Snail及E-cadherin在乳腺浸润性导管癌中的表达及其意义

张粉娟，王学春，李传伟，董兵卫，何会女，张渭波，代晓强

1.陕西省咸阳市中心医院病理科 (咸阳712000)；2.泰山医学院(泰安 271000)；

3.陕西省咸阳市中心医院肿瘤科(咸阳 712000)

乳腺癌(Mammary cancer)是威胁女性健康的主要病因，发病率占全身各种恶性肿瘤的7%～10%，属于最常见的恶性肿瘤之一。全世界每年大约有150万女性发生乳腺癌，死于乳腺癌的女性占1/3，它的发病常与遗传有关，并且与年龄存在一定的关系，尤其多发于40～60岁之间的女性。早发现乳腺癌，并且实施早期治疗，无疑是乳腺癌防治的最新发展方向。

目前，乳腺癌患者已经趋于年轻化[1]。E-钙黏素 (E-cadherin)是近年来研究的较多的一类肿瘤抑制因子,属于钙离子所依赖细胞粘附素家族中主要成员之一，是一类单拱桥的跨膜蛋白，大部分分布于胞浆区，主要表达于上皮细胞中,是乳腺癌的诊断标志。Snail是目前研究乳腺癌转移及复发的重要调控因子。由于Snail可通过上调波形蛋白、成纤维细胞特异蛋白和 Rho 蛋白表达或下调钙粘附蛋白E表达等途径导致肿瘤上皮间质化并促进肿瘤转移的发生，因而 Snail 高表达往往意味着肿瘤转移风险较大，且患者预后不良。Snail可以在E-cadherin缺失的肿瘤组织中表达，这就表明Snail可以作为肿瘤发生、进展过程中的重要因子。在组织中发现上皮-钙粘素(E-cadherin)与转录因子Snail的异常表达，可以判断肿瘤的良恶性，还可以促进肿瘤细胞的侵袭与转移。所以，本研究拟通过应用免疫组织化学SP法，检测乳腺浸润性导管癌患者癌组织与癌旁组织中Snail及E-cadherin的表达，分析Snail及E-cadherin表达之间的相关性，为临床对乳腺浸润性导管癌的发生、发展进行早期准确诊断、干预及治疗提供重要依据。

材料与方法

1 研究对象与样本分组 将我院55例乳腺浸润性导管癌患者作为研究对象。所有患者都是乳腺浸润性导管癌患者，并且所有患者均符合乳腺癌的临床诊断标准，全部患者在手术之前均未经过任何放、化疗及乳腺癌的相关治疗。55例患者年龄为23～61岁，平均年龄为42岁，病程1～3年，平均病程(1.6±1.4)年。所有患者的一般资料相比较，无统计学差异(P>0.05)，具有可比性。

2 方法及试剂 对所有患者复习原病理诊断资料，找出病理蜡块组织，重新切片，每例切片4张，进行免疫组化染色。根据Elston和Ellis乳腺癌组织学分级法[2-3]进行半定量评测分级。根据国际抗癌联盟和美国癌症联合会合作制定的第7版肿瘤TNM分期[4]对乳腺癌进行分期。组织学分类按照2003年WHO乳腺肿瘤组织学分类[5]进行分类。免疫组化采用SP法，所有试剂来自迈新生物公司和上海达克生物公司。

3 实验评判结果及统计学方法

3.1 实验评判结果:患者间E-cadherin及Snail的表达各不相同，E-cadherin 表达的阳性物质定位于细胞间连接和细胞膜处，以细胞膜着色为主。其中阳性肿瘤细胞数>90%为(),50%～90%为(),10%～50%为(+)，<10%为(-)，E-cadherin表达(+、-)均表示阴性表达，E-cadherin表达(、)均表示阳性表达[6]。Snail主要表达于细胞核/浆，按染色强度的深浅分为：棕褐色3分，棕黄色2分，淡黄色1分，无着色，0分。按着色细胞百分比分为：一个视野内着色细胞>76%为4分，51%～75%为3分，11%～50%为2分，1%～10%为1分，阴性0分。两项得分相乘，满3分为(+)，4分为()，5分以上为()。(-、+)为Snail阴性表达，(、)为Snail阳性表达[7]。

3.2 统计学方法:用SPSS13.0统计分析软件进行分析，计数资料采用卡方检验(χ2)，等级数据应用秩和检验。当P<0.05时差异具有统计学意义。

结 果

1 E-cadherin及Snail的表达情况以及相关性

1.1 E-cadherin及Snail表达情况：E-cadherin在实验组中阳性表达率为58.18%(32/55)，对照组中阳性表达率为98.18%(54/55)，两组比较差异有统计学意义(P<0.01)(图1～4)。Snail在实验组中阳性表达率为87.27%(48/55)，对照组中阳性表达率为12.73%(7/55)，两组比较差异有统计学意义(P<0.01)(图5～8)。

1.2 E-cadherin及Snail的相关性：由癌旁组织到乳腺浸润性导管癌组织，E-cadherin的阳性表达降低，而Snail的阳性表达增加，在乳腺浸润性导管癌组织中，Snail的阳性表达明显高于E-cadherin，因此E-cadherin和Snail的表达呈明显的负相关(r=-0.341，P<0.01)。见表1。

表1 E-cadherin及Snail在对照组及实验组中的表达

2 E-cadherin和Snail分别与乳腺浸润性导管癌临床病理特征的关系

2.1 E-cadherin的表达与乳腺浸润性导管癌临床病理特征的关系:E-cadherin的表达与患者是否绝经、乳腺浸润性导管癌肿瘤大小、ER无关联(P>0.05)，与患者年龄、乳腺浸润性导管癌组织学分级、HER-2相关，有统计学差异(P<0.01)。见表2。

2.2 Snail的表达与乳腺浸润性导管癌临床病理特征的关系:Snail的表达与患者年龄、乳腺浸润性导管癌肿瘤大小无关联(P>0.05)，与乳腺浸润性导管癌组织学分级、ER、HER-2相关，且差异有显著性统计学意义(P<0.01)。见表3。

表2 E-cadherin的表达与乳腺浸润性导管癌临床病理特征的关系

临床病理特征分组 E-cadherin[例(%)]-级、+级级、级(%) χ2值P值年龄(岁)大于35岁 2(3.64)14(25.45) 7.9710.005小于35岁 21(38.18)18(32.73)月经情况绝经前 12(21.82)19(34.55) 0.2820.595绝经后 11(20.00)13(23.64)乳腺癌肿瘤大小(cm)小于5 9(16.36)18(32.73) 1.5690.210大于5 14(25.45)14(25.45)组织学分级I级 8(14.55)2(3.64) 9.4940.009II级 12(21.82)17(30.91)III级 3(5.45)13(23.64)ER— 7(12.73)10(18.18) 0.8410.840+ 11(20.00)17(30.91) 3(5.45)4(7.27) 2(3.64)1(1.82)HER-2阳性 2(3.64)15(25.47) 9.1340.001阴性 21(38.18)17(32.73)

表3 Snail的表达与乳腺浸润性导管癌临床病理特征的关系

讨 论

肿瘤的发生、发展以及转移为一种多因素所造成的分阶段过程。肿瘤细胞的浸润转移是肿瘤患者死亡的重要因素。超过80%的肿瘤来源于上皮组织，在上皮源性的肿瘤中可以看到细胞间粘附和细胞极性的缺失。如用免疫组化法对头颈部肿瘤进行研究，结果会发现这些肿瘤组织中存在E-cadherin的表达减少，甚至缺失[8]。

E-cadherin是上皮细胞表面最重要的细胞间粘附分子之一，是典型的上皮性肿瘤的形成和浸润转移的抑制基因。E-cadherin介导的细胞粘附功能的缺失与所有上皮源性肿瘤细胞的分化、侵袭邻近组织和远处转移的过程有关，而且可能在肿瘤的早期发生发展阶段中产生重要的作用。上皮-间质转化(Epithelial-mesen-chymal transition,EMT)[9-10]可以减弱E-cadherin的细胞间的黏附，并且增加细胞的运动性，使细胞侵入周围组织。E-cadherin与乳腺癌诸多生物学标记因子的关系尚不十分明确[11]，与乳腺癌组织学分级具有一定的相关性[12]。

Rakha EA等利用免疫组化和组织芯片技术检测了E-cadherin在1665例乳腺侵袭性非小叶癌患者的表达水平，并且长期临床随访[13]。单因素分析显示，E-cadherin的表达与肿块体积大、组织学分级等不良预后因素有关系，与雌激素受体表达阴性和远处是否转移存在关系[14]。这个观点在本次实验中也得到了证实。

Snail已经被证明抑制E-cadherin的表达，在进展过程中触发EMT的发生,并且认为对Snail直接作用的靶基因是E-cadherin。Blanco等[15]分析了乳腺导管癌中的E-cadherin失活的不同机制，从而提出了Snail在人原位癌中的表达。EMT在肿瘤细胞的侵袭和远处转移中起着重要作用，因而成为肿瘤研究中的一个热点[16]。EMT的中心环节是细胞运动能力和细胞间连接的崩解，其最重要的标志是上皮性标志物E-cadherin的丢失[17]。有研究表明，在上皮细胞去分化中，E-cadherin表达往往下降，而这种下降受转录水平的调控[18]，E-cadherin在EMT的过程中具有双重作用：细胞的粘附和信号的转导。Snail可能通过抑制E-cadherin的表达诱发EMT[19]，从而使上皮间连接破坏，导致癌细胞间黏附松散，容易脱离原发灶而发生侵袭转移。复习相关文献，可知Snail高度表达于乳腺癌、胃癌、肝癌、结肠癌、宫颈癌[20]中。本文研究可提示Snail在乳腺浸润性导管癌中的表达是升高的，E-cadherin 的表达是降低的，两者呈显著的负相关，且二者均与乳腺浸润性导管癌的病理分级、HER-2的表达密切相关。

综上所述，Snail 及E-cadherin 的高表达是患者乳腺浸润性导管癌发生、进展以及转移的重要生物学标志。Snail 及E-cadherin 的有效检测，对于乳腺浸润性导管癌的转移与预后，具有非常重要的意义，并且安全性较高。