妊娠期糖尿病患者脂肪细胞因子与TLR4/MyD88信号通路相关蛋白的关系研究及临床意义①

郭志利 姚玉英 姚克青 张 梅 于洪斌 苗莉娜 王 茹 尹晓琳

(石家庄医学高等专科学校微生物学和免疫学教研室,石家庄 050599)

目前，多数学者认为妊娠期糖尿病的进展同糖脂代谢异常变化紧密相关[1]，同时临床发现由脂肪组织释放的一系列脂肪细胞因子可对机体代谢活动产生影响，诱发胰岛素抵抗[2，3]；妊娠期糖尿病进展和慢性炎症存在一定关系，其中外周血单核细胞Toll样受体(TLR)可在多种免疫细胞表达，而活化后的TLRs通路则能将髓样分化因子88(MyD88)依赖性信号通路激活，使得机体过度释放促炎因子。TLR4属于TLRs家族中参与炎症反应的一种重要受体，其能够在肿瘤、肠道等多种疾病的炎症反应中发挥作用，在早期一项有关2型糖尿病小鼠试验模型的研究发现，其在小鼠体内高水平表达[4]。目前，临床尚无有关脂肪细胞因子与TLR4/MyD88信号通路在妊娠期糖尿病关系的研究。本研究旨在探讨妊娠期糖尿病患者脂肪细胞因子与TLR4/MyD88信号通路的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2015年2月至2017年12月于中国人民解放军白求恩国际和平医院诊断治疗的妊娠期糖尿病患者，共计79例为研究对象，所有入组患者均符合国际糖尿病与妊娠关系研究协会制定的有关该病的诊断标准[5]。年龄20～30岁，平均年龄(28.11±1.31)岁；平均体质量指数(27.32±3.20)kg/m2；孕周24～28周，平均孕周(27.29±0.58)周。

1.2标本采集与检测方法 采集所有入组人员晨起空腹肘部静脉血5 ml，3 500 r/min离心5 min，分离血清后保存血液标本于-20℃环境以备检测。采用流式细胞仪[富鲁达(上海)仪器科技有限公司]测定并分析两组入组人员TLR4/MyD88信号通路相关蛋白[TLR4、MyD88、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF-6)、核因子κB(NF-κB)、白细胞介素1β(IL-1β)]水平变化，其中抗体分别为TLR4抗体、MyD88抗体、TRAF-6抗体、NF-κB抗体、IL-1β抗体。采用积分光密度(IOD)值确定上述指标阳性表达的强弱，N_101B型双目生物显微镜(宁波永新光学股份有限公司)进行图像采集，Image Pro Plus4.5 图像分析软件进行图像分析。

1.3统计学方法 使用SPSS20.0软件对研究数据进行统计学分析，采用Pearson法分析观察组患者脂肪细胞因子与TLR4/MyD88信号通路相关蛋白(TLR4、MyD88、TRAF-6、NF-κB、IL-1β)相关性；同时采用回归分析TLR4/MyD88信号通路相关蛋白与糖代谢情况的关系。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1观察组患者糖代谢情况对脂肪细胞因子和TLR4/MyD88信号通路相关蛋白表达相关性分析 经Pearson法分析，结果显示内脂素与MyD88、TLR4、TRAF-6、NF-κB以及IL-1β水平均呈正相关(r=0.348、0.479、0.137、0.069、0.225，P<0.05)；脂联素与MyD88、TLR4、TRAF-6、NF-κB以及IL-1β水平分别呈负相关(r=-0.317、-1.21、-0.24、-1.88、-1.33，P<0.05)；IL-6与MyD88、TLR4以及IL-1β水平分别呈正相关(r=0.712、0.612、0.254，P<0.05)，与TRAF-6、NF-κB水平分别呈现负相关(r=-0.553、-0.015，P<0.05)；TNF-α与MyD88、TLR4、TRAF-6、NF-κB以及IL-1β水平均呈正相关(r=0.564、0.598、0.284、0.447、0.601，P<0.05)，FBG、PBG、HOMA-IR分别与MyD88、TLR4、TRAF-6、NF-κB以及IL-1β水平均呈正相关(P<0.05)。

2.2观察组患者TLR4/MyD88信号通路相关蛋白与糖代谢回归分析 TLR4、MyD88、TRAF-6、NF-κB、IL-1β均与FBG、PBG以及HOMA-IR相关联(P<0.05)。见表1。

3 讨论

MyD88属于一种可溶性蛋白，亦属于机体细胞内含有TLR结构域的衔接蛋白之一，其能够在炎症反应中发挥明显作用，并可较好传输机体炎症通路中的信号，同时能够在先天性或获得性免疫应答反应中起关键作用，且TLR信号通路的传导亦离不开该蛋白因子的参与。当相关因子处于非激活状态时，MyD88-Toll相关蛋白复合物可较好同MyD88下游激酶IRAK相结合。目前，临床研究发现，TLR2、TLR4、TLR7、TLR8以及TLR9的信号转导均离不开上述途径，其中TLR4在TLRs家族中发挥重要作用，并能在其介导的炎症信号通路中起到明显的开关作用，而MyD88属于TLR4介导的炎症通路中的下游效应分子，联合机体内其他信号通路共同作用，使得IL-6、TNF-α等炎症相关基因发生转录，并形成炎症反应级联放大[6]。TLR4信号可传递至MyD88，并且通过MyD88依赖信号转导途径更加刺激内皮细胞中的NF-κB和丝裂原活化的蛋白激酶信号转导级联，导致进入胞核内的活化NF-κB启动核内相关基因转录，最终引发脂肪细胞因子水平异常表达。有研究指出[7]，TLR4/MyD88同卵巢癌的发生发展密切相关，该通路能够参与机体局部慢性炎症反应，导致该通路中的促炎、抗炎因子水平失衡，进一步导致疾病进展。本研究经Pearson法分析，结果显示脂肪细胞因子和TLR4/MyD88信号通路相关蛋白表达具有相关性。说明TLR4/MyD88通路参与妊娠期糖尿病的发生发展过程，且脂肪细胞因子与该通路中的相关蛋白水平变化具有密切关系。但本研究纳入样本数量少，有关TLR4/MyD88通路在妊娠期糖尿病中的确切影响机制有待后续大规模多中心的深入研究。

表1 TLR4/MyD88信号通路相关蛋白与糖代谢回归分析Tab.1 Regression analysis of protein and sugar in TLR4/MyD88 signal pathway

综上所述，妊娠期糖尿病的进展不仅与机体分泌的脂肪细胞因子存在一定关联，亦同MyD88/TLR4通路关系密切，而明确病因有助于临床治疗效果的提高。