血清HNL、CD64和PCT检测对细菌感染性疾病的临床诊疗

郭连峰 牟娜 刘兆玮 崔少勇 张长庚 董士民

(1衡水市人民医院检验科，河北 衡水 053000；2河北医科大学第三医院)

感染性疾病是临床最常见的一类疾病，也是临床上最容易误诊的一类疾病。能引发感染性疾病的病原体种类繁多，同时又缺乏可靠的实验室检测手段。随着我国人口老龄化发展、肿瘤患者的日趋增多、艾滋病的流行，医疗技术的进步，有创诊疗不断增加，感染率也在不断上升。在感染性疾病的诊疗中，关键在于能否在感染早期鉴别感染类型，从而使患者得到及时有效的治疗。这对于防止抗生素的滥用也是极为重要的〔1〕。在临床病例中，细菌感染是多见的，因此本研究在感染性疾病的病程的早、中、后期动态监测中性粒细胞载脂蛋白(HNL)、中性粒细胞 CD64、降钙素原(PCT)、白细胞计数(WBC)和C-反应蛋白(CRP)等在细菌感染患者治疗前后的表达水平，探讨HNL、CD64和PCT对细菌感染性疾病的诊断及抗生素治疗的指导作用。

1 对象与方法

1.1一般资料 随机选取2017年2月至2018年12月衡水市人民医院收治的210例感染性疾病病例，其中男118 例，女92 例，年龄18～91岁。根据就诊者的临床表现、影像学检查资料，实验室检测结果等，把这些患者归入细菌感染亚组 105 例和病毒感染亚组105 例。对照组选取同期健康体检者 80 例，其中男 46 例，女 34 例，年龄 24～87 岁。各组性别、年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)。排除肿瘤性发热、结缔组织病及自身免疫性疾病等。受试者采血前均未使用抗生素、激素及维生素类药物。

1.2试剂与方法 研究对象均于治疗前进行血清 HNL、PCT、全血 CD64、WBC 和 CRP 水平测定,细菌 感染亚组于应用抗菌药物治疗 72 h、7 d 后再次测 定血清 PCT、HNL、全血 CD64、WBC 和 CRP 水平。 血清中 PCT 水平通过上转发光免疫分析仪测定,由 北京热景生物技术有限公司提供配套试剂。 PCT 操 作步骤:取出检测卡编号,平衡室温;取一次性试管 编号,用微量加样器准确加入 100 μl 血清和 150 μl 样本稀释液,混合均匀;取混合后的 100 μl 液体加 入加样孔;室温放置 20 min 后上机测量。 HNL 测定 试剂由长春博德生物技术有限责任公司提供,测定 方法为酶联免疫法,操作过程严格按照试剂盒操作 规程进行。 CD64 指数通过 BD FACS calibur 流式细 胞仪测定,抗体均为 BD 公司提供,全血40 μl+20 μl CD64PE / CD45Percp 抗体混匀,避光放置 1. 5 h,在 混合物中用加样器加入 2 ml 荧光活化细胞分类计 (FACS)溶血剂,继续避光放置 20 min 上机检测。 WBC 水平采用日本希森美康公司生产的 sysmex XE-3000 测定。 全血 CRP 采用散射比浊法测定,由 深圳市国赛生物技术有限公司提供。

1.3统计学分析 采用SPSS13.0软件和MedCalc软件进行t检验。绘制受试者工作特征(ROC)曲线，计算PCT、BG和CD64联合诊断细菌感染性疾病的灵敏度和特异性。

2 结 果

2.1各组治疗前HNL、CD64、PCT、WBC和 CRP检测结果比较 细菌感染亚组治疗前HNL、CD64、PCT、WBC和CRP水平分别与病毒感染亚组和对照组比较，差异均有统计学意义(均P<0.05)。病毒感染亚组与对照组无明显差异(P>0.05)，见表1。

2.2细菌感染组治疗前后HNL、CD64、PCT、WBC和 CRP检测结果比较 细菌感染亚组治疗后HNL、CD64、PCT和WBC水平与治疗前比较均有不同程度下降，差异有统计学意义(均P<0.05)，治疗72 h后CRP水平较治疗前明显升高(P<0.05)，治疗7 d后CRP水平较治疗前明显下降(P<0.05)。见表2。

2.3HNL、CD64和PCT各指标及联合检测的ROC曲线 见表3，图1，2。

表1 治疗前HNL、CD64、PCT、WBC和CRP检测结果的比较

与细菌感染亚组比较：1)P<0.05

表2 细菌组在治疗前、后HNL、CD64、PCT、WBC和 CRP检测结果的比较

与治疗前比较：1)P<0.05

表3 几种指标诊断细菌感染的ROC曲线

图1 HNL、CD64和PCT检测的ROC曲线

图2 HNL、CD64和PCT联合检测的ROC曲线

3 讨 论

诊断感染性疾病主要依靠病原学检测，但培养周期长，还存在一定的假阳性和假阴性〔2〕，大多数就诊患者在病原学检测前均已经接受过抗生素治疗，大大影响了病原体的检出率。传统的WBC及分类、CRP作用也是有限的，容易受多种非感染因素的影响，其特异性、灵敏度和准确性都较低。在全身严重感染时，骨髓增殖受到抑制，WBC无法反映感染的真实情况。CRP在感染初期水平可能仍维持正常。

HNL是活化中性粒细胞的释放产物，在血清中的半衰期为10～20 min。HNL 感染后 6～8 h即开始升高，24～48 h达到峰值，可以实现床旁检测，检测方便快捷。HNL水平升高可以用来鉴别诊断细菌感染和病毒感染，且有较高的敏感性、特异性〔3〕。HNL与传统方法相比有很大优势，可以及时指导临床用药，调整用药方案，治疗后患者细菌感染已消除，HNL水平降低，这时可以提示临床医师解除患者的抗生素治疗〔4〕。郭靓等〔5〕研究证明在急性细菌感染中HNL升高最明显，具有较强的特异性和较高的准确率。

CD64在正常情况下，主要分布于巨噬细胞、单核细胞和树突状细胞等抗原递呈细胞(APC)表面。中性粒细胞表面CD64几乎不表达，且其表达无性别差异〔6〕。当人体受到细菌感染时，中性粒细胞表面分子 CD64 表达水平会在4～6 h内显著升高，激活中性粒细胞的功能。所以CD64表达增加可以认为是中性粒细胞活化的标志，可以当作是感染性疾病良好的诊断指标〔7〕。当病原体被消除时，CD64 可快速恢复正常。CD64 的稳定性较好，影响因素少，表达水平与感染程度成正比。病毒感染和非细菌感染所引起的炎性反应，均不会造成中性粒细胞 CD64 表达水平的增高。有研究表明 CD64 可指导临床抗生素的使用，有可疑感染的病人如果在24 h内CD64的表达水平不上调，则可停止抗生素的使用，不必依赖微生物学检测结果〔8〕。

PCT是没有激素活性的降钙素前肽物质，在健康个体中浓度非常低。健康人血清中PCT的半衰期为25～30 h，PCT 在严重感染后 6～12 h 内迅速升高，在感染控制后迅速下降。微生物感染时PCT 升高，其并不是由甲状腺分泌，而是由机体所有组织和不同类型的细胞(巨噬细胞、单核细胞)持续合成和释放〔9〕。

本研究可能是由于CRP 在炎症消退后 1～2 d内仍会维持较高水平。可见动态监测血清HNL和PCT、外周血CD64 表达，在感染早期可以鉴别细菌感染、判断机体感染的严重程度，在治疗中可及时评价治疗效果，指导用药〔10～12〕。本研究结果可见HNL、CD64和PCT 联合检测对细菌性感染和病毒性感染具有重要的鉴别诊断意义。由于HNL、CD64 和 PCT三个检测指标在感染发生时出现的时间略有不同，在患者体内持续时间长短也不同，而患者感染后到医院进行检测的时间点也不同，所以三项指标联合检测可以提高诊断效能，几种指标的联合诊断可以结合不同诊断指标的优点，弥补单独诊断时灵敏度特异度不高的缺点，对细菌感染的早期鉴别诊断、病情的评估及治疗过程中的疗效观察具有重要的意义。

目前，HNL、PCT两者均可以实现床旁检测，尤其 PCT在实验室的检测和临床的应用比较广泛，其操作方便、周期短且具有一定的特异度、灵敏度和诊断正确率，对细菌感染疾病的诊断效能比较高。所以将HNL、CD64与PCT联合检测能更加有效的诊断细菌感染性疾病，适合在临床诊断中推广应用。