成武县人民医院内分泌科)

糖尿病肾病(DN)是糖尿病患者常见的并发症之一。对于老年2型糖尿病肾病(T2DN)，该病的发病机制复杂，包括蛋白激酶激活、多元醇旁路功能增强、糖基化终末产物蓄积、肾小球血流动力学异常、血脂代谢紊乱、细胞因子产生增多等环节都与该病的发生发展有关〔1～3〕。研究表明〔4～7〕，氧化应激反应与DN的发病机制有关，氧化应激反应增强，可引起肾小球损伤，同时也是DN其他病理环节共同的上游改变。因此，选择有效的药物来改善氧化应激反应是治疗DN理想的靶点。硫辛酸是一种抗氧化剂，具有较强的抗氧化作用。有报道〔8～10〕，硫辛酸可改善糖尿病肾病患者的临床症状，但具体机制还有待研究。本文将进一步研究硫辛酸对老年T2DN患者的作用及其可能的作用机制。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年9月至2018年9月青岛大学附属医院收治的96例老年T2DN患者临床资料。患者均符合中华医学会糖尿病学分会微血管并发症学组中DN防治专家共识(2014年版)诊断标准〔11〕。排除标准：①排除高血压肾病、慢性肾小球肾炎、泌尿系感染等疾病；②合并其他重大疾病的患者，如癌症、重度心律失常等;③合并精神疾病、心理疾病患者。采用随机数字表法将患者分为治疗组与对照组，每组各48例。治疗组，男26例，女22例；年龄61～85〔平均(70.23±10.32)〕岁。对照组男24例，女24例；年龄60～85〔平均(72.23±10.98)〕岁。两组性别、年龄相比差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 治疗方法 两组给予降糖等常规治疗，空腹血糖(FPG)控制在5.0～9.2 mmol/L、餐后2 h血糖(2 h PG)<10 mmol/L。治疗组在常规治疗基础上加用硫辛酸注射液治疗，具体如下：亚宝药业太原制药有限公司，批准文号：国药准字H20055869，规格：6 ml∶0.15 g)，静脉滴注，每天300～600 mg。用药时间均为2 w。

1.3 观察指标 清晨，分别采集所有患者治疗前和治疗后4 ml空腹静脉血，离心，取上层血清用于测定指标。①测定血糖、血压、血脂水平：FPG、2 h PG、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)。②测定肾功能指标水平：血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)，胱抑素(Cys)C、视黄醇结合蛋白(RBP)。③测定氧化应激指标水平：F2-异前列腺素类化合物(F2-aisoprostanes)，8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷(8-OHdG)、硝基酪氨酸(NT)、丙二醛(MDA)。④测定血清和尿中足细胞标志蛋白(PCX)、明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)、足细胞裂孔膜蛋白(Nephrin)。上述所有指标采用酶联免疫吸附试验(ELISA) 进行测定，试剂盒购自南京建成生物工程研究所，依据试剂盒说明书方法进行测定。

1.4 统计学方法 采用SPSS19.0软件进行t及χ2检验。

2 结 果

2.1 两组血糖、血脂、血压比较 治疗前，两组FPG、2 h PG、SBP、DBP相比，无明显差别(P>0.05)；治疗后，两组患者FPG、2 h PG、SBP、DBP水平均比治疗前降低，且治疗组FPG、2 h PG、SBP、DBP水平降低幅度比对照组大，差异均有统计学意义(P<0.05)。两组治疗前后TC、TG水平无明显变化(P>0.05)。见表1。

2.2 两组肾功能指标比较 治疗前，两组Scr、BUN、CysC、RBP相比无明显差别(P>0.05)；治疗后，两组Scr、BUN、CysC、RBP水平均比治疗前显著降低，且治疗组Scr、BUN、CysC、RBP水平降低幅度比对照组大，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

2.3 两组氧化应激指标水平比较 治疗前，两组F2-aisoprostanes、8-OHdG、NT、MDA水平相比，无明显差别(P>0.05)；治疗后，两组F2-aisoprostanes、8-OHdG、NT、MDA水平均比治疗前显著降低，且治疗组F2-aisoprostanes 、8-OHdG、NT、MDA水平降低幅度显著大于对照组(P<0.05)。见表2。

表1 两组血糖、血脂、血压比较

与对照组比较:1)P<0.05；与本组治疗前比较:2)P<0.05，下表同

表2 两组肾功能、氧化应激指标比较

2.4 两组足细胞相关指标的血清PCX、Nephrin、NGAL水平比较 治疗前，两组血清PCX、Nephrin、NGAL水平相比，无明显差别(P>0.05)；治疗后，两组PCX、Nephrin水平均比治疗前升高，且治疗组PCX、Nephrin水平升高幅度比对照组大，差异均有统计学意义(P<0.05)；治疗后，两组患者NGAL水平均比治疗前降低，且治疗组NGAL水平降低幅度显著比对照组大(P<0.05)，见表3。

表3 两组血清PCX、NGAL、Nephrin水平比较

3 讨 论

氧化应激反应与DN的发病机制有关，选择有效的药物来改善氧化应激反应是治疗DN理想的靶点。硫辛酸是一种强效抗氧化剂，具有水溶性和脂溶性，硫辛酸口服后可经胃肠道吸收进入体液循环，到达多种细胞和组织部位，从而发挥作用〔12，13〕。

RBP和CysC是经由肾小球代谢的两种小分子蛋白，当DN患者的肾功能发生损伤时，RBP和CysC经肾排泄发生障碍，故血清中RBP和CysC含量上升〔13～15〕。而Scr、BUN是反映肾功能的两个重要指标〔16～18〕。本研究发现，硫辛酸有助于改善老年T2DN患者的肾功能。

F2-aisoprostanes、8-OHdG、NT、MDA是氧自由基攻击生物膜、细胞器等生成的产物，故氧化应激反应的程度可由F2-aisoprostanes、8-OHdG、NT、MDA含量水平来反映〔19～21〕。本研究结果说明硫辛酸有助于缓解糖尿病肾病患者的氧化应激反应。

足细胞是一种高分化细胞，位于肾小球基底膜外侧，由足突、主突、细胞体三部分构成，是肾小球滤过屏障的最后一环〔22〕。足细胞的足突结构参与肾小球滤过这一环节。足突结构由肾小球基底膜、裂孔隔膜、顶膜区相连构成。研究表明，足突间PCX、Nephrin等多种蛋白质之间相互连接，共同构成裂孔隔膜蛋白复合体，从而维持足细胞骨架重塑、正常的形态及功能，对于保证肾小球滤过屏障功能的完整性具有非常重要的意义〔23，24〕。当氧自由基损伤足细胞时，足细胞的足突结构中PCX、Nephrin等多种蛋白质被破坏，破坏肾小球滤过膜完整性，肾功能障碍加重〔25〕。NGAL是一种分泌性蛋白。当发生肾损伤时，肾小管上皮细胞受到损伤性刺激，导致大量分泌NGAL，体内NGAL含量急剧升高，NGAL可可减轻足细胞损伤，同时引起肾小管间质中浸润的中性粒细胞发生凋亡〔26〕。本研究结果提示，硫辛酸治疗有助于增加足突结构中连接蛋白的含量，保护足细胞结构，改善肾小球的屏障功能。