Ki-67及Ezrin蛋白在原发性肝癌病理中的诊断价值研究

陈玮姗

(福建医科大学附属泉州市第一医院病理科，福建 泉州 362000)

原发性肝癌是临床上常见的恶性肿瘤，好发于40～50岁人群中，且男性发病率略高于女性[1]。原发性肝癌病因复杂，普遍认为与肝硬化、病毒性肝炎及黄曲霉素导管化学物质、环境等有关，发病早期临床症状缺乏典型性，多数患者确诊时已经是中、晚期，丧失了最佳诊疗时机[2]。Ezrin蛋白表达与多种恶性肿瘤的发生、发展及侵袭和转移等有关，具有相对的组织和细胞特异性，能了解细胞膜、胞浆肌动蛋白细胞骨架。同时，Ezrin蛋白能调节细胞急性、影响细胞迁移及细胞的生长。细胞核增殖抗原(Ki67)是一种与细胞增殖特异度有关的核抗原，能反映细胞增殖的活跃程度[3]。但是，Ki67及Ezrin蛋白在原发性肝癌患者中的表达及诊断价值研究较少。因此，本文采用随机对照方法进行研究，探讨Ki67及Ezrin蛋白在原发性肝癌病理中的诊断价值，现报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料：选择2015年5月～2018年5月治疗的原发性肝癌患者54例作为对象，患者均拟行手术治疗，手术过程中取病灶组织与癌旁组织(距离病灶≥5 cm)，分别设为观察组与对照组。男34例，女20例，年龄40～78岁，平均(61.25±5.85)岁；肿瘤直径1～9 cm，平均(4.52±0.86)cm；肿瘤分期：Ⅰ～Ⅱ期28例，Ⅲ～Ⅳ期26例；分化程度：高分化20例，中分化25例，低分化9例。选择同期入院治疗的肝脏良性疾病手术患者38例，设为空白对照组，其中男21例，女17例，年龄41～79岁，平均(56.85±5.61)岁。各组临床资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，有可比性。

1.2仪器与设备：见表1。

表1仪器与设备

仪器与试剂厂家倒置显微镜Nikon TS100,日本切片机香港Thermo Shandon T1离心机MSE MiSTRAL1000,英国基因引物上海博亚生物技术有限公司超低温冰箱Thermo公司紫外分光光度仪日本

1.3方法：采用免疫组织化学法测定各组Ki67及Ezrin蛋白阳性率。分别取观察组、对照组、空白对照组，加入蒸馏水与浓度为30.0%的H2O2，常温下加入内源性酶10 min灭火，PBS 3次洗涤。将最终获得的切片放置在0.01M枸橼酸盐缓冲液中，加入生理盐水控制溶液pH值最终为6。电炉加热直到煮沸，5 min间隔后再次煮沸，常温下冷却。采用PBS 2次洗涤，5 min/次，最后加入5%BSA封闭液并加入兔抗人Ki67及Ezrin蛋白一抗1滴。滴加完毕后进行3次PBS洗涤；1 ml底物中加入兔抗人Ki67及Ezrin蛋白二抗1滴，混合后常温下显色，苏木素复染后封片，倒置显微镜下观察细胞数量。每份标本测定三次，取平均值。

1.4判断方法：参考奥尔雷德评分标准分别从细胞的阳性数量(阳性细胞数≤25.0%0分，26%-50.0%1分，51%-75%2分，>75%3分)、染色强度(不着色0分，黄色1分，棕黄色2分，黄褐色3分)完成免疫组化染色评分，总分16分，阳性率越高[4]。

1.5统计学分析：采用SPSS18.0统计学软件处理数据，计数资料行χ2检验，采用率(%)表示，计量资料行t检验，采用均数±标准差表示，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1三组Ki67及Ezrin蛋白阳性率比较：观察组的癌旁组织中Ki67及Ezrin蛋白阳性率与对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)；观察组病灶组织中Ki67及Ezrin蛋白阳性率均高于其癌旁组织与对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2三组Ki67及Ezrin蛋白阳性率比较[例(%)]

组别例数Ki67蛋白Ezrin蛋白观察组 病灶组织5435(64.81)32(59.26) 癌旁组织543(5.56)①②4(7.41)①②对照组381(2.63)②2(5.26)②

注：与对照组比较，①P>0.05；与观察组病灶组织比较，②P<0.05

2.2观察组不同病理下Ki67及Ezrin蛋白阳性率比较：观察组原发性肝癌组织中Ki67及Ezrin蛋白阳性率与性别、年龄差异无统计学意义(P>0.05)；观察组原发性肝癌组织中Ki67及Ezrin蛋白阳性率与肿瘤大小、肿瘤分期及分化程度差异具有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3观察组不同病理下Ki67及Ezrin蛋白阳性率比较(例)

病理组织例数Ki67蛋白阳性(n=35)Ezrin蛋白阳性(n=32)χ2值P值性别男3422201.215>0.05女201312年龄≥60岁3020180.989>0.05<60岁241514肿瘤大小≥4 cm2724215.341<0.05<4 cm271111肿瘤分期Ⅰ～Ⅱ期281087.784<0.05Ⅲ～Ⅳ期262524分化程度低分化9876.291<0.05中等分化252021高分化2074

3 讨论

为了提高原发性肝癌患者临床确诊率，多数患者采用手术病理组织检查，并将其视为金标准，能为临床诊断提供依据和参考。Ki67是一种存在于增殖细胞的核抗原，在细胞周期的G2期和M期表达最好，而在G0期降解消失不表达，是能评估细胞增殖的有效标准。临床研究表明，Ki67与肝癌患者不良预后存在紧密的联系。动物实验结果表明，Ki67在肿瘤抑制术后的复发、转移中发挥重要的作用。Ezrin蛋白是膜蛋白骨架连接蛋白，是ERM家族成员之一。活化的Ezrin蛋白端与肌动蛋白骨架连接，并且N端能与多种跨膜分子相互结合。临床研究表明，Ezrin蛋白能参与细胞形态改变、细胞膜结构组建及细胞运动、黏附等相关信号，在肿瘤的发生、发展、黏附及侵袭中发挥了重要的作用。国内学者研究表明，Ezrin蛋白能与肿瘤表面黏附分子发生作用，有助于调节肿瘤细胞特性，影响肿瘤的分化、侵袭与转移。由此看出，Ezrin蛋白在肿瘤的发生、发展中能发挥重要的作用。本研究中，观察组病灶组织中Ki67及Ezrin蛋白阳性率均高于其癌旁组织与对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；观察组原发性肝癌组织中Ki67及Ezrin蛋白阳性率与肿瘤大小、肿瘤分期及分化程度差异具有统计学意义(P<0.05)，说明Ki67及Ezrin蛋白原发性肝癌患者中均呈高表达，能参与疾病的发生、发展。因此，原发性肝癌患者临床诊疗过程中可加强患者Ki67及Ezrin蛋白阳性率测定，根据测定结果评估患者疾病严重程度，指导临床诊疗；对于确诊的原发性肝癌患者，应立即采取有效的措施进行治疗、干预。

综上所述，Ki67及Ezrin蛋白在原发性肝癌患者中呈高表达，能反映患者疾病严重程度，能为临床诊疗提供依据和参考。