抗环瓜氨酸肽抗体检测在类风湿性关节炎中的应用

冯丹丹，李晶晶

(河南科技大学临床医学院/河南科技大学第一附属医院 中心实验室，河南 洛阳 471000)

抗环瓜氨酸肽抗体(cyclic citrullinated peptide，CCP)是一种自身抗体，以环化瓜氨酸多肽为抗原，已有研究证明，其对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)有较高的敏感性和特异性，可作为RA早期诊断的高度特异指标[1]。抗CCP抗体临床检测多采用酶联免疫吸附法，其检测原理是将含有抗CCP抗体的待测血清与微孔板上包被环化瓜氨酸多肽抗原结合，加入酶标记抗人lgG，形成CCP-抗CCP抗体-酶标记抗人lgG复合物，再加入底物显色，显色深浅与抗CCP抗体水平成正比，用不同浓度抗CCP抗体标准品制作标准曲线，对抗CCP抗体进行定性和定量[2-3]。RA是一种以炎性滑膜炎为主要临床表现的慢性风湿免疫性疾病，其发病原因尚不明确，可能与自身免疫因素、感染、遗传因素等有关，临床诊断多依赖于症状、实验室检测及影像学检查[4]。RA患者发病2 a内即可出现不可逆的骨关节破坏，严重危害患者运动系统并可累及全身其他重要脏器，给工作和生活带来沉重负担[5]，因此RA的早期诊断对本病的预后具有非常重要的作用。有报道指出，抗CCP抗体可较早的在RA患者血清中被检测到[6]。本研究旨在进一步分析及评价抗环瓜氨酸肽抗体检测在类风湿关节炎中的临床应用。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2017年8月至2019年9月于河南科技大学第一附属医院就诊的RA患者150例为研究对象，设为观察组，选取同期入院治疗且年龄段一致的非RA自身免疫性疾病患者150例为对照组A；同期入院体检且年龄段一致的健康人150例为对照组B。观察组男56例，女94例，年龄37～66岁，平均(46.6±7.1)岁，病程1～8 a，平均(2.3±0.8)a；对照组A男57例，女93例，年龄37～66岁，平均(44.9±6.7)岁，非RA自身免疫性疾病包括系统性红斑狼疮患者30例、混合型结缔组织病28例、进行性系统性硬皮病28例、干燥综合征41例、原发性胆汁性肝硬化11例、特发性血小板减少性紫癜12例；对照组B包括男56例，女94例，年龄37～66岁，平均(46.6±6.9)岁。3组患者性别、年龄等一般资料比较，差异无统计学意义(均P>0.05)。

1.2 入组标准观察组患者诊断依据参照1978年美国风湿病学会制定的类风湿性关节炎诊断标准[7]和2015年美国风湿病学会/欧洲抗风湿联盟发表的痛风分类标准进行RA的临床诊断[8]；对照组A各类型的自身免疫性疾病诊断依据均参照国内或国际相应的诊断标准[9]；对照组B均为健康人群。观察组和对照组A两组患者的临床信息均收集完整，本研究经医院医学伦理委员会通过，所有研究对象均自愿签署知情同意书，排除药物过敏者、合并其他脏器严重功能障碍者、活动性感染者、意识障碍不能配合者及临床病例资料不全者。

1.3 检测方法对3组研究对象均进行CCP及类风湿因子(rheumatoid factor，RF)检测，所有研究对象清晨空腹，采集静脉血2～3 mL(红色促凝真空釆血管，河北超然医疗器械有限公司生产)，待血标本凝固后，以离心半径10 cm，3 000 r·min-1离心处理5 min，取上层血清立即检测或分离血清-20 ℃冷冻保存备用。采用欧蒙(德国) 医学实验诊断有限公司生产的抗CCP 抗体定量检测试剂盒检测抗CCP 抗体，检测方法为酶联免疫吸附法，严格按试剂盒说明书进行操作；采用罗氏cobas 800全自动生化分析仪测定血清RF，试剂盒及配套质控品由贝克曼库尔特商贸(中国)有限公司生产，检测方法为免疫比浊法，检验操作严格按照实验室制定的SOP进行。

1.4 观察指标比较3组患者的抗CCP抗体与RF水平，分析抗CCP抗体与RF的相关性，及其在RA诊断中的敏感性及特异性。抗CCP抗体与RF的阳性标准：抗CCP抗体≥45 U·mL-1即为阳性，RF≥20 IU·mL-1即为阳性[10-11]。

2 结果

2.1 3组抗CCP抗体和RF阳性率间的比较观察组患者抗CCP抗体阳性率和RF阳性率均高于对照组A、对照组B，差异有统计学意义(均P<0.05)；对照组A抗CCP抗体和RF阳性率均高于对照组B，差异有统计学意义(均P<0.05)。见表1。

表1 3组抗CCP抗体和RF的阳性率比较[n(%)]

注：与对照组A比较，aχ2=177.12，P<0.001；bχ2=31.91，P<0.001；与观察组比较，cχ2=215.91，P<0.001；dχ2=89.75，P<0.001；与对照组B比较，eχ2=8.04，P=0.004；fχ2=16.68，P<0.001；抗CCP抗体—抗环瓜氨酸肽抗体；RF—类风湿因子。

2.2 抗CCP抗体和RF对RA的诊断价值分析受试者工作特征曲线分析显示，抗CCP抗体诊断RA的最佳临界点为41.75 U·mL-1，曲线下面积为0.90，敏感性为78.75%，特异性为93.25%；RF诊断RA的最佳临界点为20.39 IU·mL-1，曲线下面积为0.74，敏感性为88.33%，特异性为79.89%。见图1。

2.3 观察组患者抗CCP抗体和RF的相关性分析相关性分析结果显示，观察组患者抗CCP抗体与RF水平呈正相关(r=0.916，P<0.001)。见图2。

图1 抗CCP抗体和RF对RA的诊断价值分析

图2 观察组患者抗CCP抗体和RF的相关性分析

3 讨论

RA是一种以炎性滑膜炎为主要损害的慢性自身免疫性炎症性疾病，目前病因尚未完全明确，临床主要表现为晨僵、关节畸形、手足腕踝等关节炎症，且易反复发作，预后不良，多出现关节强直、功能严重障碍[12]。如不及时治疗，可累及运动系统、心肺肾等重要脏器，由此引发一系列并发症，如心包炎、坏死性脉管炎、贫血、干燥综合征等，致残率极高，严重影响患者生活质量。根据疾病的易复发及预后不良等特点，RA治疗关键还在于早发现及早预防，因此对RA的早诊断、早治疗及功能锻炼等对RA患者至关重要[13]。

RF是RA患者血清中的自身免疫性抗体，与IgG FC片段上的抗原表位结合，是目前公认的诊断RA的主要标准之一，敏感性高，但特异性低，除了在RA患者可被检测到，还可在其他风湿性疾病及一部分健康人血清中被检测到[14-15]。抗CCP抗体也是RA患者血清中的自身免疫性抗体，其本质是环状聚丝蛋白的多肽片段，抗CCP抗体具有较高的特异性及敏感性，可作为RA筛查的可靠指标[4]。本研究中，观察组患者抗CCP抗体阳性率和RF阳性率均高于对照组A及对照组B；抗CCP抗体和RF在RA患者的敏感性及特异性分别为78.75%、93.25%和88.33%、79.89%。Iannone等[15]的研究结果也显示，抗CCP抗体对RA诊断特异性高达90%以上，敏感性为50%～80%。在牟晓月等[16]的研究中，抗CCP抗体在RA早期血清中即可被检测出，甚至早于RA患者临床症状而被检测到。本研究通过比较3组研究对象抗CCP抗体与RF水平，分析抗CCP抗体与RF的相关性，提示了抗CCP抗体在RA的诊断中具有较好的敏感性及特异性。

抗CCP抗体是诊断RA较好的血清学标志物，具有较高的临床应用价值，研究结果还显示抗CCP抗体与RF呈正相关关系。但谷磊[6]认为抗CCP抗体诊断RA的敏感性较低，远不及RF，因此联合RF检测，可有效提高RA的诊断准确率。本研究出于临床应用研究的实验条件及病例采集等方面的限制，还有很多不足之处，只选取了抗CCP抗体与RF两种检测指标对RA实验室早期诊断进行研究；只选用了酶免法等实验方法，未采用更多实验方法进行检测分析，存在一定的局限性，仍需后续更加完善细致的研究。