miR-21与胃癌的关系

2020-03-10 11:49苏利佳苏华华王艳华赵金映
生物技术通讯 2020年6期
关键词:标志物胃癌分子

苏利佳,苏华华,王艳华,赵金映

三峡大学医学院 形态学系,湖北 宜昌 443002

胃癌是起源于胃黏膜上皮的恶性肿瘤,具有较强的侵袭性和转移性,临床确诊时多数病情已进入晚期,预后极差[1]。寻找有益于胃癌早期确诊的新途径,将极大地改善胃癌患者的预后。其中,microRNA(miRNA)分子的结构及其在肿瘤进程中的功能引起了学者们广泛关注。这些由19~25个核苷酸组成的小分子可通过与靶基因3′非翻译区的完全或不完全配对,降解靶标基因mRNA或抑制其翻译而调控肿瘤细胞信号转导,在肿瘤细胞的增殖、凋亡、运动和侵袭中发挥重要作用[2-3]。

在这些miRNA分子中,miR-21参与胃癌的病理进程。miR-21定位于染色体17q23.2,紧邻空泡膜蛋白 1(vacuole membrane protein 1,VMP1)基因,在核糖核酸内切酶RNaseⅢ作用下,miR-21的前体pre-miR-21被剪切成前导链miRNA-21-5p和后随链miRNA-21-3p[4]。miR-21分子在胃癌组织和胃癌细胞系中呈高表达状态,它能与多种靶基因,如富含AT的特异性序列结合蛋白1(special AT-rich sequence-binding protein-1,SATB1)、程序性细胞死亡蛋白4(programmed cell death protein 4,PDCD4)、人10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10,PTEN)、凋亡蛋白酶激活因子1(apoptotic protease activating factor 1,APAF1)、金属蛋白酶抑制因子3(metalloproteinase inhibitor 3,TIMP3)和转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)相互作用,进而激活肿瘤增殖信号,促进肿瘤血管生成和肿瘤迁移[5]。此外,miR-21还可作为胃癌诊断标志物,用于评估胃癌的临床分期、分级及预后[6]。在此,我们就miR-21分子作为胃癌标志物、与胃癌增殖转移的关系,以及miR-21分子抑制剂研究进展做简要总结,通过梳理miR-21与胃癌间的相互关系,为胃癌研究相关学者提供参考。

1 miR-21可作为胃癌标志物

先前研究已发现miRNA在结构上高度保守,稳定地存在于各种体液中,可以作为疾病的生物标志物[7]。并且miRNA广泛存在于人体组织及体液中,各种疾病的不同状态下miRNA的表达情况也不同,因此临床医生或科研人员可以通过检测体液中的miRNA水平来诊断疾病和评估预后。Xu等[8]发现胃癌组织中miR-21-3p和miR-21-5p的表达均高于癌旁组织,在肿瘤浸润深度、淋巴结转移阶段,miR-21-3p和miR-21-5p均为高表达水平。miR-21-3p和miR-21-5p可作为胃癌诊断的潜在生物标志物,但在判断胃癌Ⅱ或Ⅲ期TNM分期中,miR-21-5p在区分肿瘤分化程度方面更有优势。

胃癌患者外周血中miR-21相对水平也显著高于健康人群,可作为胃癌血清学筛查的分子标志物[9]。miR-21与各临床病理特征均无相关性,但miR-21的高表达可影响胃癌的发生和患者的生存时间。如有学者选取胃癌患者50例,采集患者外周血标本,并以50例健康人作为对照,对比研究miR-21和miR-182基因在胃癌患者外周血和胃癌组织中的表达差异,结果发现胃癌患者外周血中miR-21和miR-182的相对表达水平明显高于正常健康人,且miR-21和miR-182的高表达预示着患者的生存时间缩短。

miR-21表达水平与胃癌预后关系密切。Sierzega等[10]发现,miR-130a、miR-331、miR-19a、miR-223、miR-106a、miR-21和miR-374在原发性肿瘤中过表达。而Obermannova等[11]发现胃癌组织中miR-10b、miR-21、miR-93和miR-107的表达水平明显高于非肿瘤组织,miR-10b、miR-21、miR-145表达升高与胃癌患者预后不良显著相关。Emami等[12]采用Real time PCR检测了30例胃癌患者和30例健康对照者血浆中miR-21和miR-222的表达水平,发现胃癌患者血浆中miR21和miR222的表达水平明显高于对照组,因而他们认为外周血循环中miR-21和miR-222水平可以作为胃癌诊断标志物。

miR-21还可作为胃癌腹膜转移的诊断标志物。临床研究发现,超过一半以上的胃癌晚期患者在根治性切除术后发生腹膜转移,是晚期胃癌患者死亡的首要原因之一[13]。Soeda等[14]研究了外泌体包裹的miRNA(ex-miRNA)在接受根治性手术的胃癌患者中作为微创生物标记物的有效性,发现miR-21与PDCD4的mRNA表达水平呈负相关,并且miR-92a与前列腺素E受体4的mRNA表达水平呈负相关。研究提示胃癌腹膜复发者与无腹膜复发者的ex-miR-21和ex-miR-92a水平有明显差异,因此ex-miR-21和ex-miR-92a可能成为预测Ⅱ/Ⅲ期胃癌患者腹膜复发和预后的有效的微创生物标志物。

miR-21参与PD-1/PD-L1通路介导的胃癌术后Th17/Treg细胞失衡。Zheng等[15]发现胃癌切除术后的患者Th17细胞减少,Treg细胞增多,PD-1/PD-L1表达增加;并且RORt和IL-17表达降低,而Foxp3和TGF-1表达升高。在体外实验中,通过Ad-sh-PD1沉默PD-1可以促进miR-21的表达,增加Th17细胞百分比,降低Treg细胞百分比。因此,miR-21的过表达增加了Th17细胞百分比,降低了Treg细胞百分比。这表明miR-21参与PD-1/PD-L1通路介导的胃癌术后Th17/Treg细胞失衡,如能有效监测胃癌切除术后患者miR-21表达水平,维持Th17/Treg细胞平衡,可有效改善患者预后。然而,当前的研究仍存在实验结果统计分析方法标准不统一,样本量较小的问题。如果合理应用检测手段监测其体内水平,即可将miR-21作为良好的胃癌诊断指标。

2 miR-21参与胃癌病理进程

研究发现,miR-21可负调控Smad7基因,促进胃癌细胞增殖和转移[16]。而Smad7是Smad家族成员,属于TGF-β超家族配体,参与细胞信号转导,发挥抑癌因子的作用。Smad7可以通过阻止Smad2/Smad4复合物的形成来阻断TGF-β信号的形成。Jiang等[17]研究表明Smad7在胃癌组织和胃癌细胞系中的表达水平降低,而敲除miR-21-5p基因后,Smad7基因表达上调,且SGC-7901细胞的增殖能力显著下降。另一项有关胃癌腹膜转移的研究也发现,外泌体miR-21-5p可以靶向下调Smad7的表达,从而诱导HMRSV5细胞的间皮-间充质转化(mesothelial-to-mesenchymal transition,MMT),促进胃癌的腹膜转移[18]。Xiao等[19]研究发现,用miR-21模拟物转染MGC-803细胞后,miR-21的表达上调可促进上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)进展。然而,转染miRNA-21抑制剂后E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白和波形蛋白的表达增多,胃癌细胞的EMT受到抑制。因此推测,在胃癌中miR-21的过表达可以通过沉默Smad7促进TGF-β途径,从而启动MMT,也可通过EMT影响胃癌细胞的迁移能力。

miR-21-5p促进胃癌的能量代谢[20]。Liu等[21]研究发现miR-21-5p在胃癌组织中显著上调,PDHA1在胃癌中的表达明显下调,两者表达程度为负相关。转染miR-21-5p模拟物的胃癌细胞乳酸产生增加,而转染其抑制剂的细胞乳酸产生减少,以上结果提示miR-21在胃癌中可能通过促进糖酵解,使胃癌细胞乳酸增加,具有促癌作用。进一步研究两者的关系发现,miR-21-5p能促进空白对照细胞的糖酵解,但不能促进PDHA1过表达细胞的糖酵解。而在抑制PDHA1表达的细胞中,miR-21-5p未能进一步增加糖酵解水平,说明miR-21-5p可以通过靶向调控PDHA1进而调节糖酵解,并且PDHA1的下调会促进胃癌糖酵解和从而影响胃癌的增殖分化。因此,通过调控miR-21-5p/PDHA1轴可以影响胃癌的糖酵解和进展过程是可行的。

miR-21参与激活胃癌增殖转移信号转导。Zhou等[22]发现沉默miR-21显著抑制了胃癌细胞的迁移和运动,这可能与波形蛋白的表达下调有关。研究还发现miR-21的下调促进了细胞凋亡,使细胞周期停滞于G0/G1期。进一步的研究表明,miR-21的下调使PTEN蛋白表达增加,但PTEN mRNA的表达无明显变化,进而降低了胃癌细胞中Akt的磷酸化。因此,miR-21可以通过调控PTEN/Akt信号通路来影响人胃癌细胞的增殖、运动和凋亡,有望成为治疗胃癌的靶点。

综上所述,miR-21可通过下调Smad7、PTEN、PDHA1信号,激活EMT进程,促进胃癌恶性发展。

3 抑制miR-21的相关研究

干扰或抑制miR-21信号的途径有miRNA抑制剂,病毒介导的pre-miRNA、sh-pre-miRNA,干细胞分泌的外泌体,以及人工包装miRNA的外泌体[23]。miRNA抑制剂在治疗肿瘤疾病中具有以下优势:首先,miRNA易穿过细胞膜;其次,由于缺少polyA尾,miRNA不具有免疫原性,不引发机体的免疫反应;第三,这些分子在体外和体内都相当稳定,可以通过对它们的进一步修饰以延长其生物半衰期。因此,有效开发miR-21抑制剂成为当前研究的热点。除了通过抑制miR-21表达激活PTEN/PI3K/mTOR信号轴外[24],抑制miR-21分子功能的途径还有以下3种方式。

3.1 受体蛋白相关抑制作用

FZD6(frizzled6)是卷曲基因家族的一员,是非典型的Wnt信号蛋白的受体。越来越多的证据表明,FZD6参与了肿瘤的发生发展,是肿瘤细胞体外增殖和迁移的重要调控因子[25]。Yan等[26]发现FZD6的过表达可以靶向抑制miR-21的促癌作用,与典型和非典型Wnt途径中miR-21依赖的效应相关。另外发现,FZD6在胃癌组织和胃癌细胞系SGC7901、AGS中的表达较正常胃组织和正常胃上皮细胞系GES-1下调。而集落形成实验显示,促进FZD6表达可显著抑制肿瘤生长,Transwell实验还发现FZD6的表达上调可显著抑制胃癌细胞的迁移能力。而转染si-FZD6的胃癌细胞与转染si-Control的细胞相比,表现出更强的细胞增殖和迁移能力。FZD6通过激活非典型的Wnt途径来抑制胃癌细胞的增殖和迁移。因此,FZD6具有靶向miR-21来抑制胃癌细胞增殖和迁移的作用。

3.2 环状RNA相关抑制作用

circHIAT1是一种重要的具有潜在抗肿瘤功能的环状RNA(circRNA),已被证明在肾癌中具有肿瘤抑制作用。Quan等[27]发现circHIAT1可以抑制miR-21在胃癌中的促癌作用,胃癌组织中circHIAT1的表达明显低于癌旁组织。细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)作为一种有丝分裂原活化的蛋白激酶通路,与胃癌细胞的生长和分化有关。PLCDH-circHIAT1转染MKN28和MKN45细胞后,细胞存活率下降,p53、p21表达水平升高,细胞凋亡。PI3K/AKT是经典的生存信号转导途径,调节着许多生物学过程,如增殖和凋亡。AKT通路在胃癌中经常被激活以促进胃癌细胞的生长,而PTEN通过抑制PI3K负向调节AKT通路。circHIAT1可以通过使miR-21表达下调来抑制胃癌细胞的增殖和EMT,并且抑制PTEN/PI3K/AKT和ERK信号通路发挥抗肿瘤作用。

3.3 lncRNA相关抑制作用

研究发现,在miRNA上长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)与mRNA有着共同结合位点,lncRNA可通过结合相应的结合位点吸附miRNA,作为内源竞争RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)与miRNA竞争性结合,消除miRNA的下游效应[28]。Li等[29]发现lncRNA生长特异抑制物5(growth arrest-specific 5,Gas5)在胃癌组织和细胞中低表达,miR-21在胃癌组织和细胞中高表达。与正常胃黏膜上皮细胞相比,胃癌细胞MKN45、MKN7和SGC-7901中Gas5的表达明显下调,miR-21的表达明显上调。双重萤光素酶报告显示miR-21降低了含有野生型3′非翻译区的Gas5的萤光素酶活性,但没有降低含有突变型3′非翻译区的Gas5的萤光素酶活性,这表明miR-21是MKN45细胞中Gas5的靶基因。Gas5的过表达和miR-21的抑制显著抑制了MKN45的增殖、迁移和侵袭,促进了胃癌细胞的凋亡,Gas5过表达和miR-21抑制显著降低Bcl-2蛋白表达,增加Bax和Caspase-3蛋白表达,进而降低了胃癌细胞的耐药性,促进了胃癌细胞的凋亡。Gas5转染胃癌细胞后,miR-21的表达明显降低,胃癌细胞的迁移受到明显抑制,体内实验结果与体外实验结果一致。因此,过表达Gas5靶向抑制miR-21表达,显著抑制胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭和成瘤,促进胃癌细胞凋亡。

母体表达基因3(maternally expressed gene 3,MEG3)是一种lncRNA,也是一种抑癌因子,在多种肿瘤组织中表达下调。Xu等[30]通过qRTPCR检测发现胃癌组织和细胞系中MEG3表达下调,miR-21表达上调,miR-21的表达受MEG3的负调控。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)是一类功能相关的含锌酶家族,能降解细胞外基质促进细胞侵袭。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在血管生成中起重要作用,促进内皮细胞增殖、迁移和侵袭。研究发现,转染lncRNA-MEG3的胃癌细胞与对照组相比细胞间接触更为紧密。MEG3的过表达降低了MMP-3、MMP-9和VEGF的表达,抑制胃癌细胞的EMT。MEG3过表达还使上皮细胞标志物E-钙黏蛋白的表达上调,间质细胞标志物N-钙黏蛋白、Snail蛋白和β-连环蛋白的表达下调来抑制EMT,使胃癌细胞迁移能力下降,而miR-21的过表达通过激活EMT促进AGS的细胞迁移。共转染lncRNA-MEG3和miR-21模拟物可拮抗MEG3对细胞迁移的抑制作用。因此,MEG3/miR-21轴通过抑制胃癌EMT而影响胃癌细胞的迁移能力。

有关抑制miR-21表达的上游调控分子总结于表1,然而当前研究尚存在一些问题:如实验中仅仅只关注了单个或几个miRNA水平的变化,并未反映整体水平的变化规律;又如一些miR-21抑制剂靶向特异性不高或存在脱靶问题,从而造成不良后果。但无论如何,研究针对miR-21的新药物,发现抑制miR-21的新靶点或新途径,未来应用于胃癌预防和治疗的前景广阔。

表1 抑制miR-21表达的上游调控分子

4 结语

miR-21分子与胃癌关系密切,它可通过多种途径促进肿瘤的进展。miR-21可作为胃癌早期诊断和预测术后复发的重要指标。通过抑制miR-21分子功能而抑制胃癌进展的研究取得了一定成果,但存在病例样本数过少、体内模拟实验缺乏等问题,使miR-21分子在胃癌病理进程中的作用机制探讨稍显不足,尤其是各个调控通路的相关性和级联性还未被完全发掘。相信随着医学技术的进步和机制研究的深入,miR-21分子及其抑制剂应用于胃癌早期诊断和治疗的春天即将到来。

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