长链非编码RNA SchLAH在肝癌患者中的表达及与预后的关系

阿丽亚·热哈提 何方平

原发性肝癌是常见的恶性程度较高的肿瘤之一，据全球统计结果表明，原发性肝癌在男性恶性肿瘤中的发病率居第5位，病死率居第2位，在女性恶性肿瘤中的发病率和病死率分别居第7位和第6位[1]。目前临床上多采用手术切除、肝移植和索拉非尼化学治疗等方法治疗肝癌，但治疗后的复发率较高，预后较差，患者存活率较低[2]。因此，研究肝癌发生、发展的分子机制，对于肝癌的诊断和治疗策略的选择至关重要。长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度超过200个核苷酸，但无蛋白质编码潜能的RNA转录产物。随着对lncRNA研究的深入，越来越多的证据表明，lncRNA可调节一系列重要的病理生理过程，尤其是可参与肿瘤的发生、发展过程。值得注意的是，多种肿瘤中均可发现lncRNA异常表达，这些异常表达的lncRNA可以通过多种机制调节基因表达[3]。Ge等[4]研究发现，SchLAH可能通过与肉瘤融合蛋白(FUS)相互作用，抑制肝癌细胞的转移，提示SchLAH对于治疗肝癌具有重要意义。本研究对行肝切除术的96例患者的肝癌组织和癌旁组织标本进行分析，探讨SchLAH在肝癌患者中的表达及与预后的关系。

1 资料与方法

1.1 材料

收集2016年6月至2019年6月在新疆医科大学第一附属医院行肝切除术的96例患者的肝癌组织和癌旁组织的冰冻标本，并记录患者的病历资料。患者标本均经病理学诊断为肝癌。本研究经医院医学伦理委员会批准，入选患者的病历资料完整。96例肝癌患者中男性50例，女性46例；年龄为36～75岁，平均年龄为(53.16±9.47)岁；肿瘤>5 cm 34例，<5 cm 62例；甲胎蛋白(AFP)<20 μg/L 31例，≥20 μg/L 65例；临床分期Ⅰ～Ⅱ期 69例，Ⅲ期27例；伴淋巴结转移18例，远处转移4例。

1.2 方法

1.2.1 总RNA提取 取出于液氮中保存的肝癌组织及癌旁组织样本，快速转入研钵中研磨，注意保持研钵处于低温状态，研磨至粉末状后加入1 mL Trizol试剂。(1)均浆分相：取1 mL上述裂解过组织的Trizol液，转移至1.5 mL离心管中，室温静置5 min，加入200 μL三氯甲烷，剧烈震荡混匀，静置3 min后转移至离心机低温(4 ℃)离心，10 000 r/min离心15 min。(2)RNA沉淀：离心后取400 μL上层液体转移至另一支EP管中，加入等量异丙醇。静置15 min后置于离心机低温(4 ℃)离心，10 000 r/min离心15 min。(3)洗涤沉淀：弃上清液，加入1 mL 75%乙醇后将EP管上下颠倒2次，然后低温(4 ℃)离心，7 500 r/min离心5 min。弃上清液，于空气中干燥至RNA沉淀逐渐透明，加入40 μL无RNA 酶水溶解，于-70 ℃保存。

1.2.2 cDNA样品合成 吸取1 μg总RNA，使用Invitrogen公司的M-MLV Reverse Transcriptase kit进行反转录。cDNA于-20 ℃保存，作为下一步qRT-PCR的模板。

1.2.3 实时定量聚合酶链反应检测肝癌组织及癌旁组织中SchLAH的表达 实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)试剂购自中山大学达安基因股份有限公司。根据模板或引物配置 PCR 反应的混合液，严格按照实验步骤进行操作。采用Taqman 探针法检测SchLAH的表达值，以β-肌动蛋白作为内部对照的表达量，相对表达量采用比较CT法(2-△△CT)进行数据分析。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 SchLAH在肝癌组织及癌旁组织中的相对表达量分析

结果显示，SchLAH在肝癌组织中的相对表达量为3.13±0.63，显著低于癌旁组织(5.32±0.42)，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2 肝癌组织中SchLAH的表达与临床病理特征的关系

SchLAH的表达与肝癌患者的性别、年龄、AFP水平、肿瘤大小无关(P>0.05)，与临床分期、淋巴结转移、远处转移有关(P<0.05)。临床分期为Ⅲ期、合并淋巴结转移及远处转移者的SchLAH相对表达量比临床分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移及远处转移者低，且差异均有统计学意义(P均<0.05)。见表1。

表1 SchLAH的表达与临床病理特征的关系

3 讨论

肝癌是常见的消化系统恶性肿瘤，虽然近年来肝癌的治疗手段取得了显著进展，但患者的5年生存率仍然较低[5]。肝癌的发生是一个复杂的多步骤过程，其具体的分子机理目前尚不清楚。近年来研究发现，lncRNA参与了生物体内多种重要的生物学过程，并且在肝癌的发生过程中具有重要的调控作用[6-8]。Chen等[9]研究发现，lncRNA lncZic2通过蛋白激酶C底物MARCKS和MARCKSL1驱动肝癌起始细胞的自我更新，可能成为肝癌治疗的潜在靶点。Wang等[10]研究发现，信号转导与转录激活因子3(STAT3)介导的lncRNA可上调HOXD-AS1，促进肝癌细胞转移，对于肝癌的预后具有一定意义。因此，探讨lncRNA在肝癌中的转移机制有利于促进肝癌的有效诊断及治疗的发展，对提高肝癌患者整体预后也有重要作用。

随着研究深入，lncRNA在肝癌细胞转化和转移中的作用逐渐引起临床医生的重视。lncRNA既可起促癌作用，又可起抑癌作用。郑清盛等[11]采用Real-time PCR检测了7种与肿瘤相关的lncRNA，发现SNHG5、IGF2AS、PCA3、HIF-α在肝癌组织和癌旁组织中存在差异表达，尤其是lncRNA IGF2AS表达的差异最为显著，其在肝癌的发展及预后研究中有重要意义。邢宏松等[12]的研究发现，在肝癌细胞中lncRNA NEAT1呈高表达，沉默lncRNA NEAT1表达可抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭，其机制可能与调控miR-211/SATB2信号通路有关。郭鹏等[13]的研究显示，lncRNA CCAT2在肝癌组织及细胞系中均呈高表达，可促进细胞增殖及转移。吕细林等[14]的研究发现，lncRNA H19通过促进miR-124-3p表达，进而抑制其靶基因Cyclin D1表达，从而抑制肝癌细胞增殖，发挥抑癌作用。本研究发现，SchLAH在肝癌组织中的相对表达量显著低于癌旁组织，提示SchLAH在机体内可能发挥抑癌作用。

肝癌患者经治疗后的复发率、转移率均较高，患者生存率较低，预后较差。本研究对肝癌组织中SchLAH的表达与临床病理特征的关系进行了探讨，以期为肝癌的预后及诊疗提供新的途径。本研究结果显示， SchLAH的表达与临床分期、淋巴结转移、远处转移有关，SchLAH低表达可促进肿瘤发展、淋巴结转移及远处转移。提示SchLAH的表达与患者的预后密切相关，其或许可成为一个潜在的、有重要临床意义的肝癌分子标志物或治疗靶点，对于肝癌的诊断、治疗及改善预后具有重要意义。Ge等[4]研究发现，肝细胞癌中SchLAH的表达普遍下调，SchLAH的低表达与肝癌患者较短的总生存期显著相关，且该研究还提示SchLAH可能通过与FUS相互作用，从而抑制肝癌细胞的转移。本研究的不足之处在于未能进行较长时间的随访，SchLAH对预后的价值还需进一步随访研究。

综上所述，lncRNA SchLAH在肝癌组织中相对低表达，且与临床分期、淋巴结转移及远处转移有关。